Journal
/
Genetics
/
Udvælgelsesafhængig og uafhængig generering af CRISPR / Cas9-medierede Gene Knockouts i Pattedyrceller
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

Udvælgelsesafhængig og uafhængig generering af CRISPR / Cas9-medierede Gene Knockouts i Pattedyrceller

DOI:
10.3791/55903-v

•

11:35 min

•

June 16, 2017

•

, ,
1Cell Biology and Neuroscience,University of California, Riverside

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:57Transfection of CRISPER Component into Cultured Cells and Drug Selection
  • 02:31Isolation of Clonal Populations
  • 03:53Screening Candidates by Dot Blot
  • 06:30Screening Candidates by Colony PCR
  • 08:59Results: Knockout Cell Lines Generated by Two CRISPER/Cas9 Methods
  • 10:40Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Nylige fremskridt i evnen til at genetisk manipulere somatiske cellelinier har stort potentiale for grundlæggende og anvendt forskning. Her præsenterer vi to metoder til CRISPR / Cas9 genereret knockout produktion og screening i pattedyrcellelinjer, med og uden brug af selekterbare markører.

Tags

CRISPR/Cas9Gene KnockoutNonhomologous End JoiningHomology-directed RepairT-REx-293 CellsTransfectionDrug SelectionClonal Isolation

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Opdræt og dobbelt-strenget RNA-medieret Gene Knockdown i Skjul Beetle,<em> Dermestes maculatus</em

Under anvendelse af et fluorescerende PCR-kapillær gelelektroforese Teknik til genotype CRISPR / Cas9-medieret Knockout Mutanter i et format med høj kapacitet

En standardmetode til at undersøge ejendommen mutagenicitet som en funktion af punkt Mutation reparation katalyseret af CRISPR/Cas9 og SsODN i humane celler

Generation af en gen-forstyrret Streptococcus mutans stamme uden Gene kloning

CRISPR/Cas9-medieret målrettede Integration In Vivo ved hjælp af en homologi-medieret End at deltage-baseret strategi

En protokol til produktion af Integrase-mangelfuld Lentiviral vektorer for CRISPR/Cas9-medieret gen Knockout i dividere celler

Effektiv produktion og identifikation af CRISPR/Cas9-genereret gen Knockouts i Model System Danio rerio

Formaldehyd-assisteret Isolation af regulerende elementer til foranstaltning kromatin tilgængelighed i pattedyrceller

Højeffektive gen afbrydelse af Murine og menneskelige hæmatopoietisk stamceller ved CRISPR/Cas9

Forberedelse og gen modifikation af ikkemenneske primat hæmatopoietisk stamceller og stamceller

Read Article