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Eine Standardmethodik, vor-Ort-Mutagenität als Funktion der Punktmutation Reparatur katalysiert durch CRISPR/Cas9 und SsODN in den menschlichen Zellen zu untersuchen
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A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells
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Eine Standardmethodik, vor-Ort-Mutagenität als Funktion der Punktmutation Reparatur katalysiert durch CRISPR/Cas9 und SsODN in den menschlichen Zellen zu untersuchen

DOI:
10.3791/56195-v

•

10:07 min

•

August 25, 2017

•

,
1Gene Editing Institute, Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute,Christiana Care Health Services, 2Department of Medical Sciences,University of Delaware

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:38Cell Line, Culture Conditions, and Harvest
  • 01:57Plating the Cells and Releasing Them from Aphidicolin Synchronization
  • 02:44RNA Complexing
  • 04:13Harvesting the Cells for Targeting
  • 05:30Targeting Samples
  • 06:13Analysis of Gene Edited Cells and Transfection Efficiency
  • 06:57DNA Sequence Analysis
  • 07:56Results: Effective Point Mutation Repair
  • 09:41Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Dieses Protokoll beschreibt den Workflow eines CRISPR/Cas9-basierte Gens editing-System für die Reparatur von Punktmutationen in Säugetierzellen. Hier verwenden wir einen kombinatorischen Ansatz zur gen Bearbeitung mit einer detaillierten Follow-on experimentelle Strategie zur Messung von Indel Bildung an die Ziel-Site-Analyse im Wesentlichen vor-Ort-Mutagenese.

Tags

CRISPR/Cas9SsODNOn-site MutagenesisHomology Directed RepairGene CorrectionHTT116 CellsTrypan BlueHemocytometerAphidicolinEGFP GeneGuide SequencesCrRNATracrRNA

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