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我们提供一种简单而有效的方法,将治疗E18.5胸腺素的2'脱氧腺苷移植到裸鼠的肾胶囊中。该方法应辅助研究胸腺上皮细胞功能和T细胞成熟。
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胸腺移植是研究胸腺上皮细胞功能和体内T细胞成熟的重要方法。这种简单而高效的方案可用于分离和培养小鼠18.5胸腺，以便随后移植到肾胶囊中。18.5胸腺移植的规程可以修改为在其他发育阶段的胸腺移植或其他类似大小的组织。
此外，此过程非常简单。首次执行此技术时，应仔细查看某些案例戳的详细信息。此过程包含详细的操作，可以通过可视化更好地说明。
牺牲后，用70%乙醇擦拭胚胎18.5怀孕小鼠，并使用自洗灭菌仪器在腹部从膀胱到子宫的每个角进行V形切口。用剪刀切割子宫颈、宫颈和阴道区域，将子宫收获成冰上含有冷PBS的培养皿。将前子宫壁从一个子宫角切到另一个子宫角，以暴露包内胚胎以破译，并使用精细的钳子剥回十分的组织。
切开脐带，释放胚胎，将胚胎转移到冰上新的培养皿中。要收获第一个胸腺，用70%的酒精擦拭一个胚胎，然后将胚胎移植到新的培养皿中。斩首后，将胚胎固定到菜中，用无菌剪刀沿轴线前部水平切割横向胸壁。
切开隔膜打开胸部。胸腺应可见为两个位于气管前部和心脏相邻的白色叶。小心地将弯曲的尖端钳子插入胸腺后面，轻轻向上拉以收获组织。
检查胸腺的完整性，确认它含有两个关节叶。然后用PBS清洗胸腺，然后用立体显微镜修剪结缔组织和血管。收集所有胸腺后，将每个清洁组织转移到24孔板的单个孔中，每孔含有500微升培养培养剂。
并添加2'脱氧二甲酸，最终浓度为每井1.25毫摩尔。然后将分离的胸腺在细胞培养箱中放置八天。在培养的最后一天，用剪刀以45度角在输液管部分上切开头皮静脉针，并确认裸体接受者动物对头趾捏紧缺乏反应。
将鼠标放在手术台上，放在右侧位置，使用0.5%的波维酮碘拭子从身体内侧到外侧两次拭子在手术区域中。使用手术刀使五至九毫米的皮肤切口平行于左肾区域的脊柱，并切开皮下组织和肌肉以打开腹腔。用一只手用一双钳子，将肌肉和脂肪组织从暴露肾脏的脊柱侧切口边缘抬起来，用另一只手轻轻地挤出肾脏。
为了保持肾胶囊在手术期间湿润，用盐水润湿肾脏表面，并使用头皮针轻轻划伤右下侧的肾胶囊约1/2至2/3的肾脏宽度。将输液管滑入胶囊的刻痕中，轻轻地将肾胶囊从肾脏长到肾脏的长边约三到四毫米地分离到肾胶囊中。然后收回输液管。
要将胸腺植入创建的亚帽空间，在新鲜的盐水中清洗一种胸腺两次，然后将夹住的输液管连接到注射器。慢慢地将准备好的胸腺吸入经过修改的输液管。轻轻地将输液管插入肾胶囊，直到到达上极。
要将胸腺放入肾胶囊中，请缓慢地收回管，同时轻轻压抑柱塞。使用酒精灯，稍微加热头皮针，在确认整个胸腺在亚帽空间内后，使用加热的针头烧灼。将烧灼的肾脏恢复到腹腔，用缝合线关闭腹膜和肌肉。
使用经过修改的中断的垂直床垫缝合线，用至少三节关闭皮肤切口，并使用 povidone 碘拭子对切口进行消毒。然后提供抗生素和镇痛的皮下注射，将鼠标放在红外灯下进行监测，直到完全恢复。在这里，可以观察到一个孤立的胚胎18.5天胸腺含有两个完整的叶。
植入后，胸腺可以在接受者肾脏尖端的肾胶囊下可视化。在裸鼠接受动物中生长八周后，胸腺仍然留在胶囊下，但大小会显著增加。T细胞在移植的胸腺和裸小鼠接受者的外周血液中产生。
但正如预期的那样，在非移植裸体动物的外围没有发现T细胞。此外，在这个具有代表性的实验中，在从裸鼠接受者的外周血液中采集的带面T细胞中未检测到LacZ基因，这些细胞含有含有LacZ等位基因的胸腺叶，表明外周T细胞是由接受动物产生的。将管子滑入肾胶囊时要温柔。
避免打破胶囊。并确保你有足够的空间在胸腺分娩。可以使用流式细胞仪分析胸腺或外周T细胞群。
其中，I2d和免疫组织化学分析可以分析接受者周围组织的免疫反应。
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