Extensão Proboscis Response Assay (PER) em Drosophila

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Proboscis resposta extensão ou PER é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas. Quando a tromba faz contato com uma substância atrativa, a mosca estende sua tromba para consumir a substância. Soluções dos vários açúcares, são muito atraentes para a mosca.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Proboscis resposta extensão (PER) é um ensaio de comportamento gosto que tem sido utilizado em moscas, bem como em abelhas.

Sobre a superfície da boca da mosca (labelo), existem cabelo-como estruturas chamadas sensilla que abriga neurônios gosto. Quando uma substância atraente faz contato com o labelo, a mosca estende sua tromba para consumir o material. Extensão Proboscis Response ensaio (PER) mede a resposta comportamento, gosto e é um método útil para aprender sobre as preferências alimentares em uma única mosca. Soluções dos vários açúcares, como sacarose, glicose e frutose, são muito atraentes para a mosca. O efeito de substâncias aversivo também pode ser testada como a redução do PER, quando misturado em uma solução doce.

Apesar da simplicidade do procedimento básico, existem muitas coisas que podem impedi-lo de trabalhar. Um dos fatores que requer atenção é o estado de resposta da mosca. O tempo necessário para trazer a fome a voar para o estado adequado de resposta varia drasticamente de 36 a 72 horas. Nós estabelecemos uma série de controles para avaliar o estado da mosca e que permite a triagem de não-responsivos ou hiper-sensíveis animais individuais. Outro fator importante é o nível de impacto ea posição do contato com o labelo, que seria difícil descrever com palavras. Esta apresentação em vídeo demonstra todos juntos estes com várias outras melhorias que poderiam aumentar a reprodutibilidade deste método.

Protocol

Fome

  1. Primeiro, morrer de fome a voar.
  2. Coloque um pequeno pedaço de Kim-wipe encharcada com água em um tubo vazio.
  3. Transferência de 20-30 bem alimentados voa para o frasco vazio.
  4. Verifique a cada 12 -24 horas para fazer se o papel está úmido.
  5. Fome a voar por 36-72 horas.

Fix the fly

  1. Tome uma mosca em um aspirador.
  2. Coloque uma ponta de 200 mL amarela sobre a abertura. Simultaneamente lançando e soprando sobre ele, você pode espremer a voar para a ponta amarela.
  3. Aplicar suavemente um pouco de ar para empurrar a voar até um ponto onde ele não pode se mover.
  4. Usando uma navalha, colocar uma marca de cerca de olho da mosca, em seguida, sugar a voar de volta e cortou a ponta.
  5. Suavemente soprar a voar de volta para a posição, mas apenas antes de chegar ao fim, faça um corte inclinado na posição em que a tromba vai ser localizado. Você pode fazer sem este corte viés, mas com certeza gostaria de fazer o seguinte processo mais fácil.

Prepare pavios sacarose

  1. Torça uma faixa de 6 mm de largura Kimwipes ® papel em um thread, e separe em pedaços pequenos de pavio cone-like forma (<1 cm).
  2. Essas mechas pequenas foram mergulhados em soluções de sacarose ou água e apresentado ao proboscis fazendo o contato.

Prepare os controles e animais experimentais

  1. Antes de testar qualquer tastants, dar uma solução de sacarose 4% para a mosca. Isto age como um controle positivo. Descartar qualquer mosca que não respondeu.
  2. Em seguida, teste dH 2 0 na mosca. Este ato como um controle negativo. Descartar a voar se o fez responder.
  3. Testar esses controles depois de testar o seu tastants.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Nesta apresentação, nós passamos por todas as etapas para Proboscis ensaio de resposta de extensão. O método parece muito simples, mas como em muitos ensaios outro comportamento, muitas coisas pequenas podem impedir que o ensaio de trabalhar. Nós já passamos por diversas etapas que necessitam de atenção especial. Aqui, eu enfatizar alguns dos fatores mais importantes.

Um desses fatores é a forma do pavio. Eu tenho mostrado alguns dos exemplos muito bons, mas é claro que, na realidade, tudo seria um espectro contínuo entre muito bom e muito ruim. No começo, você pode estar usando as coisas perto do lado muito bom, mas no dia-a-dia o seu padrão pode começar a mudar pouco a pouco para o intervalo não-tão-bons. Percepção humana dos chamados "bons" pode muito facilmente mudar de forma inconsciente. Uma maneira de evitar isso é para tirar uma foto da torcida você usou em suas experiências, e comparar todas as imagens lado a lado. Ou, pelo menos, ter um retrato do pavios que funcionou muito bem, e olhar para ele por um tempo antes de testar PERs.

Outra coisa importante é o nível de impacto do contato. Isto é mais fácil de lidar, porque o objetivo é fazer com que o contato o mais suave possível. Se você não vê mover a voar de cabeça em tudo, que é o melhor.

A condição de fome é a mais difícil fator de controlar. No gosto muitos ou olfativas ensaios comportamentais, uma época de fome de 24 horas é usado com muita freqüência. 24 horas pode ser muito conveniente para as pessoas fazerem a experiência, mas se você trás o seu moscas em uma condição muito boa, este é um período bastante curto. Mas mesmo se você usou um alimento rico voar e controlar a densidade precisamente, a janela para testar PER pode variar de 36 horas para 72 horas. Então, como uma experiência, eu tenho que dizer que é muito inconveniente para as pessoas. Há um outro fator que torna mais difícil para os experimentadores. Por uma questão de fato, haveria muitos lotes, onde a janela para o experimento pode ser muito curto, ou pode mesmo não existir.

Então, existem alguns obstáculos importantes que você tem que passar, mas a coisa mais importante é o controlo positivo e negativo que eu mencionei. Mantendo-se os padrões de forma muito rigorosa, você será capaz de coletar conjuntos de dados confiáveis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Agradecemos a Paul Graham para servir como um homem da câmera na apresentação de vídeo.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics