Drosophila burnumun Eklenti Tepkisi (PER) Testi

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Burnumun uzatma yanıt veya BAŞINA sineklerin yanı sıra bal arıları kullanılan bir tat davranış testtir. Burnumun çekici bir madde ile temas yaptığında, uçucu madde tüketmek burnumun uzanır. Çeşitli şekerler Çözümleri uçmak için çok çekicidir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Burnumun uzantısı yanıt (PER), sineklerin yanı sıra bal arıları kullanılan bir tat davranış testtir.

Sinek ağzına (labellum) yüzeyinde, tat nöronlar evler sensilla olarak adlandırılan saç gibi yapılar vardır. Çekici bir madde ile temas labellum yaptığında, sinek malzeme tüketmek burnumun uzanır. Burnumun Uzatma Tepkisi (PER) tayini bu lezzeti davranışı tepki önlemleri ve tek bir sinek gıda tercihleri ​​hakkında bilgi almak için kullanışlı bir yöntemdir. Çözümler, sakkaroz, glikoz ve fruktoz gibi çeşitli şekerler, uçmak için çok cazip. Tatlı bir çözüm karışık caydırıcı maddelerin etkisi de PER azaltılması olarak test edilebilir.

Temel prosedür basitliğine rağmen, çalışmasını engellemek pek çok şey vardır. Dikkat gerektiren faktörlerden biri sinek tepki durumudur. Sinek uygun duyarlı durumuna getirmek için gerekli açlık süresi 36 ila 72 saate kadar büyük ölçüde değişir. Biz duyarlı olmayan veya aşırı duyarlı bireysel hayvanların taranmasına izin verir sinek devlet ve değerlendirmek için bir dizi kontroller kurdu. Bir başka önemli faktör etki seviyesi ve kelimelerle tarif etmek zor olacaktır labellum temas pozisyon. Bu video sunum, bu yöntemin tekrarlanabilirliği artıracak diğer birçok iyileştirmeler ile tüm bunları bir arada gösterir.

Protocol

Açlık

  1. İlk olarak, sinek açlıktan.
  2. Kim-silin boş bir flakon su ile ıslatılmış küçük bir parça koyun.
  3. Transferi 20-30, iyi beslenmiş, boş flakon uçar.
  4. Kağıt nemli olduğundan emin olmak için her 12 -24 saat kontrol edin.
  5. Sinek 36-72 saat açlıktan.

Fix sinek

  1. Biri bir aspiratör uçmak çekin.
  2. Açılış üzerinden 200 ul sarı ucu yerleştirin. Aynı zamanda saygısız ve üzerinde üfleme, sarı ucu içine sinek sıkmak olabilir.
  3. Yavaşça hareket edemez bir noktaya sinek yukarı itmek için biraz hava geçerlidir.
  4. Bir jilet kullanarak, sinek gözü yaklaşık bir işareti koymak, sonra sinek geri emmek ve ucu kesilmiş.
  5. Yavaşça sinek konumuna geri darbe, ama sadece sonuna ulaşmadan önce, burnumun yer alacak konumda kesilmiş bir eğik. Bu eğik kesme olmadan yapabilirsiniz, ama kesinlikle aşağıdaki işlem daha kolay kılacak.

Sakaroz fitiller hazırlayın

  1. Kimwipes, 6 mm genişliğinde bir şerit ® kağıt bir konu haline Twist, koni şeklinde fitil gibi küçük parçalar halinde (<1 cm) içine çekin ayrı.
  2. Bu küçük fitiller, sakaroz çözümler ya da suya daldırma ve kontak yaparak burnumun sunuldu.

Kontrol ve deney hayvanlarında hazırlayın

  1. Herhangi bir tastants test etmeden önce, uçmak için% 4 sakaroz çözeltisini verir. Bu bir pozitif kontrol olarak görür. Yanıt vermedi herhangi bir sinek atın.
  2. Ardından, sinek testi dH 2 0. Bu bir negatif kontrol olarak hareket ederler. Cevap ise sinek atın.
  3. Tastants test sonra bu kontroller sınayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu sunumda, burnumun uzantısı yanıt tayini için tüm adımları geçtiniz. Bu yöntem oldukça basit geliyor ama pek çok diğer davranış testleri, çok küçük şeyler tahlil önleyebilir. Biz dikkat gereken birçok tür adımlarda gitti. Burada, en önemli faktörlerin vurgulanması.

Böyle bir faktör fitil şekli. Ben çok iyi örnekler göstermiştir, ama tabii ki, gerçekte her şeyi çok iyi ve çok kötü arasında sürekli bir tayf olurdu. Başlangıçta, çok iyi tarafına yakın şeyler olabilir, ancak gün-gün, standart olmayan çok iyi bir dizi bit bit kaydıran başlayabilir. "Iyi" olarak adlandırılan İnsan algısı çok kolay bilinçsiz kayabilir. Bunu önlemenin bir yolu, deneylerde kullanılan fitil bir resim çekmek ve tüm resimleri yan yan karşılaştırmak için. Ya da en azından bir resim çok iyi çalıştı fitil almak ve bir süre önce test PERS bakıyorum.

Bir başka önemli şey, kişinin etkisi seviyesidir. Çünkü bu amaç, mümkün olduğunca nazik bir şekilde temas kurmaya uğraşmak daha kolay. Tüm sineğin başını hareket görmezseniz, bu en iyisidir.

Açlık durumu kontrol etmek için zorlu bir faktördür. Pek çok tat veya koku davranış testleri, 24 saatlik bir açlık süresi çok sık kullanılır. 24 saat insanlar deney yapmak için çok uygun olabilir, ancak çok iyi durumda sinek arka, bu oldukça kısa bir süre. Ama zengin bir sinek gıda ve yoğunluğu tam olarak kontrol BAŞINA test etmek için pencere bile, 36 saatten 72 saate kadar değişebilir. Yani, bir deney olarak, insanlar için çok rahatsız edici olduğunu söylemek zorundayım. Daha zor deneyciler için yapmak başka bir faktör daha var. Nitekim olarak, deneme için pencere çok kısa olabilir, çok sayıda toplu olması, ya da hiç var olmayabilir.

Bu yüzden bazı büyük engellerin üzerinden gitmek zorunda, ama en önemlisi pozitif ve negatif kontrol bahsettiğim. Çok sıkı tutarak bu standart, güvenilir veri setleri toplamak mümkün olacaktır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Paul Graham, video sunumu bir kamera adam olarak hizmet için teşekkür ederiz.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics