قياس الأدنى غشاء البلازما والعالمية حيوية الكالسيوم بين الخلايا في الخلايا النجمية

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

نحن تصف كيفية قياس بالقرب من الغشاء والعالمية ديناميات الكالسيوم داخل الخلايا النجمية في تربيتها باستخدام الانعكاس الداخلي الكامل وepifluorescence المجهري.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Shigetomi, E., Khakh, B. S. Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes. J. Vis. Exp. (26), e1142, doi:10.3791/1142 (2009).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

يحتوي على خلايا الدماغ الدبقية. منذ فترة طويلة النجمية ، وهو نوع من الخلايا الدبقية ، والمعروفة لتوفير دور سلبي داعمة لخلايا عصبية. ومع ذلك ، أدلة متزايدة تشير إلى أن الخلايا النجمية ويمكن أيضا المشاركة بنشاط في وظائف المخ من خلال التفاعل مع الخلايا العصبية الوظيفية. ومع ذلك ، العديد من الجوانب الأساسية لعلم الأحياء نجمية تظل مثيرة للجدل ، غير واضحة و / أو غير مستكشفة تجريبيا. مسألة واحدة مهمة هي ديناميات الكالسيوم داخل الخلايا العابرين في الخلايا النجمية. هذا هو ذات الصلة لأن راسخة الكالسيوم ورسوله في المركز الثاني والمهم أنه تم اقترح أن ترتفع نجمية الكالسيوم يمكن أن تؤدي إلى الإفراج عن الإرسال من الخلايا النجمية. ومع ذلك ، لم يكن هناك أي وصف تفصيلي أو مرضية من الكالسيوم غشاء البلازما بالقرب من الإشارات في الخلايا النجمية. مجموع مضان انعكاس الداخلي (TIRF) المجهر هو أداة قوية لتحليل الأحداث ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية يشير ضمن حوالي 100 نانومتر للغشاء البلازما للخلايا الحية. هنا ، فإننا نستخدم TIRF المجهري ويصف كيفية مراقبة بالقرب من غشاء البلازما والعالمية ديناميات الكالسيوم داخل الخلايا في وقت واحد تقريبا. لمزيد من الصقل والتطبيق المنهجي لهذا النهج لديه القدرة على إبلاغ عن التفاصيل الدقيقة للإشارات الكالسيوم نجمية. قد يكون فهم مفصل لديناميات نجمية الكالسيوم توفر أساسا لفهم إذا ، كيف ومتى ولماذا النجمية والخلايا العصبية التي تعتمد على الكالسيوم الخضوع تفاعلات وظيفية.

Protocol

إجراءات تجريبية

الإجراء التجريبي تتألف من اثنين من الأجزاء الرئيسية التي تم وصفها بطريقة خطوة حكيمة أدناه.

الجزء 1 : تحضير الثقافات نجمية الحصين

لفترة وجيزة ، تم إعداد مختلطة الحصين نجمية ، عصبون الثقافات باستخدام بروتوكول راسخة 1،2،3. نحن الإجراء الأمثل لانتاج الخلايا النجمية مثقف صحي. وينبغي تنفيذ جميع الإجراءات المذكورة أدناه في بيئة معقمة مثل غطاء تدفق الصفحي.

إعداد coverslips

  • coverslips 22 ملم (VWR ، 48380-068)
  • بولي - D - يسين (PDL ، سيغما P0899) ، aliquots (1 ملغ / مل)
  • Laminin aliquots (20 ميكروغرام / مل) : إضافة 49 مل من الماء المعقم إلى 1 ملغ / مل حل laminin (سيغما L2020) ، وجعل 1.2 مل aliquots وتخزينها في -20 درجة مئوية
  1. PDL تذوب في الماء المعقم (50 ميكروغرام / مل)
  2. الأوتوكلاف في coverslips ، التشطيف مع الماء المعقم ومكان في PDL (20 مل لمدة 100 coverslips). ترك في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها.
  3. استبدال PDL مع الماء المعقم (3 يغسل واسعة النطاق). ثم الجافة وتخزين coverslips في 4 درجات مئوية.
  4. قبل يوم من الطلاء على الخلايا النجمية coverslips مكان ، في بئر فردية عقيمة على طبق من 6 جيدا (Multiwell لوحات مسطحة القاع مع أغطية العقيمة من العلوم البيولوجية دينار بحريني). طرح 400 ميكرولتر من laminin على كل ساترة واحتضان بين عشية وضحاها ، في الحاضنة لتجنب التبخر.

تشريح

تشريح وسائل الإعلام :

  • 500 مل محلول ملح ايرل المتوازن (EBSS) (1X) ، السائل (Invitrogen ، 14155-063)
  • 5 مل HEPES الحل (سيغما ، H0887)

الحصين وسائل الإعلام :

  • 412.5 مل متوسطة الأساسية الدنيا (MEM) (1X) ، السائل يحتوي على أملاح ايرل ، ولكن ليس الأحمر أو الجلوتامين L - الفينول (Invitrogen ، 51200-038)
  • 10 مل من الجلوكوز (سيغما ، D - (+) الغلوكوز مائي SIGMA ULTRA G7528) 1 م في MEM
  • 5 مل البنسلين ، الستربتوميسين (Invitrogen ، 15140-122)
  • 5 مل البيروفات الصوديوم الحل (سيغما ، S8636)
  • 12.5 حل HEPES 1 مل M (سيغما ، H0887)
  • 5 مل N - 2 الملحق (100X) ، السائل (Invitrogen ، 17502-048)
  • 50 مل مصل الخيل ، الحرارة المعطل (Invitrogen ، 26050-088)

غراء الحل :

  • إضافة 5 مل من وسائل الإعلام في تشريح فيال غراء - 022 رثينجتون (LK003178 ؛ التركيز النهائي ، و 20 يو / مل) ، واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة.

  1. قطع رأس الجراء الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين P1 (عادة 2 الجراء) بعد فحصها والمبادئ التوجيهية التي وافقت عليها اللوائح الوطنية والمحلية الخاصة بك رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية الاستخدام.
  2. إزالة الجلد والجمجمة والدماغ مكان في صحن بيتري امتلأت وسائل الاعلام تشريح الباردة.
  3. إزالة السحايا ، تشريح نصفي الكرة الأرضية وتشريح الحصين.
  4. يقطع الحصين إلى ~ قطعة 1X1 ملم وهضم في محلول غراء عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقة 11-13.
  5. مرة واحدة على قطعة من النسيج واستقر ، وإزالة غراء بعناية وإضافة 5 مل من المتوسط ​​الحصين لإزالة كل آثار الإنزيم. كرر هذه الخطوة والمتوسطة resuspend في قرن آمون (2 مل).
  6. متمزج الخلايا ~ 5 مرات حتى لا توجد كتل اليسار ، مع ماصات اللهب مصقول ثلاثة من المملون أصغر تدريجيا (1000 ميكرون ، ~ 500 ~ 300 ميكرون وميكرون).
  7. مسحوق مرة واحدة ، لتمرير الخلايا من خلال مصفاة الخلية (حجم المسام ، و 70 ميكرون ، العلوم البيولوجية دينار بحريني). عدد الخلايا في 10 ميكرولتر من الايقاف. ضبط حجم الحصين المتوسطة من أجل الحصول على 400000 خلية / مل.
  8. نضح في laminin قبالة coverslips ، وقبل أن يغطي الجافة ، لوحة 200 ميكرولتر من تعليق خلية في ساترة.
  9. تركها لمدة 60 دقيقة نعلق في الحاضنة ، ثم قم بإضافة 2 مل من المتوسط ​​الحصين لكل بئر.
  10. في اليوم التالي ، نضح الحصين المتوسطة من العمر لإزالة الخلايا الميتة والفضلات وإضافة 2 مل من المتوسط ​​قبل تحسنت الحصين الطازجة.

صيانة

Neurobasal وسائل الإعلام :

  • 500 مل neurobasal (Invitrogen ، 12348-017)
  • 10 مل مصل B27 تكملة الحرة (Invitrogen ، 17504-044)
  • 5 مل البنسلين ، الستربتوميسين (Invitrogen ، 15140-122)
  • 1.25 مل L - الجلوتامين (Invitrogen ، 25030-149)

تغذية الثقافات نجمية ، عصبون مرتين في الأسبوع مع neurobasal المتوسطة ، بعد أربعة أيام من بدء الطلاء. يحضن مسبقا وسائل الإعلام عن 30 دقيقة في الحاضنة في قارورة التهوية لكي تتوازن درجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون 2.

الجزء 2 : IMAGING الكالسيوم

الحصين تسجيل العازلة : 110 مم كلوريد الصوديوم و 5.4 مليبوكل ، 1.8 ملي CaCl 2 ، 0.8 مم MgCl 2 ، D - 10 ملي الجلوكوز ، 10 HEPES ملم (جميع المواد الكيميائية من سيجما) 7.4 درجة الحموضة (المعدلة مع هيدروكسيد الصوديوم).

تحميل الكالسيوم صبغ المؤشر إلى الخلايا النجمية

  1. وضع الثقافة في بئر على طبق من 6 جيدا مليئة 2 مل تسجيل العازلة التي تحتوي على 2.5 ميكرومتر الحصين Fluo - 4 ، ص (Invitrogen ، F - 14217) و 0.05 ٪ Pluronic ® حل F - 127 بنسبة 20 ٪ في DMSO (Invitrogen ، ف 3000MP) ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10-30 دقيقة.
  2. إزالة Fluo - 4 ، ويغسل حل coverslips 3 مرات مع العازلة تسجيل الحصين ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  3. ضع ساترة على الغرفة ، وتنظيف الجانب الآخر من ساترة بسائل تنظيف العدسة.
  4. وضع قطرة واحدة صغيرة من زيت الغمر (الغمر مدافع TYPE النفط من Cargille) على الهدف وضعت غرفة (الغرفة مفتوح لمدة 25 ملم ساترة الجولة من الآلات وارنر) على مرحلة من مراحل المجهر (أوليمبوس IX71).
  5. نظرة على الخلايا باستخدام ضوء انتقال لنرى كيف تبدو الخلايا ، وحملهم إلى التركيز. ثم تضيء الخلايا مع 488 نانومتر من مستوحد اللون (V فازة من الرؤية حتى عام) وتحديد ما إذا كان من إشارة مضان Fluo - 4 موحدة والتي يمكن اكتشافها في النجمية.
  6. برنامج التحصين الموسع واستخدام الإضاءة TIRF لقياس الكالسيوم في الخلايا النجمية.

TIRF المجهري

لفترة وجيزة ، ونحن استخدام IX71 أوليمبوس المجهر مزودة كاميرا IXON Andor EMCCD DV887DCS. ويتم تحقيق السيطرة على الإثارة والحصول على الصور باستخدام TILLVision البرمجيات. يتم الجمع بين الحزم من الأرجون نانومتر 454/488/515 (100 ميغاواط) ونانومتر 442 الحالة الصلبة (45 ميغاواط) وأشعة الليزر وتسيطر حتى عام الخطوط المتعددة مع الليزر الموحد ، TIRF المكثف المنفذ المزدوج وتصفية tuneable acoustoptical وتحكم (AOTF ، وكل من حتى عام الضوئيات) وتغذى من الألياف واسعة النطاق Kineflex لدخول مكثف TIRF. نستخدم عدسة أوليمبوس 60X NA 1.45 لتحقيق TIRF. يتم ضبط الكاميرا لكسب كل خلية نجمية لتقديم أفضل إشارة إلى صور الضوضاء. وقد تم على خلفية ومبادئ المجهري TIRF استعرضت مؤخرا 4 ، 5. وقد تم شراء معظم المكونات البصرية التي نستخدمها من TILL الضوئيات ، والتي هي الآن جزء من اجيلنت تكنولوجيز (http://www.till-photonics.com/). ويمكن حساب عمق الاختراق TIR من المعادلات أدناه.

معادلة

د = عمق الاختراق

N1 = معامل الانكسار للزجاج

N2 = معامل الانكسار من الخلايا

= زاوية من الإصابة

ناي = الفتحة العددية الإصابة


من أجل ضمان محاذاة الليزر الأمثل لTIRF نجد أنه من المفيد أن نلاحظ 100 نانومتر الفلورسنت حبة (Invitrogen ، F8803). ونحن لا تزال موجودة وإطارات وأشرطة الفيديو من الخرز مع برنامج التحصين الموسع وTIRF المجهري. في حين TIRF ، يلاحظ المرء زيادة كبيرة في إشارة إلى الضوضاء والخرز عرض البراونية نشرها. نجد أنه من المفيد لمراقبة سلوك من الخرز مع 100 نانومتر المجهري TIRF على أساس منتظم (~ مرة في الأسبوع) للتأكد من أن يحدث TIRF الأمثل ، بدلا من الإضاءة والمائل للخطر من شأنه أن يحدث إذا كانت الزاوية الحرجة لا يساوي α (انظر الشكل 1).

تطبيق مجموعة مستقبلات البروتين يقترن

النجمية عن مجموعة متنوعة من مستقبلات (جي كيو) ، إلى جانب 6 و 7 بما في ذلك مستقبلات الغلوتامات metabotropic ومستقبلات P2Y (ناهض ، ATP ، ADP). تنشيط هذه المستقبلات يؤدي إلى زيادة كبيرة في مستويات الكالسيوم داخل الخلايا النجمية. على سبيل المثال ، يمكن للمرء أن يلاحظ بسهولة الكالسيوم داخل الخلايا ترتفع خلال تطبيق ATP (30 ميكرون) من 8-10 النجمية. نستخدم حل سريع التحويل من الآلات وارنر تسمى VC - 77SP نظام الإرواء السريع الخطوة (http://www.warneronline.com/index.cfm). ويمكن أن يطبق مع حلول هذا الأسلوب في أقل من 10 مللي ثانية ~.

الشكل 1





ضبط الشكل 1. كارتون وصور فوتوغرافية من تصوير تصل. A. يظهر صورة للمجهر شنت على airtable ، في حين أن (ب) يظهر صورة للجمعية الليزر ، وأجهزة التحكم وصناديق شعاع. جيم يعرض صورة فوتوغرافية للمرحلة المجهر مع الغرفة منصة للتصوير. على اليسار يمكن أن ينظر إلى جهاز نضح سريع (جنبا إلى جنب مع السيارات السائر وأنابيب ثيتا). على اليمين هو ينظر إلى headstage من مكبر للصوت Axopatch 200A. الرسوم المتحركة schematizes مسار الضوء في إعداد وكيفية Tويتم تحقيق الحرية الدينية الدولية. وتركز أشعة الليزر على طائرة الوصل الخلفي للعدسة 60X 1،45 NA الهدف وموقعها قبالة مركز يتم ضبط بحيث يظهر في النفط الغمر في α الزاوية الحرجة. عند هذه النقطة شعاع يعاني من التأمل الداخلي الإجمالي ، ويضمحل مع λ المسافة (انظر المعادلة في النص الرئيسي) في المتوسط ​​أقل من مؤشر الانكسار. في هذه الحالة وهذا هو تسجيل العازلة المحيطة النجمية والخلايا النجمية أنفسهم. والنتيجة هي الإثارة البصرية (وبالتالي التصوير) من الجزيئات داخل نانومتر 100 ~ للغشاء البلازما. في الرسوم المتحركة للخلية يظهر ذلك بأنه "متحمس" الخضراء مستقبلات الغشاء ، في حين أن تلك داخل الخلية أو على السطح العلوي للخلية ليسوا سعداء. وقد تم توفير كامل الاعتبار عن طريق الفحص المجهري TIRF Steyer وAlmers 4.

الشكل 2

الشكل 2. صور من الخرز 100 نانومتر الفلورسنت المكتسبة مع برنامج التحصين الموسع وTIRF المجهري. A. عروض الصور برنامج التحصين الموسع من مجال الرؤية مع عدة عشرات من الخرز 100 نانومتر الفلورسنت. نقطة السهام الحمراء لالخرز التي قد استقروا على الزجاج وساترة ، في حين أن رؤوس السهام الزرقاء أشر إلى الخرز التي نشرها في الماء. باء يظهر صورة TIRF الحقل نفسه من عرض كما هو مبين في ألف في هذا الرأي سوى حبات ملتصقة أبداه السهام الحمراء مرئية. هذا لأن هذه قد استقروا على أن coverlsip الزجاج وبالتالي كانت داخل الحقل 100 نانومتر ~ زائل. حبات يظهر في الأسهم الزرقاء التي ليست ضمن هذه المنطقة وبالتالي هي غير مرئية في الصور TIRF. انخفاض مساحات المعرض تقديم 3D من الصور. فمن الواضح أن زيادة كبيرة في إشارة إلى الضوضاء يحدث لحبات ضمن الحقل زائل وعندما لاحظ من خلال المجهر TIRF. في الواقع لهذه الصور وهذه هي الإشارة إلى الضوضاء لبرنامج التحصين الموسع 7.1 ± 0.6 ، في حين كان لTIRF 20 ± 0.7.

الشكل 3

الشكل 3. النجمية صور محملة Fluo - 4 الكالسيوم صبغ المؤشر المكتسبة مع برنامج التحصين الموسع وTIRF المجهري. ألف EPI صورا لمجال الرؤية مع خمسة النجمية. باء صورة TIRF من نفس الحقل نظر هو موضح في ملاحظة باء أن الصور في ألف وباء تختلف بشكل ملحوظ. هذا هو لأنه مع إنارة TIRF يتم تصوير سوى غشاء البلازما في مناطق قريبة من مقاربة ساترة الزجاج. لوحات تظهر انخفاض ATP - أثار العابرين الكالسيوم داخل الخلايا المصورة مع برنامج التحصين الموسع وTIRF المجهري.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

هو راسخ بأن النجمية عرض ترتفع الكالسيوم داخل الخلايا. ويمكن أن تظهر هذه تحدث بشكل عفوي ، من خلال نشاط الخلايا العصبية أو عن طريق تطبيق منبهات لتنشيط المستقبلات على سطح خلية نجمية 11. مسألة واحدة مهمة ومثيرة للجدل هو ما إذا كانت الخلايا نجمية ترتفع الكالسيوم يمكن أن تؤدي إلى الإفراج عن الجزيئات مما يشير إلى أن تفعيل المستقبلات على الخلايا العصبية في 11 و 12. هذا أمر مثير للجدل بسبب وجود أدلة ضد وجهة النظر هذه ، على النحو المبين في الاستعراضات التي Haydon 7 و 13 و 11 مختبرات مكارثي. استنادا لدينا مؤخرا تصوير الدماغ شريحة والبيانات الكهربية قلنا أن هناك حاجة إلى فهم أفضل ودقيق للديناميات الكالسيوم قبل خلية نجمية ويمكن تصميم تجارب فرضية جديدة مدفوعة لتحديد كيفية تأثير الخلايا العصبية النجمية 14. في هذه المقالة الفيديو نقدم طريقة بسيطة لصورة بالقرب من غشاء البلازما والتغيرات العالمية الكالسيوم داخل الخلايا النجمية في وقت واحد تقريبا في تربيتها. وهو شرط لا مفر منه التقنية المجهري TIRF هو أن الخلايا المستنبتة لا بد من استخدامها لأنها تلتزم ساترة الزجاج داخل عمق الميدان 3 زائل. ومن الجدير بالذكر أن الخلايا النجمية في الثقافة تغير ملفاتهم التعبير الجيني بالمقارنة مع تلك الموجودة في الجسم الحي 15 ، وهكذا ينبغي النظر في هذا التحذير عند تنفيذ هذا الأسلوب. مع هذا الاعتبار في الحسبان مهما كانت طريقة بسيطة لا تسمح لنا تقرير واحد لتحديد حجم الصورة وقرب غشاء البلازما والتغيرات العالمية الكالسيوم داخل الخلايا في وقت واحد تقريبا. لمزيد من تطبيق نهج النجمية يبشر توفير بيانات دقيقة عن التغيرات الكالسيوم داخل الخلايا بالقرب من غشاء البلازما من الخلايا النجمية. وسوف توفر هذه البيانات الكمية تكون مفيدة لفهم كامل للبيولوجيا نجمية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة ميموريال أوهارا اليابان (لES) وكذلك مؤسسة وايتهول ، والمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية وجائزة الهبات شتاين - أوبنهايمر (لBSK).

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
VWR® Micro Cover Slips, Round, No. 1 Tool VWR international 48380-068
Poly-D-lysine hydrobromide Reagent Sigma-Aldrich P0899
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane Reagent Sigma-Aldrich L2020
Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS) (1X), liquid Reagent Invitrogen 14155-063
Minimum Essential Medium (MEM) (1X), liquid Contains Earle’s salts, but no L-glutamine or phenol red Reagent Invitrogen 51200-038
Penicillin-Streptomycin liquid Reagent Invitrogen 15140-122
Sodium pyruvate solution Reagent Sigma-Aldrich S8636
HEPES solution 1 M Reagent Sigma-Aldrich H0887
N-2 Supplement (100X), liquid Reagent Invitrogen 17502-048
Horse Serum, Heat-Inactivated Reagent Invitrogen 26050-088
PAPAIN-022 Reagent Worthington Biochemical LK003178
Neurobasal™ Medium (1X) Liquid without Phenol Red Reagent Invitrogen 12348-017
B-27 Serum-Free Supplement (50X), liquid Reagent Invitrogen 17504-044
L-Glutamine-200 mM (100X), liquid Reagent Invitrogen 25030-149
Cell Strainers Tool BD Biosciences 352350
BD Falcon Multiwell Flat-Bottom Plates with Lids, Sterile Tool BD Biosciences 353046
NaCl Reagent Sigma-Aldrich S7653
KCl Reagent Sigma-Aldrich P3911
CaCl2 hexahydrate Reagent Sigma-Aldrich 21108
MgCl2 hexahydrate Reagent Sigma-Aldrich M2670
HEPES free acid Reagent Sigma-Aldrich H3375
D-(+)-glucose Reagent Sigma-Aldrich G7528
Fluo-4, AM 1 mM solution in DMSO Reagent Invitrogen F-14217
Pluronic® F-127 20% solution in DMSO Reagent Invitrogen P-3000MP
Immersion Oil TYPE DF Microscope Cargill Labs 16242
Open chamber for 25 mm round coverslips, 100 μl volume Tool Warner Instruments 64-0362 (RC-21BDW)
P-2 platform for Series 20 chambers, non-heater Tool Warner Instruments 64-0278 (P-2)
FluoSpheres carboxylate-modified microspheres, 0.1 μm, yellow-green fluorescent (505/515) 2% solids Reagent Invitrogen F8803

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Richler, E., Chaumont, S., Shigetomi, E., Sagasti, A., Khakh, B. S. An approach to image activation of transmitter-gated P2X receptors in vitro and in vivo. Nature Methods. 5, 87-93 (2008).
  2. Granseth, B., Odermatt, B., Royle, S. J., Lagnado, L. Clathrin-mediated endocytosis is the dominant mechanism of vesicle retrieval at hippocampal synapses. Neuron. 51, 773-786 (2006).
  3. Nunez, J. Primary culture of hippocampal neurons from P0 newborn rats. J Vis Exp. 19, (2008).
  4. Steyer, J. A., Almers, W. A real-time view of life within 100 nm of the plasma membrane. Nat Rev Mol Cell Biol. 2, 268-275 (2001).
  5. Jaiswal, J. K., Fix, M., Takano, T., Nedergaard, M., Simon, S. M. Resolving vesicle fusion from lysis to monitor calcium-triggered lysosomal exocytosis in astrocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 14151-14156 (2007).
  6. Araque, A., Carmignoto, G., Haydon, P. G. Dynamic signalling between astrocytes and neurons. Annu Rev Physiol. 63, 795-813 (2001).
  7. Haydon, P. G. GLIA: listening and talking to the synapse. Nat Rev Neurosci. 2, 185-193 (2001).
  8. Bowser, D. N., Khakh, B. S. ATP excites interneurons and astrocytes to increase synaptic inhibition in neuronal networks. J Neurosci. 24, 8606-8620 (2004).
  9. Bowser, D. N., Khakh, B. S. Two forms of astrocyte single vesicle exocytosis imaged with total internal reflection fluorescence microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 4212-4217 (2007).
  10. Bowser, D. N., Khakh, B. S. Vesicular ATP is the predominant cause of intercellular calcium waves in astrocytes. J Gen Physiol. 129, 485-491 (2007).
  11. Agulhon, C. What is the role of astrocyte calcium in neurophysiology. Neuron. 59, 932-946 (2008).
  12. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60, 430-440 (2008).
  13. Lee, S. Y., Haydon, P. G. Astrocytic glutamate targets NMDA receptors. J Physiol. 581, 887-888 (2007).
  14. Shigetomi, E., Bowser, D. N., Sofroniew, M. V., Khakh, B. S. Two forms of astrocyte calcium excitability have distinct effects on NMDA receptor-mediated slow inward currents in pyramidal neurons. J Neurosci. 28, 6659-6663 (2008).
  15. Cahoy, J. D. A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function. J Neurosci. 28, 264-278 (2008).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics