Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Cinsi Peromyscus (geyik fareler) Kemirgenler en yaygın yerli Kuzey Amerika memeliler. Peromyscus türlerin toksikoloji, epidemiyoloji, ekoloji, davranış ve genetik çalışmalar da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede araştırma kullanılır. Burada suni tohumlama gösteriler için yararlı bir model sağlar.

Burada görüntülenir benzer yöntemler daha önce birkaç geyik Fareler üzerinde yapılan çalışmalarda, henüz herhangi bir ayrıntılı protokol yayımlanmıştır. Burada temel suni tohumlama yöntemi göstermektedir. Bu yöntem, sperm, epididim ve vas deferens izole kemirgen, sonra testis açılan gerektirir. Süt karışımı olgun sperm, yumurtlama zamanında, kadın üreme sisteminde yerleştirilir. Döllenme, embriyo gelişimi zamanlaması için her gün 0 olarak sayılır. Embriyolar sonra istenilen zaman noktasında alınan ve manipüle edilebilir.

Suni tohumlama, embriyo tam olarak elde etmek için zamanlama çok önemli ya da zor çeşitli kemirgen türleri kullanılabilir. Bu teknik, hemen ve / veya çiftleşme değerlendirmek zordur arkadaşı olmayabilir türler veya suşları (çoğu Peromyscus dahil) için hayati önem taşımaktadır. Yanı sıra, gelişim, ilerleme ve / veya transgenik çalışma eşleme ya da suni tohumlama, embriyo gelişimi için kesin zamanlama sağlar. Döllenme garanti beri hayvanların azaltılmış numaraları kullanılabilir. Bu yöntem Peromyscus sistemi sürdürmek için hayati olmuştur ve umarım aynı zamanda başkalarının yararına olacaktır.

Protocol

Suni dölleme

Suni döllenme şansını artırmak için tüm kadın hamile olduğunu doğal çiftleşmelerin yerine kullanılır. 2 erkek her 1 süperovulasyon kadın veya östrus içinde olduğu bilinen bir kadın için kullanılmıştır. Olgun erkek fareler caudae epididymides% 9 süt süspansiyon yerleştirilir ve 18 gauge iğne ile açık dilimlenmiş. Sperm birkaç dakika için serbestçe yüzmeye izin verildi ve ardından karışımı epididymides alınmıştır. Süspansiyon izdiham ve hareketli sperm mikroskop ile değerlendirildi. A künt 22 göstergesi 1 ½ inç uzunluğunda iğne sperm yönetmek için kullanılır oldu. 120 ° bend iğne aşağı 3 / 4 th hakkında yerleştirildi. 0.05mls enjekte iğne ve 0.025 bend vajina içine yerleştirildi. Asistan, uygun pozisyonda kadın tutmak için kullanılır ise, anesteziklerin kullanımı gerekli değildir.

Hazırlık

  1. 4 erkek 6 kadın için kullanın
  2. Vivaryum erkek Euthanize
  3. % 9 oranında süt, süt tozu yaklaşık 5 ml hazırlayın
  4. Küçük Petri kabındaki 1.5 ml.
  5. Epididymus ve vas deferens Kes
  6. 1.5ml% 9 sütü koyun
  7. Iki 18 numaralı insülin iğnesi kullanarak ve iğne ile uzun kesme hareketi kullanarak, sperm serbest epididymus ve vas deferens açmak dilim
  8. Doku üzerinde sol dışarı atın ve mikroskop altında sperm kontrol

Enjeksiyon

  1. 120 ° açıyla künt iğne kullanın.
  2. Eli tutun ve fare karışımı enjekte edilir. Rahatsız tutma ve enjekte bir kişi varsa, iki kişi de kullanılabilir. Bilen biri olarak bu prosedürü nasıl etkileyebileceği hiçbir anestezi kullanılmalıdır.
  3. Dişi başına sperm / süt karışımı kullanın 0.05ml

Alıcı kadın

  1. Alıcı kadın vajinal smear (bu zaman alıcı kadın proestrus / östrüs olmalıdır) yapın
  2. 5. Gün östrus ulaşmış değil kadınlarda muhtemelen kullanılmaktadır olmamalı

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Mike kemirgen üreme Peromyscus Genetik Stok Center onun değerli bilgiler için, sabır ve bilgi Dewey teşekkür etmek istiyorum.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics