حصاد الحيوانات المنوية والتلقيح الاصطناعي من الفئران

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

هذا البروتوكول يوضح طرق لاستخراج الحيوانات المنوية من الخصيتين للذكور وإناث الفئران ثم تلقيح. هذا الإجراء مفيد عندما يكون في حاجة الى الوقت الدقيق في الدراسات التنموية ، وكذلك العمل المعدلة وراثيا.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

القوارض من جنس Peromyscus (الغزلان الفئران) هي الأكثر انتشارا في أميركا الشمالية الأصليين الثدييات. وتستخدم الأنواع Peromyscus في طائفة واسعة من البحوث بما في ذلك السموم ، وعلم الأوبئة ، والبيئة ، والسلوكيات ، والدراسات الجينية. هنا أنها توفر نموذجا مفيدا للمظاهرات التلقيح الاصطناعي.

أساليب مماثلة لتلك المعروضة هنا قد سبق استخدامها في العديد من الدراسات الماوس الغزلان ، ولكن تم نشر أي بروتوكول مفصلة. نحن هنا لشرح الطريقة الأساسية التلقيح الاصطناعي. هذا الأسلوب ينطوي على استخراج الخصيتين من القوارض ، ثم عزل الحيوانات المنوية من البربخ والأسهر. توضع الحيوانات المنوية الناضجة ، والآن في خليط الحليب ، في الجهاز التناسلي للإناث في وقت الإباضة. يحسب التسميد ك 0 يوم لتوقيت تطور الجنين. ويمكن بعد ذلك يمكن استرجاع الأجنة عند نقطة في الوقت المطلوب والتلاعب بها.

ويمكن استخدام التلقيح الاصطناعي في مجموعة متنوعة من أنواع القوارض حيث التوقيت الدقيق الجنين أمر بالغ الأهمية أو من الصعب الحصول عليها. هذه التقنية أمر حيوي بالنسبة للأنواع أو سلالات (بما في ذلك معظم Peromyscus) والتي قد لا لم فورا و / أو التزاوج حيث من الصعب تقييم. بالإضافة إلى ذلك ، يوفر التلقيح الاصطناعي التوقيت الدقيق لتطور الجنين إما التقدم التنموي في رسم الخرائط و / أو العمل المعدلة وراثيا. ويمكن أن يستخدم هذا الرقم انخفض من الحيوانات منذ مكفولة الإخصاب. وقد كان هذا الأسلوب حيوية لتعزيز نظام Peromyscus ، والمؤمل ان تعود بالنفع الآخرين كذلك.

Protocol

التلقيح الاصطناعي

يستخدم التلقيح الاصطناعي بدلا من التزاوج الطبيعي لزيادة فرص أن جميع الإناث سوف تصبح حاملا. وقد استخدم 2 من الذكور مقابل كل 1 superovulated الإناث أو الإناث من المعروف أن في ودقي. وضعت epididymides من أذناب الفئران الذكور الناضجة في تعليق الحليب 9 ٪ ، وبقرت مع الإبر قياس 18. ولم يسمح للحيوانات المنوية تسبح بحرية لبضع دقائق ثم أخذ epididymides من الخليط. تم تقييم نظام التعليق مع المجهر لالتقاء الحيوانات المنوية ومتحركة. كليلة وقياس 22 1 ½ كان يستخدم إبرة طويلة بوصة لإدارة الحيوانات المنوية. وكان يوضع ينحني 120 درجة حوالي 3 / 4 ال نزولا الإبرة. تم إدراج إبرة في المهبل حتى ينحني و0،025 -- 0.05mls حقن. إذا تم استخدام مساعدا لعقد الإناث في الموقف المناسب ، ليست هناك حاجة لاستخدام مواد التخدير.

إعداد

  1. استخدام لمدة 6 4 ذكور إناث
  2. الموت ببطء ذكور في الحظيرة
  3. إعداد حوالي 5 مل من الحليب 9 ٪ من الحليب المجفف
  4. وضع 1.5 مل في طبق بتري الصغيرة
  5. تخلص من epididymus والأسهر
  6. وضعت في 1.5ml من الحليب 9 ٪
  7. باستخدام اثنين من الإبر قياس 18 ، والحركة باستخدام قطع طويلة مع الإبر ، وشريحة وفتح epididymus الأسهر للافراج عن الحيوانات المنوية
  8. إخراج خلفها الأنسجة والتحقق من الحيوانات المنوية تحت المجهر

حقن

  1. استخدام إبرة حادة في زاوية 120 درجة
  2. عقد الماوس في اليد وحقن الخليط. إذا كان غير مريح مع شخص واحد وإجراء الحقن ، ويمكن استخدام شخصين. ينبغي عدم استخدام أي مخدر ، وعلى واحد يعرف كيف يمكن أن تؤثر على هذا الإجراء.
  3. 0.05ml استخدام الحيوانات المنوية / مزيج الحليب لكل أنثى

المستلم الإناث

  1. لا اللطاخة المهبلية على الإناث المستلم (قبل هذا الوقت من الإناث المتلقي يجب أن تكون في مقدمات الوداق / شبق)
  2. وينبغي أن الإناث التي لم تكن قد وصلت يوم 5 شبق التي ربما لم تستخدم

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

وأود أن أشكر مايك ديوي من مركز ألبوم الوراثية Peromyscus بصيرته عن القيمة ، والصبر ، والمعرفة على التكاثر القوارض.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics