Denne protokollen beskriver trinnene for kloning av flere enkle guide-RNAer i en guide RNA-concatemer-vektor, som er spesielt nyttig for å skape multi-gen-knockouts ved hjelp av CRISPR / Cas9-teknologi. Genereringen av dobbelt knockouts i tarmorganoider er vist som en mulig anvendelse av denne metoden.