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Um ensaio simples, rápido e quantitativo para medida de reparação de ADN-proteína ligações cruzadas em plasmídeos transfectadas em células de mamíferos
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JoVE Journal Genetics
A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells

Um ensaio simples, rápido e quantitativo para medida de reparação de ADN-proteína ligações cruzadas em plasmídeos transfectadas em células de mamíferos

DOI:
10.3791/57413-v

•

11:58 min

•

March 05, 2018

•

,
1Department of Pharmacology,University of Minnesota

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:18Generation of DNA-protein Crosslink Containing Plasmid
  • 06:21Transfection into Mammalian Cells
  • 08:39SSPE-qPCR
  • 10:02Results: Use of Strand-specific Primer Extension Based q-PCR to Quantify the DNA-protein Crosslinks
  • 11:08Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

O objetivo do presente protocolo é quantificar a reparação de ligações cruzadas de ADN-proteína definidas no plasmídeo. Lesado plasmídeos são transfectados em linhas de células de mamíferos destinatário e peso molecular baixo colhidas em vários pontos de tempo pós-transfecção. Cinética de reparo de DNA são quantificados usando a extensão de vertente específica da primeira demão, seguido por qPCR.

Tags

DNA-protein CrosslinksPlasmid DNAMammalian CellsDNA RepairTrans-Pacific Primer Extension QPCR AssayAdductsPolymerase BlockingHouse Cell Reactivation8-oxoguanineT4 Polynucleotide KinasePrimer ExtensionPhenol-chloroform Extraction

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