Снижение Итраконазол Концентрация и продолжительность успешны в лечении

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Batrachochytrium dendrobatidis инфекции у земноводных могут быть устранены с помощью пониженную концентрацию (0,0025%) и короткую продолжительность (пять минут ванны для шести дней) итраконазола, чем обычно используется. Менее смертность и меньше негативных побочных эффектов наблюдались с помощью этого протокола модифицированный лечения.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Brannelly, L. A. Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians. J. Vis. Exp. (85), e51166, doi:10.3791/51166 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Амфибии испытывают наибольшее снижение любого класса позвоночных и основной причиной этих снижения является грибковая патоген, Batrachochytrium dendrobatidis (BD), что приводит к chytridiomycosis заболевания. Пленные колонии обеспечения важны во всем мире под угрозой видов амфибий и может быть единственным спасательным кругом для тех, кто в критической угрозой исчезновения. Поддержание болезни бесплатно колонии является одним из приоритетов в неволе менеджеров, пока безопасные и эффективные методы лечения всех видов и через стадиях жизни не были идентифицированы. Наиболее широко используется химиотерапевтическое лечение итраконазол, хотя дозировка обычно используется может быть вредным для некоторых особей и видов. Мы провели испытания клинического лечения для оценки, может ли быть найден ниже и безопаснее, но эффективная доза итраконазола вылечить Bd инфекций. Мы обнаружили, что за счет снижения концентрации лечения от 0.01-0.0025% и сокращения продолжительности лечения с 11-6 Дней 5 мин ванны, лягушки могут быть излечены от Bd инфекции с меньшим количеством побочных эффектов и менее связанной с лечением смертности.

Introduction

Амфибии в настоящее время испытывают наибольшее сокращение биоразнообразия всех позвоночных таксонов 1. Chytridiomycosis, кожное заболевание вызвано хитридиевых грибковых патогенов Batrachochytrium dendrobatidis (BD), является одним из основных причин этих резкое снижение 2 Bd является худшим патоген на запись за причинение утраты биоразнообразия:. Он заражает более 600 видов амфибий и имеет вызвало снижение более чем 300 видов, из которых целых 200 видов стали на грани исчезновения или вымершие 2,3. Амфибия хитридиевых грибок не пройдет конкретных и неясно, какие качества хозяина позволяют Bd инфекции, чтобы прогрессировать в результате чего тяжелые заболевания. Chytridiomycosis приводит к смерти, нарушая ионные каналы в коже, что приводит к потере электролита и сердечной недостаточности 4. Кроме того, Bd супернатант (не содержащий Bd зооспор) вызывает иммунный ответ у головастиков 5 leadinг исследователи верить Bd производит токсичный побочный продукт 6.

Потому что многие виды которых резко сокращается, в неволе колонии обеспечения и селекционные программы являются важными меры по сохранению и может быть единственным спасательным кругом для некоторых видов. Установление и поддержание болезни бесплатно колонии является проблемой для амфибий объектов управления. Нынешние химиотерапевтические способы лечения Bd инфекции, хотя и эффективны, могут быть вредны для животных проходят лечение, и ни один метод единственного метода лечения был успешным у разных видов и возрастных классов амфибий 7.

Несколько клинических испытаний лечения Bd инфекции были выполнены 7. Три наиболее часто используемые методы лечения термотерапия, хлорамфеникол и итраконазол. Тепловая терапия является nonchemotherapeutic вариант лечения, который, кажется, имеет мало побочных эффектов, можно использовать на нескольких этапах жизни, и, вообще говорясоюзником эффективным. В исследовании лечения, Chatfield и Ричардс-Заваки 8 обнаружили, что 96% из обработанных животных рассеялся инфекции после того, как размещены при 30 ° С в течение 10 дней. Хотя этот процесс не был на 100% успешным, он обеспечивает основу для других, чтобы оценить тепла терапию для своего вида. Тепловая терапия, хотя и эффективны в течение многих видов, непрактично для многих горных пород, что не может оставаться при высоких температурах в течение продолжительного периода времени. Хлорамфеникол, антибактериальный, успешно используется для лечения Bd у многих видов, и ингибирует рост грибков в пробирке. В качестве антибактериальных, хлорамфеникол не разрушает грибок конкретно, но, как известно, вызывают апоптоз в клетках эукариот 9. Было предположение, что хлорамфеникол терапия вызывает апоптоз в коже, убив внутриклеточный спорангии, хотя точный механизм действия неизвестен. Хотя ни клинических испытаний не проводилось, и поэтомудоза и время обработки не были оценены, текущие протоколы лечения обычно требуют погружение в течение двух-четырех недель 10,11, что делает это лечение нецелесообразно для наземных амфибий. Хлорамфеникол также ограничен в некоторых странах для ветеринарного применения, потому что воздействие на человека было связано с редкой формой апластической анемии 12.

Итраконазол, азоловый противогрибковое, является наиболее широко используется для лечения Bd инфекции у амфибий в неволе. Наиболее широко используемый протокол для купания животных в 0,01% раствора итраконазола в течение пяти минут в день в течение 11 дней подряд. Этот протокол был получен из стандартов, используемых для управления млекопитающих, и, в то время как в силу для земноводных, она не основана на клинических испытаниях в амфибий 11,13. Этот протокол может вызвать негативные побочные эффекты у некоторых видов, особенно в рода Rana и в головастиков и последние оборотнями 11.Лечение Головастик был успешным использованием значительно более низкую концентрацию (0,0005%) итраконазола, но был связан с депигментации 14. Это же концентрация была опробована на последние оборотнями и признано неудачным при лечении инфекции 15. Потому что есть риск негативных побочных эффектов с итраконазол лечения, некоторые практикующие использовали половину обычной концентрации (0,005%) в течение 11 дней подряд и этот, чтобы быть успешным в лечении BD инфекциями 16.

Настоящее исследование представляет собой резюме судебного разбирательства клинического лечения с использованием итраконазола для лечения Bd инфекции 15. Протокол описывает попытку найти наименьшее время дозы и лечения, который является одновременно безопасным и эффективным для лечения Bd зараженных животных итраконазолом. Животные, используемые в этом исследовании, были недавние Metamorphs из Gulf Coast жаб, Incilius nebulifer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Утверждение Этика: Это исследование и его методы были утверждены животных по эксплуатации и уходу комитета Tulane университета (протокол не 0407.) По.

1. Тестирование на Bd инфекции

  1. Свабирование для Bd
    1. Swab животные с стерильной ватной палочкой в ​​пять раз по ventrum, пять раз на каждом бедре, с каждой стороны, и каждой конечности в общей сложности 45 ударов. Свабирование является неинвазивным методом отбора проб для Bd на амфибии кожи.
    2. Плавно поворачивайте тампон во время и между ударами, чтобы обеспечить наибольшее количество ДНК собрались на тампоном.
    3. Храните тампоны в 1,5 мл микропробирок при -20 ° С.
  2. ДНК Добыча и КПЦР анализ
    1. Извлечение геномной ДНК из мазков, используя имеющийся в продаже набор для выделения ДНК, в соответствии с инструкциями для ткани животного.
    2. Анализ извлеченной ДНК с использованием количественной ПЦР в реальном времени (КПЦР) после Бойл 17, со следующими изменениями.:
    3. Развести образцы выделения ДНК 1:10 с двойным деионизированной воды.
    4. Добавить 0,7 мкл бычьего сывороточного альбумина (BSA), чтобы предотвратить ингибирование ПЦР.
    5. Включать внутренний положительный контроль в каждом образце, чтобы обеспечить ингибирование ПЦР не влияя на результаты.
    6. Запуск образцы с положительным и отрицательным контролем и серии стандартов разбавления для оценки зооспора (инфекция) нагрузку.

2. Прививка

  1. Культура Bd
    1. Подготовка триптон бульон, добавив 10 г триптона до 1 л обратного осмоса или деионизированной воды, выдерживают в автоклаве (121 ° C в течение 40 мин) и давали остыть. После охлаждения до 23 ° С, добавить 1 мл пенициллин-стрептомицин.
    2. Расти Bd напряжение (JEL411 от Дж. Longcore, изолированных от Guabal, Панама из Phyllomedusa лемура) в триптон бульоне в течение семи дней при 23 ° С
  2. Перенести бРот культуры, чтобы триптон и агаром.
    1. Чтобы тарелки, добавить 10 г триптона и 10 г агара на 1 л обратного осмоса или деионизированной воды и автоклаве (121 ° С в течение 40 мин).
    2. После того, как в автоклаве смесь достаточно прохладно на ощупь, но, прежде чем он застывает, разлить в чашки Петри, 1/4-1/3 полный, в ламинаре.
    3. Когда агара застыла и охлаждается полностью, добавить 0,5 мл Bd бульон на каждую пластину и равномерно вокруг плиты. Дайте высохнуть.
    4. После того, как планшеты засевают Bd зооспор, печать пластин с парафильмом.
    5. Разрешить пластины для инкубации при 23 ° С в течение пяти-семи дней. Проверьте зооспора движение, чтобы обеспечить жизнеспособность перед прививкой.
  3. Наводнение пластины для зооспор решения прививки
    1. После пяти-семи дней от Bd инкубации и роста, затопить каждую тарелку с 5 мл в возрасте водопроводной водой и дайте зооспоры, чтобы войти в СМИ в течение 10 мин.
    2. Вылейте зооспор suspension в портативный контейнер.
    3. Оцените концентрации зооспор с гемоцитометре.
    4. Развести смесь до концентрации 1 × 10 6 в 3 мл возрасте водопроводной воды.
  4. Привить животных
    1. В отдельных 50 мл контейнеров, привить каждого животного путем заливки 3 мл посевной смеси над его ventrum. Разрешить дополнительный посевной капать в основание прививки контейнера.
    2. Каждое животное будет оставаться в контейнере инокуляции в течение 24 ч, чтобы обеспечить заражение.
    3. Через 24 часа прививки, вернуться животных к отдельным вылеченных террариумов.
    4. Разрешить инфекция построить в течение двух недель. Подтверждение инфекции с тампоном и результаты КПЦР, и начать лечение.
    5. Для Bd-отрицательных контролей, наводнения Bd без агаром с 5 мл в возрасте водопроводную воду, и макет привить животных с использованием тех же методов, что и выше.

3. Режим лечения

  1. Prepaповторно лечения ванной
    1. Добавить 2,50 мл водного итраконазол (1% Sporanox Раствор для приема внутрь) до 1 Решение L амфибия Рингера (0,0025% итраконазол - самая низкая эффективная концентрация лечение).
      1. Амфибия раствор Рингера рецепт: 1 L обратный осмос или деионизированная вода, хлорид натрия 6,6 г, 0,15 г хлорида калия, 0,15 г хлорида кальция и 0,2 г бикарбоната натрия. Автоклав раствор (121 ° C в течение 40 мин) и дать остыть до комнатной температуры.
      2. Для 0,01%-ной концентрации итраконазол лечения, добавьте 10.00 мл водного итраконазол (1% Sporanox Раствор для приема внутрь), чтобы решение 1 л амфибия Рингера
      3. Для итраконазол концентрации лечения 0,005%, добавить 5,00 мл водного итраконазол (1% Sporanox Раствор для приема внутрь), чтобы решение 1 л амфибия Рингера.
    2. Для Bd-положительных и Bd-отрицательных контролей, купать животных в растворе амфибия Рингера, не итраконазола.
  2. Лечение <ол>
  3. Место отдельных амфибий в вылеченных 50 мл контейнеры с 35 мл обрабатывающего раствора.
  4. Обеспечить животные полностью покрываются в течение пяти минут, осторожно вращая контейнер.
  5. Вернуться животных вылеченных террариумов. Повторите в течение шести дней.
  • Обеспечить успех лечения
    1. Экспериментальные животные для Bd инфекции на день обращения начинается.
    2. Экспериментальные животные для Bd инфекции через неделю после отделки лечения, и один раз в неделю в течение четырех недель по обеспечению инфекции освободится.
  • 4. Bd как Biohazard

    1. Лечить индивидуальный террариумов еженедельно.
      1. Купайтесь в террариумах и лечения контейнеров в 10% раствор отбеливателя ванной.
      2. Промыть каждую беленой контейнер дважды с проточной водой.
      3. Разрешить контейнеры высохнуть в течение 24 часов перед повторным использованием.
    2. Надевайте чистые нитриловые перчатки при обращении с животными, чтобы предотвратить перекрестное загрязнениеиз Bd патогена. Изменение перчатки между обработке каждого животного.
    3. Лечить все жидкие отходы перед захоронением, принося решение 10% гипохлоритом натрия.
    4. Автоклав все твердые отходы, которые может понести Bd перед удалением.

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Representative Results

    Итраконазол лечение считался успешным, если все животные были Bd-отрицательных четыре недели после лечения, закончившийся. Перед началом лечения началось, через две недели после прививки, все Bd-привитых животных были заражены, со средним зооспор нагрузки 1,121.7 (± 17,34), в то время как четыре недели после окончания лечения, BD-положительные контрольные животные имели средний зооспор нагрузку 16,765.12 ( ± 14643,08).

    Лечение Incilius nebulifer (п = 15) был успешным использованием ванны в 0,0025% итраконазол концентрации в течение пяти-минут в день в течение шести дней. Это низкая концентрация дозировка итраконазол лечения достоверно не различались в смертности по сравнению с BD-положительных контролей (Кокс регрессии: χ 2,1 = 2,17, ехр (б) = 20,500, р = 0,339) (рис. 1В), многие из которых дожили до окончания судебного разбирательства с Bd инфекции.

    Ванны 0.0025% Яtraconazole в течение 11 дней, и оба 0,005% и 0,0025% итраконазол в течение шести дней были все признаны эффективными и безопасными варианты лечения (рис. 1А и 1В). Рекомендуемая концентрация лечение и вдвое меньше, чем концентрация на длину лечения 11 дней значительно увеличился смертности по сравнению с BD-положительных контролей (Кокс регрессии: 0,01% итраконазола χ 2,1 = 35,68, EXP (B) = 307,54, р <0,01; 0,005% итраконазола χ 2,1 = 16,17, EXP (B) = 9,40 , р <0,01) (рис. 1А). 0,01% итраконазол лечение в течение 11 дней вызвало 100% смертность в I. nebulifer, и вдвое меньше, чем концентрация (0,005% итраконазол в течение 11 дней), вызванных 60% смертности (рис. 1А). Были проведены вскрытия и гистопатология для небольшой группы животных, которые умерли во время лечения. Ни одно животное в этом исследовании не умер от chytridiomycosis.


    Рисунок 1. Различия в выживаемости через итраконазола лечения 15 (а) Incilius nebulifer:. 11 г лечение (n = 15 для каждой концентрации итраконазол 0,01, 0,005, и 0,0025%, N = 17 для BD-положительной контрольной группы и п = 9 для Bd-группа отрицательного контроля). (B) I. nebulifer: 6 д лечение (n = 15 для каждого итраконазол концентрации 0,01, 0,005 и 0,0025%, N = 17 для BD-положительной контрольной группы и п = 9 для Bd-отрицательной контрольной группы). Черные стрелки указывают в последний день лечения. Сплошные линии показывают выживание контрольных группах (черный = Bd-положительных, серый = Bd-отрицательный). Пунктирные линии указывают выживание итраконазола группах (светло-серый точки = 0,01%, Средние серые точки = 0,005%, черные точки = 0.0025% итраконазол). (Эта цифра была изменена с Brannelly др.. 15, рис 1б и 1в). Нажмите здесь, чтобы увеличить изображение .

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Discussion

    Используя этот протокол мы смогли безопасно и эффективно уменьшить дозу лечения и время итраконазол лечения Bd у амфибий. Самая низкая доза и время (0,0025% в течение шести дней) лечение было успешным лечение бессимптомно инфицированных I. nebulifer. Эффективность как более низкой дозе и времени обработки свидетельствуют о необходимости клинических испытаний лечения для Bd инфекции лечение, так как в настоящее время нет безопасные и эффективные методы лечения, которые будут использоваться для всех видов и возрастных классов амфибий.

    Причиной смерти в результате итраконазол лечения неизвестна на данный момент 11. Вскрытие и гистопатология проводились на небольшой группе людей, которые умерли во время или вскоре после периода лечения в Brannelly др.. 15 исследования. Результаты этих анализов были неубедительными относительно причины смерти, хотя ясно, что ни одно животное не умериз chytridiomycosis. Умеренный автолиз произошло между смертью и сохранения образца, которые могли повлиять на нашу способность обнаруживать тонкие различия между группами лечения.

    Хотя этот протокол поддерживает существование одной безопасной и эффективной схемы лечения, больше испытаний, подобные этому должны быть в стадии реализации. Второй азол лечение, вориконазол, было продемонстрировано, чтобы быть эффективным в по меньшей мере одного вида 18. Вориконазол является более стабильным в водном растворе, чем итраконазол и было продемонстрировано, чтобы быть безопасными для использования головастика 18. Хотя одна доза лечение итраконазолом и вориконазола похожи в ценообразовании, вориконазол гораздо дороже для покупки, чем итраконазол, ведущие ученые и пленных менеджеров выбрать итраконазол более регулярно. В это время, только один опубликованное исследование продемонстрировало эффективно вориконазола 18. Чтобы продемонстрировать эффективность, больше видов должны быть опробована.

    <р = класса "jove_content"> Азол имидазола представляют один тип противогрибковой химиотерапии, что ингибировать рост грибов 13. Есть и другие методы лечения, которые направлены, чтобы убить грибкового патогена, а не просто уменьшить рост. Bd убит в пробирке при температуре выше 28 ° С и тепловой терапии направлен убить Bd в эпидермисе. Тербинафин гидрохлорид, альтернатива противогрибковое, которая была успешной в лечении Bd инфекции у некоторых видов 19, работает, вызывая лизис грибковых клеток. Имидазола, которые непосредственно атакуют возбудителя может быть более успешного лечения, и многое еще ​​предстоит сделать, чтобы проверить перспективные варианты обработки для Bd инфекции.

    Итраконазол лечение было показано, чтобы быть эффективным в субклинически зараженных животных, но лечение клинических chytridiomycosis в основном безуспешными. Только в одном исследовании на сегодняшний день 20 успешно лечить смертельно я LL земноводных и лечение участие агрессивную сочетание терапии электролита и химиотерапии. Успешные методы лечения для тяжелобольных животных необходимы, особенно для находящихся под угрозой исчезновения животных в неволе колоний, где защита каждого человека имеет важное значение для сохранения вида.

    Хотя уменьшая дозу и время обработки был успешным для I. nebulifer, лечение не опробована на других видов или животных с клинической инфекции. Некоторые виды и этапы жизни нетерпимы к итраконазол лечения, поэтому перед применением режима масштабное лечение, в неволе менеджеры должны пробный курс на небольшой группе людей, чтобы определить безопасность и эффективность. Тестирование животных, обработанных в течение по меньшей мере четырех недель после завершения лечения необходимо обеспечить ликвидацию инфекции низкий уровень 7, и должны быть выполнены после каждого курса лечения.

    палатка "> Создание безопасных и эффективных методов лечения Bd инфекций в приоритетном порядке в плен области колонии обеспечения для амфибий природоохранной деятельности. Поддержание Bd бесплатно колонии имеет важное значение для успеха усилий по сохранению и зависимых колоний может быть единственным спасательным кругом для видов на грани исчезновения .

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Disclosures

    Автор не объявляет конкурирующие финансовые интересы.

    Acknowledgments

    Я хотел бы поблагодарить CL Ричардс-Zawacki за помощью концептуализации опытно-конструкторских и оказание помощи с материалами, А. Pessier за помощью, устанавливающего режим лечения и вскрытия анализирует, МВТЧ Chatfield, МДж Робак, К. Таскер и D. Ленгерский за помощью в лабораторные и поддержка и М. Макфадден и П. Харлоу в Зоопарк Таронга за использование их пространства во время съемок. Проект был частично финансируется Луизиана Департамента дикой природы и рыболовства по гранту Луизиана комиссии по экологическому образованию, присужденной LA Brannelly и Life Technologies.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    0.1% Aqueous Itraconazole, Sporonox Janssen Pharmaceutica Inc.
    NaCl Fisher Scientific S640-500
    KCl Fisher Scientific BP366-1
    CaCl2 Fisher Scientific BP510-100
    NaHCO3 Fisher Scientific BP328-500
    Sterile cotton swabs Medical and Wire Equipment MW113
    1.5 ml Microtubes Sarstedt 73.703.217
    Qiagen DNEasy Blood and Tissue Kit Qiagen 69581
    7500 Real-time PCR Applied Biosystems 4351104
    VIC IPC Applied Biosystems 4308323
    BSA Applied Biosystems AM2618
    Agar Invitrogen 30391023
    Tryptone Invitrogen Q10029
    Penicillin-streptomycin Invitrogen 15070-063
    Petri Dish Sigma Aldrich CLS430589

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

    1. Stuart, S. N., et al. Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide. Science. 306, (5702), 1783-1786 (2004).
    2. Skerratt, L. F., et al. Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs. EcoHealth. 4, 125-134 (2007).
    3. Wake, D. B., Vredenburg, V. T. Colloquium paper: are we in the midst of the sixth mass extinction? A view from the world of amphibians. PNAS. 105, 11466-11473 (2008).
    4. Voyles, J., et al. Electrolyte depletion and osmotic imbalance in amphibians with chytridiomycosis. Dis. Aquat. Org. 77, (2), 113-118 (2007).
    5. Ramsey, J. P. Amphibian immune defenses against Batrachochytrium dendrobatidis: A war between host and pathogen. (2011).
    6. McMahon, T. A., et al. Chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis has nonamphibian hosts and releases chemicals that cause pathology in the absence of infection. PNAS. 110, (1), 210-215 (2013).
    7. Berger, L., Speare, R., Pessier, A., Voyles, J., Skerratt, L. F. Treatment of chytridiomycosis requires urgent clinical trials. Dis. Aquat. Org. 92, 165-174 (2010).
    8. Chatfield, M. W. H., Richards-Zawacki, C. L. Elevated temperature as a treatment for Batrachochytrium dendrobatidis infection in captive frogs. Dis. Aquat. Org. 94, (3), 235-238 (2011).
    9. Karbowski, M., et al. Free radical-induced megamitochondria formation and apoptosis. Free Rad. Biol. Med. 26, (98), 396-409 (1999).
    10. Bishop, P. J., et al. Elimination of the amphibian chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis by Archey's frog Leiopelma archeyi. Dis. Aquat. Org. 84, (1), 9-15 (2009).
    11. Pessier, A. P., Mendelson, J. A Manual For Control of Infectious Diseases in Amphibian Survival Assurance Colonies and Reintroduction Programs. IUCN/SSC Conservation Breeding Specialist Group. Apple Valley, MN. (2009).
    12. Page, S. W. Chloramphenicol 1. Hazards of use and the current regulatory environment. Aus. Vet. J. 68, (1), 1-2 (1991).
    13. Yoon, H. -J., Seo, M. H., Kim, J. -K. Pharmaceutical formulations for itraconazole. (2005).
    14. Garner, T. W. J., Garcia, G., Carroll, B., Fisher, M. C. Using itraconazole to clean Batrachochytrium dendrobatidis infection, and subsequent depigmentation of Alytes muletensis tadpoles. Dis. Aquat. Org. 83, 257-260 (2009).
    15. Brannelly, L. A., Richards-Zawacki, C. L., Pessier, A. P. Clinical trials with itraconazole as a treatment for chytrid fungal infections in amphibians. Dis. Aquat. Org. 101, (2), 95-104 (2012).
    16. Jones, M. E. B., Paddock, D., Bender, L., Allen, J. L., Schrenzel, M. S., Pessier, A. P. Treatment of chytridiomycosis with reduced-dose itraconazole. Dis. Aquat. Org. 99, (3), 243-249 (2012).
    17. Boyle, D. G., Boyle, D. B., Olsen, V., Morgan, J. A. T., Hyatt, A. D. Rapid quantitative detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian samples using real-time Taqman PCR assay. Dis. Aquat. Org. 60, (2), 141-148 (2004).
    18. Martel, A., et al. Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians. Med. Mycol. 49, (2), 143-149 (2011).
    19. Bowerman, J., Rombough, C., Weinstock, S. R., Padgett-Flohr, G. E. Terbinafine hydrochloride in ethanol effectively clears Batrachochytrium dendrobatidis in amphibians. J. Herpetol. Med. Surg. 20, (1), 24-29 (2010).
    20. Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis. J. Zoo Wildlife Med. 43, (2), 330-337 (2012).

    Comments

    0 Comments


      Post a Question / Comment / Request

      You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

      Usage Statistics