Journal
/
Genetics
/
En Standard metode for å undersøke stedet genetisk virkning som en funksjon av punkt mutasjon reparasjon katalysert av CRISPR/Cas9 og SsODN i menneskeceller
JoVE Journal
Genetics
This content is Free Access.
JoVE Journal Genetics
A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

En Standard metode for å undersøke stedet genetisk virkning som en funksjon av punkt mutasjon reparasjon katalysert av CRISPR/Cas9 og SsODN i menneskeceller

DOI:
10.3791/56195-v

•

10:07 min

•

August 25, 2017

•

,
1Gene Editing Institute, Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute,Christiana Care Health Services, 2Department of Medical Sciences,University of Delaware

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:38Cell Line, Culture Conditions, and Harvest
  • 01:57Plating the Cells and Releasing Them from Aphidicolin Synchronization
  • 02:44RNA Complexing
  • 04:13Harvesting the Cells for Targeting
  • 05:30Targeting Samples
  • 06:13Analysis of Gene Edited Cells and Transfection Efficiency
  • 06:57DNA Sequence Analysis
  • 07:56Results: Effective Point Mutation Repair
  • 09:41Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Denne protokollen beskriver arbeidsflyten med et CRISPR/Cas9-basert redigering system for reparasjon av punkt mutasjoner i pattedyrceller. Her bruker vi en kombinasjon tilnærming til genet redigering med en detaljert etterarbeid eksperimentelle strategi for å måle indel formasjon på målområdet-i hovedsak analysere stedet mutagenese.

Tags

CRISPR/Cas9SsODNOn-site MutagenesisHomology Directed RepairGene CorrectionHTT116 CellsTrypan BlueHemocytometerAphidicolinEGFP GeneGuide SequencesCrRNATracrRNA

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

QTL-kartlegging og CRISPR / Cas9 redigering for å identifisere et stoffresistensgen i<em> Toxoplasma gondii</em

Ved hjelp av en Fluorescent PCR-kapillar-gelelektroforese teknikken for å genotype CRISPR / Cas9-mediert knockout-mutanter i en high-throughput-format

Utvalgsavhengig og uavhengig generasjon av CRISPR / Cas9-medierte Gene Knockouts i mammale celler

CRISPR/Cas9-mediert målrettet integrering i Vivo med en homologi-mediert slutten begynte-basert strategi

Effektiv produksjon og identifikasjon av CRISPR/Cas9-generert Gene Knockouts i modellsystem Danio rerio

Svært effektiv Gene avbrudd i Murine og menneskelig blodkreft stamfar celler av CRISPR/Cas9

En rask og lettvint rørledning for generering Genomic punkt mutanter i C. elegans bruker CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

CRISPR/Cas9 Gene redigering gjør betinget mutanter av menneskelig malariaparasitten P. falciparum

Endogene Protein merking i menneskelig indusert Pluripotent stilk celler med CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediert presis Genredigering av tube electroporation

Read Article