Oogsten Sperma en kunstmatige inseminatie van Muizen

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Dit protocol laat zien methoden voor de extractie van sperma van de testikels van de mannetjes en daarna inseminatie vrouwelijke muizen. Deze procedure is handig wanneer precieze tijd nodig is in ontwikkeling studies als transgene werken.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Knaagdieren van het geslacht Peromyscus (herten muizen) zijn de meest voorkomende inheemse Noord-Amerikaanse zoogdieren. Peromyscus soorten worden gebruikt in een breed scala van onderzoek met inbegrip van toxicologie, epidemiologie, ecologie, gedrags-en genetische studies. Hier bieden ze een nuttig model voor demonstraties van kunstmatige inseminatie.

Methoden zoals die hier weergegeven zijn eerder gebruikt in verschillende herten muizen studies, nog geen gedetailleerd protocol is gepubliceerd. Hier laten we zien de basis methode van kunstmatige inseminatie. Deze methode houdt in extraheren van de testes van de knaagdieren, dan is het isoleren van de zaadcellen uit de bijbal en zaadleiders. De rijpe zaadcellen, die nu in een melkmengsel, worden in de vrouwelijke reproductieve-darmkanaal op het moment van de ovulatie. Bemesting wordt geteld als dag 0 voor de timing van de embryo-ontwikkeling. Embryo's kunnen worden opgehaald op het gewenste tijdstip-point en gemanipuleerd.

Kunstmatige inseminatie kan worden gebruikt in een verscheidenheid van knaagdiersoort waar exact embryo timing is cruciaal of moeilijk te verkrijgen. Deze techniek is van vitaal belang voor soorten of stammen (waaronder de meeste Peromyscus) die niet kunnen paren onmiddellijk en / of waar paring is moeilijk in te schatten. Daarnaast, kunstmatige inseminatie biedt exacte timing voor de ontwikkeling van het embryo, hetzij in kaart brengen van ontwikkeling vooruitgang en / of transgene werk. Verminderde aantallen dieren kunnen worden gebruikt, omdat de bevruchting is gegarandeerd. Deze methode is van vitaal belang voor het bevorderen van de Peromyscus systeem, en hopelijk profiteren anderen.

Protocol

Kunstmatige Inseminatie

Kunstmatige inseminatie is in plaats van natuurlijke dekkingen gebruikt worden om de kans dat alle vrouwtjes hebben zal zwanger toenemen. Twee mannen werd gebruikt voor elke 1 gesuperovuleerde vrouwen of een vrouw bekend is dat in oestrische. De caudae epididymides van de volwassen mannelijke muizen werden geplaatst in een 9% melk suspensie en opengesneden met 18 gauge naalden. Het sperma was vrij kunnen zwemmen voor een paar minuten en vervolgens de epididymides werden genomen uit het mengsel. De suspensie werd geëvalueerd met een microscoop voor samenvloeiing en beweeglijk sperma. Een stomp 22 gauge 1 ½ inch lange naald werd gebruikt om het sperma te beheren. Een 120 °-bocht werd geplaatst ongeveer 3 / 4 e van de weg naar beneden de naald. De naald werd ingebracht in de vagina tot aan de bocht en 0,025 - 0.05mls geïnjecteerd. Als een assistent wordt gebruikt om de vrouwelijke te houden in de juiste positie, is het gebruik van verdovingsmiddelen niet nodig.

Voorbereiding

  1. Gebruik vier mannen voor zes vrouwen
  2. Euthanaseren mannetjes op de vivarium
  3. Bereid ongeveer 5 ml van 9% melk van melkpoeder
  4. Doe 1,5 ml in kleine petrischaal
  5. Knip de Epididymus en de zaadleider
  6. Zet in 1,5 ml van 9% melk
  7. Met behulp van twee 18 gauge naalden, en het gebruik van lange snijbeweging met naalden, slice open de Epididymus en zaadleider om het sperma op los
  8. Haal overgebleven weefsel en controleer voor het sperma onder de microscoop

Injectie

  1. Gebruik stompe naald op 120 ° hoek
  2. Houd de muis in de hand en injecteer mengsel. Indien een oncomfortabel gevoel met een persoon aanhouden en injecteren, kunnen twee personen worden gebruikt. Geen verdoving te worden gebruikt, als op een weet hoe dit kan invloed hebben op de procedure.
  3. Gebruik 0.05ml van sperma / melk mix per vrouwtje

Ontvanger vrouwen

  1. Doe vaginaal uitstrijkje de ontvangende vrouwen (tegen die tijd de ontvanger vrouwen moet worden in pro-oestrus / estrus)
  2. Vrouwtjes die niet loops bereikt op dag 5 moet waarschijnlijk niet gebruikt

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Ik wil Mike bedanken Dewey uit de Peromyscus Genetische Stock Center voor zijn waardevolle inzicht, geduld en kennis over knaagdieren reproductie.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics