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Avançadas técnicas de microscopia Confocal para estudar interações da proteína-proteína e cinética de lesões do ADN
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions
DOI:

12:43 min

November 12, 2017

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:44Cultivation of HeLa-derived Cell Lines
  • 01:48Cell Transfection
  • 03:21Induction of Local DNA Lesions and Confocal Microscopy
  • 04:47Fluorescence Lifetime Image Microscopy
  • 06:24FRET Efficiency Using the FLIM-FRET Script
  • 07:48FRAP Analysis
  • 08:50Results: Analysis of Recruitment of mCherry-tagged PCNA and -53BP1 at DNA Lesions in HeLa Cells
  • 11:00Conclusion

Summary

Automatic Translation

Microirradiation do laser é uma ferramenta útil para estudos de reparo de ADN em células vivas. Uma abordagem metodológica para o uso de lasers UVA para induzir várias lesões do ADN é mostrada. Otimizamos a um método para microirradiation local que mantém o ciclo celular normal; assim, as células irradiadas prosseguir através de mitose.

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