Выделение кровеносных сосудов, полученных мультипотентные прекурсоров от человека скелетных мышц

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Кровеносные сосуды в пределах скелетных мышц портовых нескольких мульти-клона населения предшественников человека, которые идеально подходят для восстановительных приложений. Этот метод изоляции позволяет одновременно очистку трех мультипотентными клеточных популяций предшественником соответственно из трех структурных слоев кровеносных сосудов: миогенные эндотелиальных клеток из интиме, Перициты от СМИ, и адвентициальные клеток от адвентиции.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Chen, W. C., Saparov, A., Corselli, M., Crisan, M., Zheng, B., Péault, B., Huard, J. Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle. J. Vis. Exp. (90), e51195, doi:10.3791/51195 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

С момента открытия мезенхимальных стволовых / стромальных клеток (МСК), уроженец идентичность и локализация МСК были затемняется ретроспективном изоляции в культуре. В последнее время, с помощью флуоресцентной активированный сортировки клеток (FACS), мы и другие исследователи определили перспективно и очищенный три субпопуляции мультипотентных клеток-предшественников, связанных с сосудистой скелетных мышц человека. Эти три популяции клеток: миогенные эндотелиальные клетки (МИК), Перициты (ПК), и адвентициальные клетки (ACS), локализованы соответственно к трем структурных слоев кровеносных сосудов: интима, СМИ и адвентиции. Все эти человеческого кровеносных сосудов стволовых клетки (hBVSC) населения не только выразить классические маркеры MSC, но и обладают мезодермальные потенциалы развития, аналогичные типичных МСК. Ранее СОВС, ПК, и кондиционеры были выделены через различные протоколы и впоследствии характеризуют в отдельных исследованиях. Нынешний прот изоляцияocol, посредством изменения процессе выделения и корректировок в селективных маркеров клеточной поверхности, позволяет нам одновременно очистить все три hBVSC субпопуляции от FACS из одного биопсии мышц человека. Этот новый метод будет не только оптимизировать изоляцию нескольких субпопуляций BVSC но и облегчить будущие клинического применения hBVSCs для различных терапевтических целей.

Introduction

Скелетных мышц человека была рассмотрена клинически привлекательным источником стволовых клеток / клеток-предшественников. Скелетных мышц содержит не только совершил миогенные предшественники, скелетные миобластов, но и примитивные миогенные стволовых клеток, в том числе спутниковых клеток и мышечных стволовых клеток (MDSCs) 1. Использование мышечных клеток, полученных человека стволовых / прогениторных, аутологичных или аллогенных, в регенеративной медицине широко исследованы в доклинических моделях животных и клинических испытаний. Регенеративные применения мышечных стволовых клеток / клеток-предшественников в диапазоне от регенерации дистрофические мышцы в мышечной дистрофии Дюшенна (МДД) пациентов ремонтом травмированного сердце у пациентов с сердечным приступом.

С момента открытия мезенхимальных стволовых / стромальных клеток (МСК) и других мультипотентными клеточных популяций предшественника, в том числе мозга, полученных мультипотентными клеток костного взрослых предшественников (MAPCs) и полученные из жировой ткани стволовые клетки (ADSCs), взрослые стволовые /клетки-предшественники были широко изучены на сегодняшний день 1-9. Тем не менее, их родной идентичность и локализация на месте были затемняется ретроспективных методов изоляции. В последнее время с помощью сортировки флуоресценции активированных клеток (FACS), мы и другие группы перспективно определены и очищенные три мультипотентные клеточные популяции предшественника из кровеносных сосудов в пределах скелетных мышцах человека и ряда других органов: миогенные эндотелиальные клетки (МИК), перицитами (ПК), и адвентициальные клетки (кондиционеры) 10. Эти три субпопуляции человека кровеносных сосудов стволовых клеток (hBVSCs) может быть соответственно найти в трех структурных слоев кровеносных сосудов: внутренней оболочки, средняя оболочка, и туника адвентиции. Более конкретно, МИК и ПК обнаружены в микрососудов и капилляров в то время как кондиционеры локализованы в адвентиции слой больших артерий и вен. Каждая клетка-предшественник подмножество выражает уникальное сочетание антигенов клеточной поверхности: MECs (CD34 + / 56 + / 144 + / 45 -), ПК (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -), и КК (CD34 + / 31 - / 45 - / 56 - / 146 -).

Дальнейшая характеристика этих hBVSC подмножеств показало, что все три популяции клеток предшественник обладают мезодермальные потенциалы развития, аналогичные типичных МСК, в том числе скелетной миогенеза, остеогенез, хондрогенеза и адипогенеза. Все подмножества hBVSC также демонстрируют классические маркеры MSC, в том числе CD44, CD73, CD90, CD105 и, недавно, и в культуре. В совокупности эти улики поддержал сосудистого происхождения МСК. Кроме того, терапевтические мощности MECs, ПК и КК недавно было продемонстрировано в отдельных исследованиях. MECs Начиная от взрослых биопсии человека мышечных были показаны для восстановления травмированных и дистрофические скелетных мышц и ремонта ранения миокарда более эффективно, чем скелетные миобластов и сосудов эндоthelial клетки (ECS). Очищенные ПК от различных органов человека, также было показано для ремонта / регенерации травмированных и дистрофические скелетных мышц и способствовать бассейна спутниковым клеток 13-16. Совсем недавно, мы продемонстрировали, что ПК, полученные из скелетных мышц человека эффективно восстанавливать инфаркта миокарда с помощью косвенных паракринного эффекта и прямых клеточных взаимодействий 17. ACS, с другой стороны, были либо непосредственно выделены из эксплантированных кровеносных сосудов или очищают с помощью FACS из жировой ткани человека и скелетных мышцах. Заметным проангиогенных эффект кондиционеров была продемонстрирована в мыши задних конечностей ишемии модели 19. Кроме того, кондиционеры, также было показано, чтобы восстановить инфаркта миокарда более эффективно, чем обычные МСК, что указывает на устойчивую терапевтический потенциал кондиционеров в ишемической восстановления тканей 20.

Нынешние гранты протокола очистки одновременные, проспективное очистка СОВС, ПК, иКК с сосудистой одного человека биопсии скелетных мышц. Это позволяет изучать и / или выбрать оптимальный hBVSC субпопуляции для различных терапевтических целей. Кроме того, эта новая техника расширяет репертуар стволовых клеток / клеток-предшественников, которые могут быть получены из скелетных мышц человека, что делает его идеальным источником мультипотентных клеток-предшественников для регенеративной медицины.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1 биопсии мышц Обработка

  1. Сохранение человеческого биопсии скелетных мышц на льду в Дульбекко в модификации Дульбекко (DMEM) с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина-стрептомицина (P / S) во время транспортировки.
  2. После получения мышечной биопсии, удаления образца из транспортировочного контейнера и промойте его дважды в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 2% антибиотик противогрибкового раствора (A / A) в стерильных условиях.
  3. Удалить прилагаемый жировой и соединительной ткани с стерильными ножницами и щипцами в DMEM, дополненной 2% A / A.
  4. Удалить большие кровеносные сосуды под микроскопом рассечение и впоследствии сократить образец мышечные на мелкие кусочки (<1 см 2 в размере).
  5. Заповедник вырезать мышечные части (<5 грамм) в 20 мл сохранение среды (PM; DMEM с добавлением 10% FBS и 1% P / S) в 4 ℃ до 5 дней.

2 Мышцы Dissociatионов и Выделение клеток

  1. В день выделения клеток, мышечные удалить части от PM и мыть дважды в PBS с добавлением 2% P / S. Для того, чтобы пищеварение решение, добавить тип-I, II типа, и тип-IV коллагеназ (100 мг / мл) недавно в PM.
  2. Мелко нарезать и механически фарш мышечные части стерильными ножницами и пинцетом в чашку Петри с небольшим количеством PM, пока раствор не проходит 10 мл серологической пипеткой, не свертывания. Удаления остаточного жировой и соединительной ткани в ходе этого процесса. Используйте по крайней мере 8-10 граммов взрослого мышцы или 2 грамма плода мышцы для каждого выделения клеток.
  3. Трансфер 4-5 граммов фарша взрослого мышцы до 20 мл (или 2 грамма фарша плода мышцы в 10 мл) OFTHE пищеварения раствора с 10 мл серологические пипетки. Дайджест 50 - 60 мин при температуре 37 ℃ на орбитальном шейкере при 70 - 80 оборотов в минуту. Оптимизация выход клеток и сохранение антигенной поверхности путем регулирования времени пищеварение и / или скорость перемешивания, соответственно, в расчете на количествотканей. Соблюдайте статус пищеварение каждые 15-20 мин, пока мутность почти не очищает.
  4. Энергично пипетки переваренной ткани в 3-5 раз с 10 мл серологические пипетки. Добавить равное количество ТЧ, чтобы остановить реакцию, а затем центрифугируют при 400 х г в течение 4 мин.
  5. Осторожно удалите супернатант; ресуспендируют осадок в 10 мл PM мыть, а затем фильтруют через сито 100 мкм клеток.
  6. Центрифуга при 400 мкг в течение 4 мин и осторожно удалите супернатант. Ресуспендируют гранулы в буфере для лизиса эритроцитов (155 мМ NH 4 Cl, 10 мМ КНСО 3, 0,1 мм ЭДТА), фильтруют через 70 мкм сито клеток для получения суспензии отдельных клеток, а затем инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. Фильтр через ситечко 70-m клеток снова, если наблюдается любой осадков.
  7. Центрифуга при 400 мкг в течение 4 мин и ресуспендируют осадок клеток в 0,5 мл PBS. Подсчитайте количество клеток. Получить в общей сложности не менее 5 миллионов клеток для сортировки клеток. Развести одэлектронной клеточной суспензии до менее чем 5000000 клеток на мл с PBS для окрашивания. Выньте 50-100 мкл клеточной суспензии и раскола в 11 труб для контроля окрашивания (неокрашенных контроля, отрицательного контроля, и одноцветных положительные контроли).

3 Маркировка сотовый и сортировка

  1. Инкубируйте клеточной суспензии в течение 10 мин при 4 ℃ в мышиной сыворотке (разбавленного 1:10 в PBS) для блокирования цели, если это необходимо.
  2. Добавить CD34-APC, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PE и CD146-FITC (все 1: 100) в суспензии отдельных клеток, инкубировать 20 мин при 4 ℃. Для отрицательного контроля, добавить эквивалентные концентрации Apc-, APC-Cy7-, PE-Cy7-, ПЭ, и FITC-конъюгированных антител изотипа IgG, и инкубируют в течение 20 мин при 4 ℃. Для одноцветных положительных контролей, добавить эквивалентные концентрации CD34-АПК, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PE, и CD146-FITC отдельно в каждую пробирку и инкубируют в течение 20 мин при 4 ℃.
  3. После инкубации, Центрифуги при 400 мкг в течение 4 мин, чтобы вымыть. Ресуспендируют осадок клеток в 1 - 2 мл DMEM, дополненной 5% FBS и 1% P / S. Конечная концентрация суспензии клеток должно быть не менее 5000000 клеток на мл. Добавить 7-AAD (1: 100) и выдержать в течение 15 минут при комнатной температуре для мертвой клетки исключения. Для отрицательного контроля и одноцветных положительных контролей, ресуспендируют клеточных осадков в 0,5 мл DMEM, дополненной 5% FBS и 1% P / S.
  4. Перенесите все клеточные суспензии для круглым дном потока полистирола цитометрии труб. Подготовьте сбора клеток трубки (каждая трубка предварительно наполненный 500 мкл соответствующей культуральной среде: MPM для MECs; EGM-2 для персональных компьютеров; переменного тока среда для ACS). Транспорт клеточные суспензии на льду к клеточной сортировщика.
  5. Запуск клеточные суспензии на клеточной сортировки в порядке неокрашенной контроля, отрицательного контроля, одноцветных положительного контроля, и главной клеточной суспензии во время настройки интенсивности лазерного излучения, компенсацию канала, и клеточную популяцию стробирования строго, чтобы максимизировать клеток рurity (пожалуйста, обратитесь к статьям, опубликованным Юпитера и других журналов для деталей проточной цитометрии).
  6. Соберите нужные клеточных популяций в соответствующих пробирок. Хранить собранные клеток при 4 ℃ если не посев сразу.

4 Сообщение сортировки Клеточная культура

  1. Семенной отсортированный СОВС (p0) на <10000 клеток / см 2 в MPM на тарелки предварительно покрытых типа-я коллагена. Для последующего пассирования MECs, семян 3500 - 4000 клеток / см 2 в MPM на пластинами / колб предварительно покрытых типа-я коллагена.
  2. Семенной отсортированный ПК (p0) на <20000 клеток / см 2 в ВОСА-2 на тарелки недавно покрытых 0,2% желатином. Для последующего пассирования ПК, разбить ячейки в соотношении 1: 3 в PC среде (DMEM не дополненной 20% FBS и 1% P / S) на регулярных полистирол пластин культуры до Р2. От P3 вперед, семенные клетки в 6500 - 7000 клеток / см 2 в PC среды на регулярных полистирол культуры пластинами / колбах.
  3. Семенной отсортированный кондиционеров (P0) в <20000 клеток / см 2 в AC (DMEM с добавлением 20% FBS и 1% P / S) на регулярных полистирол пластин культуры. Для последующего пассирования кондиционеров, семенных клеток в 6500 - 7000 клеток / см 2 в AC среды на регулярных полистирол культуры пластинами / колбах.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Параметры FACS сначала корректируется на основе данных, полученных из неокрашенной контроля, отрицательного контроля, и одноцветных положительного контроля данных. После исключения мертвых клеток, меченных флуоресценции суспензии клеток подвергают серии отрицательных и положительных маркеров клеточной поверхности выделений. Во-первых, CD45 + клетки закрытого типа перед CD56 + и CD56 - клетки отделяют от CD45 - фракцию. CD56 + фракции дополнительно подвергают селекции CD34-CD144, где только CD34 + / CD144 + (двойной положительные) клетки помечены как СОВС (CD34 + / 56 + / 144 + / 45 -), а затем собирали (фиг.1). Кроме того, CD56 - фракцию дополнительно подвергают селекции CD34-CD146, CD34, где только - / CD146 + клетки, выделенные как ПК (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -), а затем собирали ( + / CD146 - фракцию подвергают дополнительной селекции отрицательный CD31 исключить ECS (CD34 + / CD31 +), и только CD34 + / CD31 - подмножество помечен как КК (CD34 + / 31 - / 45 - / 56 - / 146 -) для сбора (Рисунок 1). Чтобы упростить процесс, CD144 может быть использован для замены CD31 для исключения ЭК.

Недавно отсортировано клетки могут быть посеяны в условиях культивирования указанных в протоколе для дальнейшего расширения или использовать сразу для экспериментов в естественных условиях. Клональной экспансии hBVSC подмножеств может быть достигнуто с помощью системы autoclone FACS Aria или методом серийных разведений 13, 21. В отличие от типичных гетерогенных МСК, культуры hBVSC подмножеств остается однородным даже после долговременного расширения. Представитель морфология культивируемых hBVSC подмножеств, очищают от мышечных биопсийдонором, показана на рисунке 2. Сравнения между типичными МСК и очищенных hBVSC подмножеств приведены в таблице 1.

Рисунок 1
Рис.1 представитель сортировка трех подмножеств человека кровеносных сосудов-стволовых клеток, полученных (hBVSCs) от одного человека скелетной мышечной биопсии. Чистоту каждого отсортированного клеточной популяции далее подтверждается анализом после сортировки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенное рисунке.

Рисунок 2
Рис.2 три hBVSC субпопуляции, отсортировано по однородности, выставлены отличную морфологию в сulture (слева направо): миогенной эндотелиальных клеток (MEC), перицитов (PC), и адвентициальная клеток (AC) (при прохождении 4, масштабные линейки = 100 мм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

МСК MECs ПК Кондиционеры
Чистота Гетерогенных Однородная Однородная Однородная
Клеточной поверхности профиля антиген для очистки N / A CD34 + CD56 + CD45- CD144 + CD31- CD34 + CD45- CD146-
MSC выражение маркер в культуре CD29 + CD44 + CD73 + CD90 + CD105 + CD29 + CD44 + CD90 + CD105 + CD44 + CD73 + CD90 + CD105 + CD44 + CD73 + CD90 + CD105 +
Мультипотентность Миогенез (+) адипогенеза (+) остеогенез (+) Хондрогенез (+) Миогенез (+) адипогенеза (+) остеогенез (+) Хондрогенез (+) Миогенез (+) адипогенеза (+) остеогенез (+) Хондрогенез (+) Миогенез (N / A) адипогенеза (+) остеогенез (+) Хондрогенез (+)
Потенциальные области применения Skeletomuscular ремонт / регенерации: костей, хрящей, сухожилий, связок, и скелетных мышц; Сердечная ремонт; Сосудистая ремонт; Заживления ран; Иммунорегул Сердечная ремонт; Скелетных мышц ремонт / регенерации; Кости / Хрящ ремонт / регенерации Сердечная ремонт; Сосудистая ремонт / регенерации; Скелетных мышц ремонт / регенерации; Регенерация кости Сердечная ремонт; Сосудистая ремонт / регенерации; Регенерация кости
Анатомическая локализация на месте N / A Кровеносных сосудов интима Кровеносных сосудов Медиа Кровеносных сосудов адвентиции

Таблица 1 Сравнение типичных МСК и мультипотентными hBVSC субпопуляции.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Идентификация и очистка hBVSC субпопуляций представляют собой важный шаг вперед в постижении MSC онтогенеза. Существует все больше свидетельств, указывающих на периваскулярное происхождение МСК и связь между тканеспецифических клеток-предшественников и кровеносных сосудов 22-25. Кроме того, способность изолировать однородные субпопуляции из hBVSCs дальше СПИДа понимание MSC неоднородности и сосудистой клеточной биологии 26.

В последние несколько лет, MECs, ПК, и кондиционеры были индивидуально идентифицировать и выделить через различные протоколы в отдельных исследованиях. Тем не менее, никакая попытка не была сделана, чтобы очистить все три hBVSC подмножества одновременно с скелетных мышц человека в связи с трудностями, чтобы оптимизировать процедуру ткани диссоциации и сочетание селективных маркеров клеточной линии, идентифицирующую СОВС, ПК и кондиционеров в целом. Здесь мы описали новый протокол выделения клеток, что позволяет одновременную Purification из MECs, ПК и КК из одного биопсии мышц человека путем модификации процесса диссоциации ткани и применения новой комбинации селективных маркеров клеточной поверхности (Рисунок 1). Для лучшего результата, критические шаги в текущем протоколе, которые требуют дополнительного внимания включают: 1 Свежесть и сохранность образца ткани; 2 Оптимизация доходности клеток и сохранения поверхностного антигена по тщательный мониторинг процесса пищеварения и регулирования времени ткани диссоциации; 3 Точная калибровка шестицветной проточной цитометрии. Эти параметры должны быть определены по отдельной лаборатории в соответствии с его конкретной установки питания / оборудования.

Реализуя этот новый протокол, можно не только упорядочить синхронное выделение нескольких групп населения hBVSC но и облегчить использование hBVSCs для фундаментальных исследований и поступательного приложения, например, сравнения дифференциальных сотовых поведения между hBVSC подмножества и оптимизация одного или комбинаторной hBVSC подмножества (ов) для различных персонализированных терапевтического применения. Тем не менее, одновременно изоляция всех трех hBVSC подмножеств в настоящее время ограничивается скелетных мышц в связи с тем, что МИК не были идентифицированы в других тканях человека. Кроме того, это выходит за ограничения текущего протокола, чтобы отличить переход и / или сотовой иерархию между этими тремя hBVSC субпопуляции.

Характеристика свежевыделенные и культивировали MECs, ПК, и КК была отдельно показано в предыдущих исследованиях MECs в культуре поддерживать экспрессию миогенной маркера CD56, но постепенно теряют экспрессию маркеров ЕС CD34 и CD144. В клонального уровне, MECs выразить MSC маркеры, включая CD29, CD44, CD90, CD105 и, и отображать мезенхимальные дифференциальным потенциалом, такие как хондрогенеза, остеогенез, адипогенеза и миогенеза. Кроме того, клональные MECs сохраняют свою angiogenЕмкость IC после длительного культуры, образуя капиллярные-сети, как в Matrigel культуры и участие в новых сосудов в естественных условиях 21.

ПК, свежие или культивированный, как было показано, не только выразить MSC маркеры CD44, в том числе, CD73, CD90, CD105 и, но также демонстрируют мезодермальных возможности развития, например, скелетные миогенеза, остеогенез, хондрогенезе и адипогенеза 13. ПК решительно выделяют ряд трофических факторов, даже в условиях гипоксии, и служат рекуперации путем их паракринного функции, прямой дифференцировки и клеточного взаимодействия во время ремонта ткани / процесса регенерации ACS, похожи на ПК, были показаны, чтобы выразить классические маркеры MSC и дифференцироваться в крупных линиях мезенхимальных клеток 18. Вместе с ПК, кондиционеры, также были предложены в качестве одного из истоков развития МСК. Резюме Сравнивая выражение поверхностный маркер, дифференциация потенциала, и ржно поступательные приложения между типичными МСК и hBVSCs были перечислены в таблице 1. Недавно Тан и соавт. идентифицированные мультипотентных стволовых клеток сосудов (MVSCs) от средней оболочки крупных кровеносных сосудов в крысы и человека 29. MVSCs не только дифференцироваться в клетки гладкой мускулатуры, но и внести свой ​​вклад в ремоделирования сосудов и гиперплазии неоинтимы после повреждения сосудов 29. Будь MVSCs поделиться связи с развитием с BVSCs проживающих в микроциркуляторного и малых судов требует дальнейшего изучения.

Текущий протокол требует изоляции своевременное клеток от свежей человеческой мышечной биопсии, которая, порой, не могут быть доступны в клинических условиях. С другой стороны, на основе модифицированного набора селективных маркеров клеточной поверхности, целесообразно, чтобы очистить СОВС и ПК от криоконсервированных первичных культурах человеческих клеток скелетных мышц с помощью проточной цитометрии 30. Этот метод позволяет проспективное Purification из двух подмножеств hBVSC от консервированной скелетных мышц культуры в лечебных целях. Тем не менее, в связи с отсутствием CD34 экспрессии в культивируемых клетках человека мышечных, это не возможно, чтобы в дальнейшем выделить кондиционеров с этим конкретным протоколом.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Авторы хотели бы поблагодарить Элисон Логар за отличную техническую помощь с проточной цитометрии. Эта работа была поддержана грантами от Министерства обороны (JH), Генри Дж Манкин Обладая кафедры (JH) и Министерства образования и науки Республики Казахстан (AS). КХО была частично поддержана со стороны predoctoral общении Американской ассоциации сердца (11PRE7490001). M.Corselli при поддержке Калифорнийского института регенеративной медицины учебного гранта (TG2-01169).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Collagenase type 1 Sigma C5894 Sterile vial
Collagenase type 2 Sigma C1764 Sterile vial
Collagenase type 4 Sigma C1889 Sterile vial
Anti-human CD34 APC BD Pharmingen 555824 Keep sterile
Anti-human CD45 APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
Anti-human CD56 PE-Cy7 BD Pharmingen  557747 Keep sterile
Anti-human CD144 PE Beckman Coulter A07481 Keep sterile
Anti-human CD146 FITC AbD Serotec MCA2141F Keep sterile
FACS Aria II Flow Cytometer Becton-Dickinson
EGM-2 complete medium Lonza CC-3162 For culturing PCs (only P0)
DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, without sodium pyruvate Invitrogen 11965 For culturing PCs
DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, with sodium pyruvate Invitrogen 11995 For culturing MECs and ACs
Fetal bovine serum Invitrogen 10437-028
Heat-inactivated horse serum Invitrogen 26050-088
Penicillin/streptomycin Invitrogen 15140-122
Antibiotic-antimycotic (100X) Invitrogen 15240-062
Trypsin-EDTA 0.5% (10X) Invitrogen 15400-054
Dulbecco’s PBS without calcium and magnesium Invitrogen 14190-250
Chick embryo extract Accurate Chemical CE650T-10 Filter before use

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Peault, B., et al. Stem and Progenitor Cells in Skeletal Muscle Development. Maintenance, and Therapy. Mol Ther. 15, 867-877 (2007).
  2. Toma, J. G., et al. Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin. Nat Cell Biol. 3, 778-784 (2001).
  3. Zuk, P. A., et al. Human Adipose Tissue Is a Source of Multipotent Stem Cells. Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).
  4. Zimmerlin, L., et al. Stromal vascular progenitors in adult human adipose tissue. Cytometry. 77, 22-30 (2010).
  5. Reyes, M., et al. Origin of endothelial progenitors in human postnatal bone marrow. The Journal of Clinical Investigation. 109, 337-346 (2002).
  6. Choi, Y., Ta, M., Atouf, F., Lumelsky, N. Adult pancreas generates multipotent stem cells and pancreatic and nonpancreatic progeny. Stem Cells. 22, 1070-1084 (2004).
  7. Zengin, E., et al. Vascular wall resident progenitor cells: a source for postnatal vasculogenesis. Development. 133, 1543-1551 (2006).
  8. Corselli, M., Chen, C. W., Crisan, M., Lazzari, L., Peault, B. Perivascular ancestors of adult multipotent stem cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 1104-1109 (2010).
  9. Ballas, C. B., Zielske, S. P., Gerson, S. L. Adult bone marrow stem cells for cell and gene therapies: Implications for greater use. Journal of Cellular Biochemistry. 85, 20-28 (2002).
  10. Chen, C. -W., Corselli, M., Péault, B., Huard, J. Human Blood-Vessel-Derived Stem Cells for Tissue Repair and Regeneration. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 597439 (2012).
  11. Zheng, B., et al. Prospective identification of myogenic endothelial cells in human skeletal muscle. Nat Biotech. 25, 1025-1034 (2007).
  12. Okada, M., et al. Myogenic Endothelial Cells Purified From Human Skeletal Muscle Improve Cardiac Function After Transplantation Into Infarcted Myocardium. Journal of the American College of Cardiology. 52, 1869-1880 (2008).
  13. Crisan, M., et al. A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs. Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).
  14. Park, T. S., et al. Placental Perivascular Cells for Human Muscle Regeneration. Stem Cells and Development. 20, 451-463 (2011).
  15. Dellavalle, A., et al. Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells. Nat Cell Biol. 9, 255-267 (2007).
  16. Dellavalle, A., et al. Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells. Nat Commun. 2, 499 (2011).
  17. Chen, C. -W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. STEM CELLS. 31, (2), 305-316 (2012).
  18. Corselli, M., et al. The tunica adventitia of human arteries and veins as a source of mesenchymal stem cells. Stem Cells and Development. 21, 1299-1308 (2012).
  19. Campagnolo, P., et al. Human Adult Vena Saphena Contains Perivascular Progenitor Cells Endowed With Clonogenic and Proangiogenic Potential. Circulation. 121, 1735-1745 (2010).
  20. Katare, R., et al. Transplantation of Human Pericyte Progenitor Cells Improves the Repair of Infarcted Heart Through Activation of an Angiogenic Program Involving Micro-RNA-132 / Novelty and Significance. Circulation Research. 109, 894-906 (2011).
  21. Zheng, B., et al. Human myogenic endothelial cells exhibit chondrogenic and osteogenic potentials at the clonal level. Journal of Orthopaedic Research. 31, 1089-1095 (2013).
  22. Caplan, A. I. All MSCs Are Pericytes. Cell Stem Cell. 3, 229-230 (2008).
  23. Feng, J., Mantesso, A., Sharpe, P. T. Perivascular cells as mesenchymal stem cells. Expert Opinion on Biological Therapy. 10, 1441-1451 (2010).
  24. Tang, W., et al. White Fat Progenitor Cells Reside in the Adipose Vasculature. Science. 322, 583-586 (2008).
  25. Krautler, N. J., et al. Follicular Dendritic Cells Emerge from Ubiquitous Perivascular Precursors. Cell. 150, 194-206 (2012).
  26. Phinney, D. G. Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy. Journal of Cellular Biochemistry.113. 113, 2806-2812 (2012).
  27. Chen, C. -W., et al. Perivascular multi-lineage progenitor cells in human organs: Regenerative units, cytokine sources or both. Cytokine and Growth Factor Reviews. 20, 429-434 (2009).
  28. Lin, C. -S., Lue, T. F. Defining Vascular Stem Cells. Stem Cells Dev. 22, 1018-1026 (2013).
  29. Tang, Z., et al. Differentiation of multipotent vascular stem cells contributes to vascular diseases. Nat Commun. 3, 875 (2012).
  30. Zheng, B., et al. Isolation of myogenic stem cells from cultures of cryopreserved human skeletal muscle. Cell Transplant. 21, 1087-1093 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics