Büyüme inhibisyonu fenotipleri tanımlanması Mayalarda bakteriyel Tip III Efektör İfade İndüklenmiş

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Bu video, biz, maya ve efektör-kaynaklı büyüme inhibisyonu fenotiplerinin belirlenmesi bakteri tip III etkileyiciler ifadesi için bir prosedür açıklanmaktadır. Bu tür fenotipleri sonradan efektör fonksiyonları ve hedefleri aydınlatmak için yararlanılabilir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Salomon, D., Sessa, G. Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast. J. Vis. Exp. (37), e1865, doi:10.3791/1865 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Birçok Gram-negatif patojen bakteri, konakçı hücrelerin sitoplazmasında efektör proteinlerin paketi yerini değiştirmek için bir Tip III sekresyon sistemi kullanırlar. Hücre içinde, Tip III etkileyiciler bağışıklık yanıtlarını bastırmak ve patojen büyümesini teşvik ev sahipliği hücresel süreçleri yıkılmasını. Bugüne kadar çok sayıda bitki ve hayvan bakteriyel patojenler tip III etkileyiciler tespit edilmiştir, ama bunlardan sadece birkaçıdır iyi karakterize edilir. Bu effektör fonksiyonlarını anlamak verilen bir bakteri suşunun efektör repertuarında fonksiyonel fazlalık bir kombinasyonu tarafından çürütülmüş, virülans, muhtemelen bazı enfeksiyon aşamalarına özgü rolleri, ve genetik zorluklar artırmak için uygulamayın ince etkileri belirli patojenlere manipüle. Maya tip III etkileyiciler İfadesi

Protocol

I. Tip III Efektör Maya İfade Sistemi Tasarımı

Efektör ilgi tip III (ler) ifade etmek için uygun bir maya sistemi Kalibre önemli bir görevdir ve bazı deneme yanılma gerektirebilir. Böyle bir sistemin tasarlanması dikkate optimize edilmelidir büyük önem taşımaktadır faktörleri şunlardır: 1) organizatörü)) efektör (ler), 2, 3 efektör gen kopya sayısı ifade sürüş protein ekspresyonu doğrulamak için kullanılan epitopu etiketi ve 4) maya süzün.

1) Kuruluş

Bakteri tip III etkileyiciler maya hücreleri için toksik olabileceğinden, bir uyarılabilir kolaylaştırıcı ifade kontrol etmek için kullanılmalıdır. GAL1 organizatörü genellikle bu amaç için kullanılır ve faaliyet büyüme ortamda karbon kaynağı tarafından düzenlenir: glikoz tarafından bastırılmış ve galaktoz tarafından indüklenir. Ancak, bu organizatörü, istenmeyen toksisite bastırma şartlar altında biraz sızdıran olarak rapor edildi. Benzer bir sorunla karşılaştı ise, aşağıda açıklandığı gibi efektör gen kopya sayısı en aza indirmek için, ya da böyle MET3 veya CUP1 rehberleri 1 gibi alternatif indüklenebilir rehberleri, kullanmak için tavsiye edilir. Burada bir galaktoz uyarılabilir kolaylaştırıcı efektör proteinleri ifade için prosedürler açıklanmaktadır.

2) Gen kopya sayısı

Protein ekspresyon düzeyini etkileyen ek bir parametre efektör geni hücre bulunan kopya sayısıdır. Efektör geni tarafından yapıldığında yüksek ekspresyon düzeyleri elde edilir plazmid 2 mikron (hücre başına 40-60 adet). Orta ifade efektör gen homolog rekombinasyon maya genomu entegre düşük ifadesi elde edilir iken, sentromer içeren bir plazmid (hücre başına 1-3 kopya) kullanarak elde edilir. Sentromer içeren bir vektör ve GAL1 organizatörü birleştirerek bitki patojenleri Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria ve Pseudomonas syringae pv yaklaşık 50 etkileyiciler başarıyla dile getirdiler. Immunoblotting analizi ile saptanabilir seviyeleri ve bastırma koşulları altında ihmal edilebilir kaçak domates (Salomon ve Sessa , yayınlanmamış).

3) epitopu etiketi

Ilgi efektör karşı antikorlar mevcut değilse, bir epitopu etiketi immunoblotting ifadesini izlemek için efektör protein birleşir. Yaygın olarak kullanılan etiketleri, Myc, hemaglutinin (HA) veya Bayrak güvenilir ticari antikorlar mevcuttur hangi. Efektör protein yapısı ve etkinliği istenmeyen zararlı etkilerini en aza indirmek için etiketi sadece bir kopyasını kullanmanızı öneririz.

4) Maya gerginlik

Ifade etmek için kullanılan maya suşu için temel bir gereklilik ifade vektör seçilebilir marker auxotrophy. Farklı maya suşları belirli etkileyiciler ifade farklı duyarlılıklar gösterebilir dikkat etmek önemlidir. Örneğin, birkaç Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria effektör (Salomon ve Sessa, yayınlanmamış) BY4741 ve W303 suşları farklı duyarlılıklar olduğu görülmektedir. Bu nedenle, farklı maya suşları ilgi (ler) efektör test etmek için tercih edilir.

II. Maya Medya hazırlanması

Büyüme için büyüme ortamı olarak YPD (10 g / L, maya özü, 20 g / L pepton ve% 2 w / v] glukoz), herhangi bir vektör içermezler maya suşlarının. Katı ortamlar için, çözüm (katı besiyeri çok yumuşak ise, [v / v] 5 N NaOH stok solüsyonu otoklav önce orta 0.05%)% 2 [w / v] agar ekleyin. Biz son hacmi% 90 glikoz olmadan ortamı hazırlamak ve otoklav tavsiye ederiz. Kısa bir süre kullanımdan önce, bir filtre ile sterilize edilmiş% 20 w / v] glukoz solüsyonu (% 20 glukoz çözeltisi tutmak ° C bulaşmasını önlemek için 4) ile% 100 hacmi doldurun.

Maya suşları (lösin, urasil, histidin ve triptofan) seçilebilir marker prototrophy bir vektör içeren bir büyüme için, lösin olmadan sentetik terk orta, amino asitler olmadan urasil, histidin ve triptofan (6,7 g / L maya azot baz 1.4 g / L, maya sentetik orta ek-bırak) ve% 2 [w / v] glikoz, ya da% 2 w / v] galaktoz ve% 1 w / v] raffinose içeren. Katı ortamlar için, çözüm için% 2 [w / v] agar ekleyin. Biz son hacmi% 90 orta hazırlama ve otoklav tavsiye ederiz. Kısa bir süre kullanımdan önce, istenen karbon kaynağı (% 20 glikoz ve% 20 tutmak bağlı bir filtre ile sterilize edilmiş% 20 glukoz çözeltisi, ya da bir filtre ile sterilize edilmiş% 20 galaktoz raffinose çözüm +% 10,% 100 hacmi doldurmak galaktoz +% 10 raffinose çözümleri 4 ° C) bulaşmasını önlemek için. Ifade vec seçilebilir marker bağlıtor kullanmadan önce (10, 1 g/100 ml lösin stok ml / L, 200 mg/100 ml urasil stoku 10 ml / L, 2 ml / L 1 g/100 gelen diğer amino asitler ya da urasil eklemek ml histidin hisse senedi ya da 2 ml / L) 1 g/100 ml triptofan stok. Lösin ve urasil stokları hazırlanırken, otoklav ile sterilize ve oda sıcaklığında tutun. Histidin ve triptofan stokları hazırlarken, onları filtreleyerek sterilize şişe ışıktan korumak için alüminyum folyo ile sarın ve 4 tutmak ° C Prosedürleri, aşağıda açıklanan lösin ile tamamlanan sentetik terk orta urasil, histidin ve triptofan, sentetik tam orta olarak belirlenmiş.

Katı-medya plakalar 4 ° C'de iki ay kadar saklanabilir. Kullanmadan önce 20 dakika oda sıcaklığında steril bir laminer akış kaputu plakaları kurulayın.

III. Maya Dönüşüm

  1. Maya dönüştürme işlemine başlamadan önce, aşağıdaki üç çözümler hazırlamak:% 50 w / v] polietilen glikol (PEG) 3350 çözümü, 1 M LiAc pH = 8.0, ve TE solüsyonu (100 mM Tris, pH = 6.85 ve 10 mM EDTA pH = 8.0). Filtre çözümleri sterilize ve 4 ° C
  2. Uzun bir tahta mili ya da steril bir aşılama döngüsü kullanarak, yeni bir plaka almak ve bir maya koloni (1-2 mm çapında) bir 15 ml'lik polipropilen tüpe 3 ml YPD aşılamak. Vorteks kısaca. Rulo kültür tüpü yerleştirin ve sürekli rotasyon ile 30 ° C bir gece inkübe edin.
  3. Sabah, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 g rulo ve santrifüj kültür çıkarın. Santrifüj süpernatantı sonra tamamen kaldırmak.
  4. 1 ml tabanda tampon (% 10 v / v] TE solüsyonu,% 10 [v / v] 1 M LiAc çözüm) ve vorteks karışım hücreleri tekrar
  5. Dönüştürülecek her plazmid ve ek kontrol dönüşüm için bir mikrotüp hücre süspansiyonu 100 ul aktarın.
  6. Her bir tüp, tek iplikçik somon Sperm DNA (10 mg / ml) ve plazmid DNA dönüştürülebilir (kontrol tüpü hariç) 250-500 ng 5 ul ekleyin.
  7. Dikkatle dönüşüm solüsyonu (% 10 v / v] TE solüsyonu,% 10 [v / v] 1 M LiAc çözüm% 80,% 50 [v / v] [w / v] PEG çözüm her tüp 650 ul eklemek ) ve vorteks.
  8. Rulo 30 ° C de 30 dakika süreyle inkübe edin.
  9. Çalkalayıcı tüpleri çıkarın eklemek 70 DMSO ul ve tersini tüpleri karışımı 10-15 kez (hücreleri kırılma önlemek için vorteks yok).
  10. Tüpler 42 yerleştirin ° C önceden ısıtılmış su banyosu ve 15 dakika boyunca inkübe edin.
  11. Tüpleri su banyosundan çıkarın ve hemen 2 dakika süreyle buz koyun.
  12. Tüpler soğutulduktan sonra, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 g santrifüj.
  13. Mikrosantrifüj tüpleri çıkarın ve dikkatli bir pipet kullanarak viskoz süpernatant kaldırmak.
  14. Her tüp steril çift distile su (DDW) 150 ul hücre pelletini tekrar ve bir karbon kaynağı olarak% 2 glukoz içeren bir sentetik levha ve hücre süspansiyonu yaymak plazmid sağlar amino asit veya nükleotid prototrophy.
  15. Plakalar, 2 dakika süreyle açık bırakın ve onları bir laminer akış kaputu kurumasını bekleyin. Iki-üç gün süreyle 30 ° C inkübatör tabak koyun.
  16. Once koloniler (1-2 mm çapında) tabak ortaya çıktı yaklaşık 10 tek koloniler, her bir dönüşüm almak ve taze bir plaka aktarabilirsiniz. Koloniler aktarırken, büyük bir miktarda maya hücreleri büyüme izin vermek için 2 cm x 2 cm yamaları olun. Bir kuluçka plakalar, iki gün boyunca 30 ° C'de inkübe edin.
  17. Maya yamaları büyüdü, inkübatör plakaları kaldırmak ve onları mühür parafilm. Plakalar 4 ° C'de saklanır. Her 10-14 günde bir, taze bir plaka koloniler aktarın.

IV. Maya Protein hazırlama immüno Efektör İfade doğrula Özü

  1. Taze bir plaka, 3 ml, karbon kaynağı olarak% 2 glukoz ile desteklenen uygun sentetik tam orta içeren bir 15 ml polipropilen tüp ve maya koloni (1-2 mm çapında) bir amino asit veya hangi plazmid nükleotid olmadan seçin seçim prototrophy sağlar. Rulo kültür tüpü yerleştirin ve 30 ° C'de bir gece inkübe
  2. Ertesi gün, rulo kültür çıkartın ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 g de santrifüj. Santrifüj tüpleri çıkarın ve süpernatantın atın.
  3. 3 ml steril DDW ve vorteks karışım hücre pelletini tekrar.
  4. 3 ml steril DDW supernatant ve tekrar süspansiyon hücreleri atıp tekrar santrifüjleyin.
  5. Hücre süspansiyonu 200 ul 3 ml% 2 galaktoz ve karbon kaynağı olarak% 1 raffinose tamamlanan sentetik tam orta içeren yeni bir 15 ml tüp transferi ve amino asit veya hangi nükleotid olmadan tercih edilen plazmid prototrophy sağlar.Vorteks, bir rulo yer ve 30 gece inkübe ° C Karışımı
  6. Ertesi sabah, bir mikrotüp için 1 ml (ya da düşük yoğunluklu kültürler için daha fazla) kültür transferi. 800 g oda sıcaklığında 5 dakika süreyle santrifüj hücreleri Hasat.
  7. Burada, β-mercaptoethanol toksik buharlar solunum önlemek için davlumbaz çalışır. Süpernatant bir pipet kullanarak dikkatlice çıkarın ve buz parçalama çözüm (4% [v / v] 5 N NaOH,% 0.5 [v / v] β-mercaptoethanol) 100 ul hücre pelletini tekrar süspansiyon haline getirin. Vorteks tarafından kuvvetlice karıştırın ve 30 dakika buz üzerinde kuluçkaya yatmaktadır.
  8. İnkübasyon sırasında, 100 ul lizis tamponu pH 9-10 titering için gerekli hacim HCl (6 N) belirler. Bu amaçla, her biri lizis tamponu bir raf ve transfer 100 ul 10 mikrotüpler. HCl (6 N) (1-10 ul) çeşitli hacimlerde her tüp ve vorteks karışım ekleyin. Bir örnek alın ve bir pH indikatör şeridi kullanarak çözüm pH kontrol edin.
  9. Inkübasyon sonunda, vorteks tarafından lizat ve karıştırmak için (daha iyi doğruluk, lizat ucu takılmadan tüp yan HCl çözeltisi) önceki adımda belirlenen HCl hacmi ekleyin.
  10. 3x örnek tampon 50 ul ekle (30% [v / v] gliserol,% 15 [v / v] β-mercaptoethanol,% 37.5 [v / v] 500 mM Tris-HCl, pH = 6.8,% 0,15 [w / v ] sodyum dodesil sülfat [SDS] ve Bromophenol Mavi vorteks (çözüm sarı dönerse, pH değeri çok düşük olduğu anlamına gelir ve bir kaç lizis çözüm mikrolitre çözüm kadar ilave edilmelidir lizat ve karıştırmak için birkaç tahıl) maviye döner).
  11. Lizat çözüm, bir iğne ile mikrotüp kapak bir delik delinmesiyle sonra bir ısıtma bloğu 5 dakika kaynatın.
  12. Isıtma bloğu mikrotüp çıkarın ve çözüm oda sıcaklığında 2 dakika soğumasını bekleyin.
  13. 10 sn sonra Vortex lizat çözüm ve aşağı spin. 30 ul immunoblotting analizi için SDS-PAGE jel üzerine yerleştirin.

V. Testi Spotting Efektör indüklenen Büyüme inhibisyonu fenotipleri Algılama

  1. 15 ml polipropilen tüp içinde faiz ve inokülasyon plazmid ifade taşıyan bir maya koloni (1-2 mm çapında), taze bir plaka almak, 3 ml% 2 karbon kaynağı olarak glukoz ile tamamlanan sentetik tam orta ve amino olmadan asit veya hangi nükleotid plazmid ifade prototrophy sağlar. Boş bir plazmid taşıyan bir kontrol maya suşu için aynı prosedürü tekrarlayın. Kültür tüpleri bir silindir koyun ve 30 ° C sabit dönüş geceleme kuluçkaya yatmaktadır.
  2. Ertesi gün, rulo kültürlerin çıkartın ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 800 g de santrifüj. Santrifüj tüpleri çıkarın ve süpernatantın atın.
  3. 3 ml steril DDW ve vorteks karışım hücre pelletini tekrar.
  4. 3 ml steril DDW santrifüj adım ve tekrar süspansiyon hücreleri tekrarlayın.
  5. Optik yoğunluk (OD) belirlemek için, her kültürün 100 ul 900 ul DDW ve vorteks içeren bir mikrotüp aktarın. Tüplerin içerik plastik küvet içine dökün ve 600 nm dalga boyunda absorbans ölçümü (referans olarak 1 ml DDW dolu bir küvete). Küvete kültürlerin OD 600 10 seyreltme faktörü ile çarpılarak ilk kültürlerin OD 600 hesaplayın.
  6. Sonra, ilk kültürlerin OD 600 dayalı bir OD 600 ile steril mikrotüpler = 1,0 hücre süspansiyonları (1 ml) hazırlamak.
  7. 900 ul steril DDW dolu 3 steril mikrotüpler kullanarak, 10-üç kat seri dilüsyonları (OD 600 = 0.1, 0.01 ve 0.001) her hücre süspansiyonu (OD 600 = 1.0) bir önceki adımda hazırlanan hazırlar.
  8. Seçim plazmid prototrophy sağlayan amino asit veya nükleotid olmadan sentetik tam orta içeren iki tabak hazırlayın. Orta,% 2,% 2 galaktoz ve% 1 raffinose ile diğer levha glikoz ve bir plaka ile takviye edilmelidir. 20 dakika oda sıcaklığında steril bir laminer akış kaputun içindeki plakalar Kuru ve bir ızgara üzerine koyun.
  9. Her kültür için, hem de bastırma ve medya inducing üst üste dört dilüsyonları spot 10 ul.
  10. Lekelenme sonra, birkaç dakika için başlık açık plakaları bırakın. Lekeler kuru, plakaları kapak ve 2-3 gün boyunca 30 ° C inkübatör koyun.
  11. Inkübasyondan sonra, plakalar ve maya büyüme analiz. İlk olarak, hücre yoğunlukları bastırma orta içeren plaka üzerinde benzer olduğunu onaylayın. Sonra boş bir vektör indükleyici orta içeren plaka taşıyan kültürü ile ilgi efektör protein ifade kültür büyüme karşılaştırın.

    Not: etkileyiciler standart laboratuvar büyüme koşulları altında maya büyüme hız sınırlayıcı değildir hücresel süreçleri hedef alabilir.Gibi effektör büyüme inhibisyonu fenotiplerinin kimlik izin vermek için, medya inducing böylece etkileyiciler hassasiyeti artırarak, maya hücresel fonksiyonları değiştiren bileşikleri ile takviye edilebilir. Muhtemelen bu yordamı entegre edilebilen kimyasal maddelerin bir listesi için, Parsons ve ark bakın. (2004) 2.

VI. Temsilcisi Sonuçlar

Bir temsilci, maya, tahlil ve tip III etkileyiciler ifade kaynaklanan büyüme inhibisyonu fenotipleri tespit lekelenme Şekil. 1. Bu deneyde, tip III etkileyiciler AvrPto HopAA1-1 ve Fitopatojenik Gram-negatif bakteri Pseudomonas syringae pv. Domates (Pst), AvrE1 maya suşu BY4741 sentromer içeren plazmid pGML10 ifade edildi ve yeteneklerini test maya büyüme inhibe. Pst tip III etkileyiciler ifade galaktoz indüklenebilir GAL1 promotör kontrolü altında veya boş bir vektör içeren bireysel maya kültürleri seri seyreltilir ve bastırma (glikoz) ya da indükleyici (galaktoz) medya (Şekil 1) üzerine kaplama . Orta bastırma, AvrPto ve HopAA1-1 ifadesi için plazmid taşıyan maya suşları içeren boş bir vektör kontrol suşu olarak benzer bir büyüme sergiledi. Ancak aynı ortamda AvrE1 taşıyan maya muhtemelen GAL1 organizatörü kaçak belli bir dereceye kadar ve AvrE1 yüksek sitotoksik etkisi ile ilgili biraz azaltılmış büyüme görüntülenir. AvrE1 efektör ifade indükleyici koşullarında, herhangi bir seyreltme koloniler eksikliği yansıyan ciddi bir büyüme inhibisyonu fenotipe neden oldu. AvrPto herhangi bir etkisi yoktu Munkvold ve arkadaşları 3, aynı zamanda ciddi büyüme inhibisyonu sonuçlandı HopAA1-1 ifadesi, daha önce gözlemlediği.

Şekil 1
Şekil 1. Pseudomonas syringae pv. Domates ifade kaynaklanan Maya büyüme inhibisyonu (Pst) tip III etkileyiciler AvrE1 ve HopAA1-1. Plazmid pGML10 içeren Maya suşları (BY4741), AvrPto galaktoz-indüklenebilir ifade için boş veya taşıma GAL1 odaklı kaset ya HopAA1-1 veya AvrE1, karbon kaynağı olarak glukoz (% 2) ile takviye sentetik tam orta gecede büyüdü ve lösin eksik. Kültürler, yıkanmış = 1.0 ve 10 kat seri dilüsyonları sentetik tam katı lösin ve eksik içeren glikoz (% 2) medya ya da galaktoz (% 2) ve raffinose (% 1) damlatılan OD 600 normalize edildi. Fotoğraflar 30 büyüme 2 ve 3 gün ° C, glikoz ve galaktoz medya büyüyen maya sonra alınmıştır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu sunumda, tomurcuklanan maya Saccharomyces cerevisiae tip III bakteriyel efektör proteinleri ve efektör-kaynaklı büyüme inhibisyonu fenotipleri nasıl tanımlamak için ifade için heterolog bir sistem olarak nasıl kullanılacağı gösterilmektedir. Önemlisi, bu fenotipleri maya büyüme üzerindeki olumsuz etkisi etkileyiciler bastırıcılarının belirlemek için genetik ekranlarında kullanılan olabilir. Susturmalar doğrudan çalışılan efektör hedefleri veya efektör etkilenen hücresel süreçleri katılan proteinler ya da temsil edebilir. Bugüne kadar maya, hayvan ve bitki bakteriyel patojenler çok sayıda tip III etkileyiciler ifade edildi ve birkaç neden büyüme inhibisyonu fenotipleri süreçleri ya da yollar bu hedef 1,4 tanımlamak için kullanılır .. Çeşitli çalışmalarda, maya efektör toksisite de başarıyla roman bakteriyel etkileyiciler 5 tanımlamak için istismar edildi. Ayrıca, maya 6 etkileyiciler toksisitesi bastırmak bileşikler için kimyasal kütüphanelerin ekranlar efektör-kaynaklı büyüme inhibisyonu fenotipleri ilaç keşfi için istismar olabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Bu çalışma, İsrail Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Yeast extract Difco Laboratories 212750
Peptone Difco Laboratories 211677
D-glucose Sigma-Aldrich G5767
Agar Difco Laboratories 214010
Sodium hydroxide (NaOH) Sigma-Aldrich S8045
Yeast nitrogen base w/o amino acids Difco Laboratories 291940
Yeast synthetic drop-out medium supplement Sigma-Aldrich Y2001
D-galactose Sigma-Aldrich G0750 >99%; <0.1% glucose
D-raffinose Sigma-Aldrich R0250 >98%
L-leucine Sigma-Aldrich L8000
Uracil Sigma-Aldrich U0750
L-tryptophan Sigma-Aldrich T0254
L-histidine Sigma-Aldrich H6034
DNA, single stranded, from salmon testes Sigma-Aldrich D7656
Dimethyl sulfoxide (DMSO) Sigma-Aldrich D5879 Desiccate
Hydrochloric acid (HCl) Sigma-Aldrich H1758
Polyethylene glycol (PEG) 3350 Sigma-Aldrich P4338
Lithium acetate (LiAc) Sigma-Aldrich L4958
Tris (base) JT Baker 4109-02
Ethylenediamine-tetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich E5134
β-mercapt–thanol Sigma-Aldrich M6250
Glycerol Sigma-Aldrich G5516
Bromophenol blue Sigma-Aldrich B6131
Dodecyl sulfate sodium salt (SDS) Merck & Co., Inc. 8.22050.1000
Centrifuge tubes (15 ml) Corning 430052 Sterile
Spectrophotometer cuvette (10x4x45 mm) Sarstedt Ltd 67.742
Inoculation loop Sigma-Aldrich Z643009 Sterile
Parafilm Sigma-Aldrich P7543
pH indicator strip, pH 6.5-10.0 Merck & Co., Inc. 1.09543.0001

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Siggers, K. A., Lesser, C. F. The yeast Saccharomyces cerevisiae: a versatile model system for the identification and characterization of bacterial virulence proteins. Cell Host Microbe. 4, 8-15 (2008).
  2. Parsons, A. B. Integration of chemical-genetic and genetic interaction data links bioactive compounds to cellular target pathways. Nat. Biotechnol. 22, 62-69 (2004).
  3. Munkvold, K. R., Martin, M. E., Bronstein, P. A., Collmer, A. A survey of the Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 type III secretion system effector repertoire reveals several effectors that are deleterious when expressed in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Plant-Microbe Interact. 21, 490-502 (2008).
  4. Curak, J., Rohde, J., Stagljar, I. Yeast as a tool to study bacterial effectors. Curr. Opin. Microbiol. 12, 18-23 (2009).
  5. Slagowski, N. L., Kramer, R. W., Morrison, M. F., LaBaer, J., Lesser, C. F. A functional genomic yeast screen to identify pathogenic bacterial proteins. PLoS Pathog. 4, e9-e9 (2008).
  6. Huang, J., Lesser, C. F., Lory, S. The essential role of the CopN protein in Chlamydia pneumoniae intracellular growth. Nature. 456, 112-115 (2008).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics