Neuroscience
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Uso della registrazione in fibra singola in vivo e della radice dorsale intatta Ganglion con il nervo Sciatico attaccato per esaminare il meccanismo del fallimento della conduzione
Chapters
Summary August 27th, 2019
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La registrazione a fibra singola è una tecnica elettrofisiologica efficace applicabile al sistema nervoso centrale e periferico. Insieme alla preparazione della DRG intatta con il nervo sciatico attaccato, viene esaminato il meccanismo di guasto della conduzione. Entrambi i protocolli migliorano la comprensione del rapporto del sistema nervoso periferico con il dolore.
Transcript
La registrazione in fibra singola svolge un ruolo importante nella registrazione delle attività delle fibre nervose. Soprattutto le attività che trasmettono la sensazione periferica dai campi ricettivi ai neuroni nel ganglio della radice dorsale. Nella registrazione wavel della fibra, fornisce un periodo di durata con capacità di registrare le risposte agli stimoli della natura, ed è stato successivamente disturbo dell'ambiente intercellulare.
In una singola fibra la registrazione richiede neutroni automatici buoni per la situazione. Il terapeuta chiama il requisito per la preparazione di test DRG integrati il nervo sciatico è integrato. Il risultato della situazione demo mostra quasi tutti i dettagli dei nervi in una buona fase di decalcomania fisica.
E terzo, l'intera preparazione DRG come sono integrati. Per iniziare questa procedura, preparare e disinfettare tutti gli strumenti chirurgici prima dell'intervento chirurgico. Quindi preparare da uno a due litri della normale soluzione extracellulare di Ringer e conservare a quattro gradi Celsius fino all'uso.
Per esporre il tronco del nervo sciatico per la registrazione, in primo luogo, tagliare la pelle e i muscoli del ratto anestetizzato sulla parte dorsale della coscia. Quindi, eseguire una dissezione smussata lungo il bicipite femorale. Isolare con cura il tronco nervoso sciatico usando forbici oftalmiche e un ago di separazione del vetro e mantenere il tessuto umido utilizzando la soluzione di Ringer.
Successivamente, fissare l'animale su un cerchio di metallo fatto in casa cucendo la pelle nella fessura intorno ad esso. Tirare leggermente la pelle verso l'alto per stabilire un bagno fluido. Esporre un centimetro di tronco nervoso sciatico sul lato prossimale.
Posizionare una piccola piattaforma marrone sotto il tronco nervoso per migliorare il contrasto al fine di osservare chiaramente il tronco nervoso fine. Successivamente, applicare una paraffina liquida calda sulla parte superiore del tronco nervoso per evitare l'essiccazione della superficie della fibra. Rimuovere il fluido se c'è un'essudazione intorno al tronco nervoso.
Per eseguire la registrazione, selezionare il filamento di platino come elettrodo di registrazione. Mangia e crea un piccolo gancio alla fine. Successivamente, attaccare l'elettrodo a un micromanipolatore.
Nella vasca da bagno, posizionare un elettrodo di riferimento accanto al tessuto sottocutaneo. Dividere la dura spinale e il Pia mater e ottenere il nervo sciatico. Al microscopio stereo con ingrandimento del 25%, prendere un fasccicolo fine e sospendere l'estremità approssimativa dell'assone sul gancio dell'elettrodo di registrazione.
Identificare il campo ricettivo di una singola fibra c non concepitiva utilizzando una simulis meccanica e uno stimolo termico. Se la cottura della fibra nervosa risponde agli stimoli meccanici e all'acqua calda, considerala come una fibra c polimoto e non ingannevole. Successivamente, inserire due elettrodi di stimolo dell'ago con un intervallo di due millimetri nella pelle del campo di identificazione per l'erogazione degli stimoli elettrici.
Visualizzare la forma d'onda di un potenziale d'azione sull'oscilloscopio e utilizzare al computer una scheda d con una frequenza di campionamento del segnale di 20 kilohertz. Quindi, registra i picchi utilizzando il software di acquisizione dati e analizzalo in seguito con un software professionale. Per misurare il guasto alla conduzione, fornire gli stimoli ripetitivi degli elettrodi in diverse frequenze a una fibra c per 60 secondi.
Lasciare un intervallo di 10 minuti affinché la fibra si rilassi tra uno stimolo e l'altro. Quindi, calcola il rapporto tra il numero di guasti e il numero di impulsi di stimolo ripetitivi consegnati e moltiplica per il 100% per ottenere il grado di fallimento della conduzione. Per esporre il ganglio della radice dorsale, prima tagliare la pelle dalla linea mediana della schiena al segmento da l4 a l5.
Successivamente, rimuovere i muscoli del processo della colonna vertebrale e del processo trasversale utilizzando un rongeur osseo ed esporre il corpo NDRG del midollo spinale. Coprire il midollo spinale esposto, NDRG, con cotone imbevuto della normale soluzione extracellulare di Ringer per mantenere l'attività neurale. Fermare il sanguinamento e rimuovere il sangue se necessario.
Successivamente, utilizzando forbici oftalmiche, rimuovere la struttura ossea da l4 a s1 sopra il forame vertebrale al fine di esporre il DRG e il nervo spinale collegato. Fai un taglio sulla pelle per esporre il nervo sciatico alla coscia centrale. Separare e scollegare il nervo sciatico dall'estremità distale del nervo dove entra nel muscolo.
E ligar il tronco nervoso con linea chirurgica alla fine del nervo prima del taglio. Quindi, separare il nervo sciatico dal tessuto connettivo sottostante sollevando il punto di legatura nervosa. Rimuovere per dura dal midollo spinale e separare il DRG dal tessuto connettivo sottostante fino a raggiungere la parte adiacente del nervo sciatico.
Pertanto, isolare l'intera preparazione del DRG con un nervo sciatico attaccato. Per cancellare la superficie del DRG, con ingrandimento 4x, rimuovere con cura la dura spinale sulla superficie da l4 a l6 DRG utilizzando una pinzetta. Posizionare il DRG con un nervo sciatico attaccato in un tubo di vetro contenente un millilitro di enzimi misti.
Digerire in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius per 15 minuti. Dopo 15 minuti, sollevare la fine della linea chirurgica e spostare la preparazione su un piatto riempito con la normale soluzione extracellulare di Ringer per lavare l'enzima. Quindi, trasferire il DRG digerito in un contenitore riempito con la soluzione extracellulare di Ringer ossigenata per la registrazione.
Per eseguire la registrazione, preparare la soluzione intracellulare e memorizzarla a zero gradi Celsius fino all'uso. Usando un'ancora a fette, stabilizzare i gangli e collegare l'estremità nervosa a un elettrodo stimolante dell'aspirazione. Con un ingrandimento di 40x, visualizzare e selezionare un neurone DRG con un obiettivo di emersione dell'acqua.
Piegare un elettrodo e riempirlo con soluzione intracellulare. Attaccare l'elettrodo sul supporto e applicare una pressione positiva nella pipetta con una resistenza finale da quattro a sette megaohms. Quindi, portare l'elettrodo sulla superficie cellulare.
Quindi, applicare una pressione negativa sulla pipetta per formare un sigillo. Una volta raggiunta una guarnizione gigaohm, impostare il potenziale della membrana a circa meno 60 millivolt e stabilire tutta la modalità di registrazione cellulare. Successivamente, fornire stimoli ripetitivi da 5 a 50 hertz al nervo sciatico attraverso l'elettrodo di aspirazione per lo schermo per il fallimento della conduzione.
Misurare l'ampiezza dell'AHP dal basale al picco e la durata dell'80%AHP. Questa figura mostra le registrazioni consecutive originali di singole ri-cottura c5 da ratti in risposta alla stimolazione elettrica di 10 hertz. Ogni ventesima sweep viene mostrata e visualizzata dall'alto verso il basso.
L'inserto mostra un potenziale di azione rappresentativo. Ecco le registrazioni di singole fibre c da ratti iniettati CFA in risposta alla stessa stimolazione del pannello precedente. Questa figura mostra le registrazioni continue delle risposte di attivazione in serie a cinque stimolazioni hertz in condizioni di controllo, o la somministrazione di diverse concentrazioni di ZD7288 in un neurone DRG di piccolo diametro da ratti classificati CFA.
Gli inserti mostrano tracce espanse per i periodi di registrazione specificati. Le macchie scure rappresentano errori di picco. L'AHP ha mostrato una pendenza crescente più grande nel controllo.
Mentre una pendenza crescente più piccola è stata osservata dopo 125 micromolari all'applicazione ZD7288. Quando una registrazione a cinque tempi, penso che sia importante tagliare la fibra mantenerà gli animali è buona qualsiasi condizione di sicurezza. E microambiente attorno al neutrone.
La combinazione di registrazione a fibra singola e applicazione di DRG intatto collegato al nervo sciatico, ha migliorato la nostra comprensione del sistema nervoso periferico relativo al dolore.
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