Neuroscience
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インビボシングルファイバー記録と無傷の後部根神経を用いて伝導障害のメカニズムを調べる
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Summary August 27th, 2019
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シングルファイバー記録は、中枢および末梢神経系に適用可能な効果的な電気生理学的手法である。付着した坐骨神経を持つ無傷のDRGの調製と共に、伝導障害のメカニズムが調べられる。両方のプロトコルは、末梢神経系と痛みとの関係の理解を向上させます.
Transcript
単繊維記録は、神経線維の活動を記録する上で重要な役割を果たしています。特に、受容的なフィールドから後根神経節のニューロンに末梢感覚を伝達する活動。ファイバー記録の波動では、自然刺激に対する応答を記録する能力を持つ持続時間の長さを提供し、そして後に細胞間環境の妨害であった。
単一の繊維記録では、状況のために中性子自動良い必要があります。セラピストは、坐骨神経が統合された統合されたDRGテストの準備のための要件を呼び出します。デモの状況の結果は、良好な、物理的なデカール段階で神経のほぼすべての詳細を示しています。
そして第3に、DRG調製全体が統合されている。この手順を開始するには、手術前にすべての手術器具を準備し、消毒します。その後、通常のリンガーの細胞外溶液の1〜2リットルを調製し、使用するまで摂氏4度で保存します。
坐骨神経幹を記録するために露出するには、まず、麻酔化されたラットの皮膚と大腿の後部の筋肉を切り開く。次いで、大腿二頭筋に沿って鈍い解剖を行う。眼科用はさみとガラス分離針を用いて坐骨神経幹を慎重に分離し、リンジャーの溶液を用いて組織を湿らせ続ける。
次に、その周りのスロットに皮膚を縫うことによって、自家製の金属フープに動物を固定します。皮膚を少し引き上げて、流動的な風呂を確立します。近位側で坐骨神経幹の1センチメートルを露出させる。
細かい神経幹をはっきりと観察するために、コントラストを高めるために、小さな茶色のプラットフォームを神経幹の下に置きます。続いて、神経幹の上部に温かい液体パラフィンを塗布して、繊維表面の乾燥を防止する。神経幹の周りに滲出がある場合は、流体を取り除きます。
記録を行う場合は、白金フィラメントを記録電極として選択します。最後に食べて小さなフックを作ります。その後、電極をマイクロマニピュレーターに取り付けます。
浴槽で、皮下組織の隣に参照電極を置きます。脊髄硬膜とピア・マーターを分割し、坐骨神経を得る。25%倍率のステレオ顕微鏡の下で、細かい魅惑を拾い、記録電極のフックに軸索の近似端部を吊るします。
機械的なシミュリスと熱刺激を使用して、単一の非概念的なc繊維の受容フィールドを特定します。神経線維の発火が機械的刺激と熱湯に反応する場合は、それをポリモト、非概念的なc繊維と考えてください。次に、電気刺激の送達のために、2ミリ間隔の針刺激電極を識別フィールドの皮膚に挿入する。
オシロスコープ上のアクション電位の波形を表示し、信号サンプリングレート20キロヘルツのdボードをコンピュータに採用します。次に、データ取得ソフトウェアを使用してスパイクを記録し、後でプロのソフトウェアで分析します。伝導破壊を測定するために、異なる周波数の繰り返し電極刺激を60秒間cファイバに送達します。
繊維が刺激の間にリラックスするために10分間隔を許可します。次に、送達反復刺激パルスの数に対する故障数の比率を算出し、100%を掛けて伝導障害の程度を求める。背根神経節を露出するには、まず、l4の背部の正中線からl5セグメントに皮膚を開きます。
次に、骨のロンガを使用して脊椎をプロセス脊椎および横筋の筋肉を除去し、脊髄NDRG体を露出させる。露出した脊髄、NDRGをカバーし、綿に通常のリンガーの細胞外溶液を浸して神経活動を維持する。出血を止め、必要に応じて血液を取り除きます。
続いて、眼科用ハサミを用いて、DRGおよび接続された脊髄神経を露出させるために、椎骨前腔の上のs1骨構造をs1に取り出す。皮膚に切り傷を付け、中腿の坐骨神経を露出させます。神経の筋肉の内側に入る神経の遠位端から坐骨神経を分離し、切り離します。
そして、切断する前に、神経の端に外科ラインで神経幹をリゲートします。次いで、神経結紮点を持ち上げることにより、下層の結合組織から坐骨神経を分離する。脊髄から硬膜を取り出し、坐骨神経の隣接部分に達するまで、下層の結合組織からDRGを分離する。
したがって、DRGの準備全体を坐骨神経を付けて隔離する。DRGの表面をクリアするには、4倍の倍率で、ピンセットを使用してl4〜l6 DRGの表面の脊髄硬膜を慎重に除去する。1ミリリットルの混合酵素を含むガラス管に、坐骨神経を付けたDRGを入れます。
37°Cの水浴で15分間消化します。15分後、外科ラインの端を持ち上げ、通常のリンジャーの細胞外溶液で満たされた皿に準備を移して酵素を洗い流します。次いで、消化したDRGを、記録用の酸素化リンガーの細胞外溶液で満たされた容器に移す。
記録を行う場合は、細胞内溶液を調製し、使用するまで摂氏0度で保存します。スライスアンカーを使用して、神経節を安定させ、神経端を吸引刺激電極に接続します。40倍の倍率で、水のエマーシオン目的を持つDRGニューロンを視覚化して選択します。
電極を折り畳んで細胞内溶液で満たします。ホルダーに電極を取り付け、4~7メガオームの最終抵抗でピペットに正圧を加えます。次に、電極をセル表面に持ち込みます。
次いで、ピペットに負圧を加えてシールを形成する。ギガオームシールに到達したら、膜電位を約マイナス60ミリボルトに設定し、すべての細胞記録モードを確立します。続いて、5~50ヘルツの反復刺激を吸引電極を通して坐骨神経に送達し、伝導不全をスクリーニングする。
ベースラインからピークまでのAHPの振幅と80%AHPの持続時間を測定します。この図は、10ヘルツ電気刺激に応答してラットからの単一c5再焼成の元の連続記録を示す。20 回目のスイープが表示され、上から下に表示されます。
挿入は、代表的なアクションの可能性を示しています。ここでは、前のパネルと同じ刺激に応答してCFA注入ラットからの単一c繊維の記録を示す。この図は、制御条件下での5ヘルツ刺激に対する連続発火応答の連続的な記録、またはCFA定格ラットからの小径DRGニューロンにおける異なる濃度のZD7288の投与を示す。
インセットは、指定された記録期間の拡張トレースを示します。暗いスポットはスパイクの失敗を表します。AHPは、コントロールの大きな上昇斜面を示しました。
ZD7288アプリケーションで125マイクロモルの後に小さな上昇斜面が観察された。タイムシングルファイブ録音時、繊維を切断することが重要だと思います動物を維持することはどんな安全状態でも良いです。中性子周辺の微小環境。
単繊維記録と、坐骨神経に付着した無傷のDRGの適用の組み合わせにより、疼痛に関する末梢神経系の理解が向上した。
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