셀 라벨 및 초상 자성 산화철 나노 입자로 타겟팅

Bioengineering

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Tefft, B. J., Uthamaraj, S., Harburn, J. J., Klabusay, M., Dragomir-Daescu, D., Sandhu, G. S. Cell Labeling and Targeting with Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles. J. Vis. Exp. (104), e53099, doi:10.3791/53099 (2015).

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Abstract

세포 치료제의 표적 전달이 오프 - 표적 부위에 악영향을 최소화하면서 목표 부위에 치료 효과를 집중하여 의치 광범위한 애플리케이션 혜택 것이다. 자기 세포 타겟팅, 효율적인 안전하고 간단 전달 기술이다. 초상 자성 산화철 나노 입자 (SPION)은 생체 적합성, 생분해 성이며, 자기장에 응답들을 렌더링하기 위해 세포로 endocytosed 수있다. 합성 과정은 마그네타이트 FE (3 O 4)를 생성하는 것을 포함하는 폴리 (락트산 - 코 - 글리콜 산) (PLGA) 코팅을 형성하는 고속 유화 나노 입자. PLGA-마그네타이트 SPIONs는 약 10 nm의 직경을 포함 마그네타이트 코어 직경이 약 12​​0 나노 미터이다. 문화 매체에 배치 할 때, SPIONs 자연스럽게 세포에 의해 endocytosed 및 세포질 엔도 좀 내 작은 클러스터로 저장됩니다. 이들 입자는 세포에 충분한 질량을 부여 자성자기장 내에서 대상을 허용합니다. 수많은 세포 정렬 및 대상 응용 프로그램은 자기장에 반응하는 다양한 세포 유형을 렌더링하여 사용할 수 있습니다. SPIONs뿐만 아니라 종양 치료 또는 조직 솔더링 로컬 고열증의 의료 영상 조영제로 사용, 표적 유전자 또는 약물 전달, 진단 분석 및 생성을 포함하는 다른 생물 의학 다양한 애플리케이션을 갖는다.

Protocol

자철광 젤 1. 합성

  1. 에틸 알코올 다음에 탈 이온수 다음에 진한 염산을 사용하여 모든 유리 제품을 씻으십시오. 바람직하게는 건조 오븐에서, O / N을 건조하도록 허용합니다.
    주의! 염산 유해 - 흄 후드에서 개인용 보호 장비는 작업을 착용; 에틸 알코올은 유해한 - 개인 보호 장비를 착용하십시오.
  2. 탈 가스 탈 H 2 O의 500 mL로 부드럽게 30 분 동안 N 2 가스 버블 링에 의해 Dreschel 병을 사용합니다.
  3. 셋업 화학 물질 흄 후드 내에서 자철광 합성 장치.
    1. isomantle 히터 내에 500㎖의 3 구 둥근 바닥 플라스크를 놓고 클램프를 사용하여 중심 목을 고정 및 스탠드.
    2. 환저 플라스크의 목의 측면에 하나의 고무 격막 나머지 측 경부에 고무 격막과 환류 냉각기를 설치한다. 지속적으로 환류 냉각기를 통해 차가운​​ 물을 실행합니다.
    3. 펑크 일E 환저 플라스크의 고무 N 2 가스 라인에 연결된 바늘을 격막과 기포에 실행 가스 라인에 연결된 바늘을 환류 응축기의 고무 격막을 천공 (즉, 물을 플라스크) 가스 유출을 시각화.
    4. 패들 어댑터를 통해 둥근 바닥 플라스크의 중심 목에 블레이드 패를 설치합니다. 스탠드에 장착 된 오버 헤드 교반기에 블레이드 패의 샤프트를 연결합니다.
  4. N 2 가스로 둥근 바닥 플라스크를 제거하고 낮은하지만 검출 속도로 흐르는 N 2 가스를 둡니다.
  5. 둥근 바닥 플라스크에서 환류 응축기를 제거하고, 철 (III) 클로라이드, 철 0.6125 g (II) 클로라이드 수화물 1.000 g을 추가하고, 탈기 H 2 O 50 ㎖
    주의! 철 (III) 클로라이드 및 철 (II) 클로라이드 테트라는 유해한 - 개인 보호 장비를 착용하십시오.
  6. 50 가열하면서 환류 냉각기를 교체하고 1,000 rpm에서 교반° C. 이러한 조건에서 교반은 10 나노 미터 직경의 마그네타이트 나노 입자를 생성합니다.
  7. 일단 50 ℃에서 계속 교반 둥근 바닥 플라스크에 고무 격막을 통해 주입하여, 28 % 수산화 암모늄 용액 10 ㎖를 추가한다.
    주의! 수산화 암모늄은 유해한 - 개인 보호 장비를 착용하십시오.
    주 : 수산화 암모늄 용액 마그네타이트를 침전 사용되고 용액 검게한다.
  8. 계속 교반하면서 암모니아 가스를 끓여 90 ℃로 둥근 바닥 플라스크 및 열에서 고무 격막 및 N 2 가스 라인을 제거합니다.
    주 : 환류 응축기의 고무 격막을 천공하여 둥근 바닥 플라스크에 N (2)의 흐름을 유지하는 것이 선택적이다, 그러나, 마그 헤 마이트에 마그네타이트의 산화가이 단계에서 무시할 수있다.
  9. 계속 교반하면서 한 번에 90 ℃에서, 둥근 바닥 플라스크에 올레산 1 ㎖를 추가한다. 올레산 노나 코팅 마그네타이트를 사용noparticles는 마그네타이트 겔을 형성한다.
    주의! 올레산은 유해 - 개인 보호 장비를 착용하십시오.
  10. 둥근 바닥 플라스크에 고무 격막 및 N 2 가스 라인을 교체하고 환류 냉각기를 제거합니다.
  11. 2 시간 동안 500 rpm에서 열 및 교반을 끕니다.
  12. isomantle 히터에서 둥근 바닥 플라스크를 꺼내고 마그네타이트 겔을 보유하는 형틀의 저부에 대해 유지 강력 자석을 사용하는 동안 남아있는 액체를 가만히 따르다.
    주의! 손상이나 부상을 방지하기 위해 극도의주의 강한 자석을 처리합니다.
  13. (선택 사항) / N은 ​​공기 건조 O에 자철광 젤을 허용합니다.

자철광 젤 2. 정제

  1. 마그네타이트 겔을 용해시키기 위해 둥근 바닥 플라스크에 헥산 40 mL로 추가
    주의! 헥산 유해한 - 흄 후드에서 개인용 보호 장비는 작업을 착용하십시오.
  2. 잔류 H 2 O를 제거하는 이리저리 탈기 H 2 O 40 mL를 분별 깔때기를 사용하여마그네타이트 용액 미터.
    1. 천천히 분리 깔때기 내의 H 상 자철광 솔루션 2 O을 부어 부드럽게 5 분 동안 2 상 액체 소용돌이 친다.
    2. 밖으로 배출 및 하부 수성 부분을 폐기합니다.
    3. 천천히 마그네타이트 용액 아래가 침전되도록 분별 깔때기로 탈기 H 2 O 40를 가하여 천천히 소용돌이 이전 드레인.
    4. 세 번째 씻어 반복합니다.
  3. , 삼각 플라스크에 마그네타이트 용액을 전송 무수 황산나트륨 상당 몇 주걱을 추가 소용돌이 마그네타이트 용액에 남아있는 잔류 H 2 O를 제거 하였다.
  4. 황산나트륨 및 잔류 H 2 O를 제거하는 필터 깔때기 1 ㎛ 여과지 마그네타이트 용액 필터
    참고 : 진공 지원이 좋습니다.
  5. 50 ㎖ 플라스크에 증발 마그네타이트 용액을 옮기고 용 헥산을 증발시켜, 회전 증발기를 사용하여다음의 조건으로 2 시간 : 중간 회전 속도, 진공을 50 ℃의 수욕을 증발 플라스크에, 도포하고, 24 ° C의 물을 순환하는 콘덴서.
    참고 : 선택적으로, PLGA으로 코팅하기 전에 자철광 젤을 저장합니다.

PLGA 셸 자철광 나노 입자의 코팅 (3)

  1. 1.5 % (m / v)의 용액을 만들고, 에틸 아세테이트 240 ㎖ 중의 3.60 g의 PLGA (75/25 블렌드)를 녹인다. 주의 : 에틸 아세테이트는 유해한 - 흄 후드에서 개인용 보호 장비는 작업을 착용하십시오.
  2. 5.0 % (m / v)의 용액을 만들기 위해 자석 교반기를 사용하여 탈기 H 2 O 500ml에 플루로 닉 F-127 25.00 g을 용해.
    주 : 플루로 닉 F-127은 생체 적합성 계면 활성제로 작용 비이 온성 양친 성 블록 공중 합체이다. 이 단계 3.3.2 중유 에멀젼을 안정화하는데 도움.
  3. microspatula를 사용하여 가중 유리 병 안에 여섯 0.040 g 씩에 자철광 젤를 수집합니다. 반환 한각 나누어지는에 대한 다음과 같은 코팅 및 세척 과정을 ORM.
    참고 : 분취 액을 4 단계에서 분해 이전하는 동결 건조를 최소화하면서 순도와 수율을 극대화 효율적 처리 및 자기 경사를 보장하기 위해 필요하다.
    1. 10 분 동안 초음파 세척기에서 0.040 g의 마그네타이트 겔의 분취 량과 플라스틱 비이커 및 초음파 처리에 PLGA 용액 40 ml를 추가하기.
    2. 플라스틱 비이커에 플루로 닉 용액 80 ml에 첨가하고 약 7 분은 수 중유 에멀젼으로서 마그네타이트 PLGA 나노 입자에 코팅을 형성하기 위해 즉시 높은 설정으로 실험실 혼합기 유화.
    3. 즉시 에틸 아세테이트를 증발시켜 화학 퓸 후드에서 1 시간 동안 탈 H 2 O 및 초음파 처리의 1 L에 SPION 용액을 희석.
    4. SPION 솔루션 옆에 강력한 자석을 놓고 부드럽게 자석에 갈색 SPIONs를 수집 저어.
      참고 :이 간헐적으로 몇 시간 동안 교반 할 필요가있다솔루션 전에 s는 SPIONs의 대부분은 수집 된 것을 나타내는 하얗게 변합니다.
    5. 자석 비이커 SPIONs을 유지하면서 수용액 따르다.
    6. 다음과 같이 SPIONs 세 번 씻으십시오.
      1. 탈 H 2 O 1 L에 SPIONs 일시 중단
      2. 20 분의 SPION 솔루션을 sonicate하세요.
      3. SPION 솔루션 옆에 강력한 자석을 놓고 부드럽게 자석에 갈색 SPIONs를 수집 저어. 이 용액 SPIONs 대부분 수집 된 것을 나타내는 명확한 꺼질 때까지 몇 시간 동안 간헐적으로 교반 할 필요가있다.
      4. 자석 비이커 SPIONs을 유지하면서 수용액 따르다.
  4. 수성 현탁액과 같은 단일 가중 된 유리 바이알에 여섯 마그네타이트 겔 분취 각각으로부터 합성 SPIONs 수집. 필요에 따라 선택적으로 자기 여분의 물을 가만히 따르다.

4. 동결SPIONs의 -drying

  1. SPION 솔루션을 동결.
  2. 동결 건조 동결 건조기에서 SPION 솔루션 O / N을.
  3. 동결 건조 SPIONs 무게. 셀 라벨에 사용 전까지 동결 건조 SPIONs은 -20 ℃에서 저장 될 수있다.
    참고 : -20 ° C 극적에 저장이 분해 반응 속도를 줄이고 수명을 증가시킨다.

SPIONs와 세포의 5 라벨링

  1. 40 mg / ml의 농도로 포스페이트 완충 식염수 (PBS)에 SPIONs의 분취 량을 중단하고 30 분 동안 초음파 처리.
  2. 세포 배양 배지의 5 μL / ㎖의 농도에서 세포의 거의 합류 플라스크 SPION 용액을 추가한다. 조심스럽게 플라스크를 흔들어 균일 한 분포를 확인합니다.
  3. 37 ° C에서 16 시간 동안 세포를 배양한다.
  4. 부드럽게 문화 매체를 대기음하고 PBS로 두 번 세포를 씻으십시오.
  5. 자기 표지 세포를 수집하고 실험을 위해 사용합니다.
  6. 미사용 SPION 용액을 4 ℃에서 저장 될 수 있고, 우리되어야몇 개월 이내에 에드. 각 사용하기 전에 30 분 동안 초음파 처리.

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Representative Results

마그네타이트 나노 입자는 50 ℃, 1000 rpm으로 (도 1) 및 철 (III) 클로라이드, 철 (II) 클로라이드 수화물 수용액을 교반 한 결과, 직경이 약 10 나노 미터이다. 이러한 결과는 마그네타이트 나노 입자가 성공적으로 합성을 보여준다. 이것은 처음으로 합성을 시도 할 때의 배치 작은 샘플로부터 취한 마그네타이트 나노 입자의 크기와 모양을 확인하는 것이 중요하다. 투과 전자 현미경 (TEM)이 입자를 시각화하는 바람직한 방법이다. 배치는 폐기되어야하고, 마그네타이트 나노 입자는 직경이 약 10 nm의하지 인 경우도 1에 나타낸 바와 같이 구면 합성을 다시 시도한다.

120 나노 미터 (도 2) 직경의 PLGA-마그네타이트 SPIONs에서 고속 유화제 결과를 사용하여 PLGA와 마그네타이트 나노 입자를 코팅. 이러한 결과는 성공적인 보여PLGA - 자철광 SPIONs의 합성. 이것은 처음으로 합성을 시도 할 때의 배치 작은 샘플로부터 취한 PLGA-마그네타이트 SPIONs의 크기 및 형상을 확인하는 것이 중요하다. 주사 전자 현미경 (SEM)이 입자를 시각화하는 바람직한 방법이다. 배치는 폐기되어야하고 PLGA-마그네타이트 SPIONs 120 직경 nm이고,도 2에 도시 된 바와 같이 더 크거나 더 작은 입자들은 특정 애플리케이션에 바람직 할 수있는 반면 구면., 조성이 알려지지 않은 것없는 정도 인 경우 합성이 다시 시도해야 따라서 라벨, 자화율을 세포 및 세포 독성을 예측할 수 없습니다.

나노 입자의 세포 내 이입 16 시간 결과 (그림 3)에 대한 SPIONs와 혈액 가지 내피 세포의 배양. 이러한 결과는 SPIONs와 세포의 성공적인 라벨을 보여줍니다. 그것은에서 가져온 세포 내에서 SPIONs의 존재를 확인하는 것이 중요합니다배치의 작은 샘플을 처음 시도 할 때 라벨. 투과 전자 현미경이 SPION 표지 세포를 시각화 선호하는 방법입니다. 세포는 폐기되어야하며, 라벨은 그림 3과 같이 PLGA-mangetite SPIONs는 세포질 엔도 좀 내에 모여 검은 입자 원형으로 표시되지 않는 경우 다시 시도해야합니다. 또한, SPIONs의 낮은 농도 타겟팅 자기 세포를 사용하지 못할 수 있으며, SPIONs의 높은 농도는 세포 독성이 될 수 있습니다. 필요한 경우, 라벨에 사용되는 세포 SPIONs의 농도를 적절하게 조정할 수있다.

세포로의 철 로딩 양은 강자성 이식 형 의료 장치 (도 4)에 생존 세포의 자기 캡처를 달성하기에 충분하다. 이러한 결과는 성공적 SPION 매개 자기 세포 타겟팅을 보여줍니다. 효과 세포 표적 강하게 원한다면, 바람직한 전략이다 increa생성 또는 적용 자기장 8,30의 강도 또는 그라데이션을 SE는. 라벨 세포에 사용 SPIONs의 농도를 증가하는 유일한 인한 세포 독성 문제로 최후의 수단으로 시도해야한다. 세포 생존율 향상이 요구되는 경우, 라벨에 사용되는 세포 SPIONs의 농도는 감소한다.

그림 1
투과 전자 현미경 (TEM)에 의해 본 마그네타이트 나노 입자도 1 TEM 화상. 자철광 나노 입자는 직경이 약 10 나노 미터이다. 입자의 크기는 구형과 균일. 스케일 바 = 100 nm의. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2 주사 전자 현미경 (SEM)에 의해 본 />도 2 PLGA-마그네타이트 SPIONs의 SEM 이미지. PLGA 피복 마그네타이트 SPIONs은 직경이 약 120 나노 미터이다. 입자의 크기는 구형과 균일. 스케일 바 = 500 μm의. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3
자기 적으로 표지 된 혈관 내피 세포도 3의 TEM 화상. 투과형 전자 현미경 (TEM)에 의해 자기 적으로 가시화 표지 된 혈액 가지 내피 세포. SPIONs 자연스럽게 세포에 의해 endocytosed 및 세포질 엔도 좀 내 작은 클러스터에 저장됩니다. 왼쪽 눈금 막대 = 2 μm의 오른쪽 눈금 막대 = 0.5 μm의. (24)로부터 허가를 다시 인쇄 할 수 있습니다./files/ftp_upload/53099/53099fig3large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4
자기 세포 캡처도 4 형광 현미경 이미지. 자기 적 표지 된 혈관 내피 세포는 비자 성 스텐트 (왼쪽)보다 상당히 높은 레이트에서 강자성 혈관 스텐트 (오른쪽)으로 끌린다. 스케일 바는 100 μm의 =. 다시 인쇄 (24)의 허가. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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Discussion

모든 나노 입자 합성 프로토콜로서, 화학 반응물의 순도는 최소한의 세포 독성 효과를 가질 것이다 고품질 SPIONs 달성을위한 중요하다. 이것은 올레산 (≥99 %), 철 (II) 클로라이드 수화물 (≥99.99 %), 철 (III) 클로라이드 (≥99.99 %), 에틸 아세테이트를 포함하여 매우 순수한 시약을 구입하는 것이 중요하다 (HPLC 등급, ≥99.9 % ), 헥산 (HPLC 등급, ≥97.0 %), 수산화 암모늄 (≥99.99 %) 및 ​​황산나트륨 (≥99.0 %). 그것은 상대적으로 비용이 많이들 수 있습니다 매우 순수하고 높은 품질의 PLGA를 구입 특히 중요하다. 또한, 모든 유리 제품은 완전히 염산, 탈 이온수, 및 에틸 알콜로 세척하고, 사용하기 전에 건조되도록해야한다.

마찬가지로, 프로토콜 내의 정화 및 세척 단계는 최종 SPIONs 높은 품질의 최소한의 세포 독성 영향을 미칠 것입니다 보장하기 위해 매우 중요합니다. 자철광 젤이 없어야합니다PLGA와 도포 전에 최대한 수산화 암모늄, 물 및 헥산. 따라서, 프로토콜의 대부분은 자철광 젤의 순도를 보장에 전념. 이어서, PLGA-마그네타이트 SPIONs 에틸 아세테이트, 플루로 닉, 과잉 PLGA 없어야한다. SPION 최종 세척 단계는 프로토콜의 일부를 소비하는 대부분의 시간이지만, 높은 순도를 보장하기 위해 완료되어야한다. 특히, 각각의 세척 단계 동안 입자의 자기 수집은 매우 시간이 소요될 수 있습니다. 용액을 교반 크게 입자 수집 속도를 증가시킬 수 있지만, 자기 교반 막대를 사용할 수 없습니다. 저속에서 동작 오버 헤드 교반기 급속한 입자 수집을 위해 가장 효과적인 방법이다. SPIONs의 큰 갈색 수집을 확인하면 자석에 표시하고, 용액을 경사 전에 흰색 또는 명확한 나타납니다. 이것은 종종 수 시간의 교반을 필요로 할 수 있지만, 더 높은 최종 수율을 초래할 것이다. 자기 경사 단계는 만 magn을 보장하는 역할을모든 비자 성 물질이 폐기되는 동​​안 etic 입자는 그대로 유지됩니다.

과도한 철 농도는 세포 독성이 될 수 있으므로,이 기술을 사용하여 셀을 부여 할 수있는 자성 물질의 양이 제한된다. 철의 농도는 특별히 민감한 세포 유형을 위해 특별히 감소 또는 약한 자기장에 대해 증가 될 필요가있을 수 있지만, 여기에 설명 된 프로토콜은 안전성과 효능을 입증 균형 출발점을 제공한다. 이 프로토콜에 의해 합성 SPIONs은 PLGA에 마그네타이트 질량 1:15 비율 용액으로부터 만들어지며 SPIONs 세포 배양액 200 μg의 / ml의 농도로 세포에 도입된다. 이러한 파라미터 중 하나는 필요에 따라 각 셀에 의해 endocytosed 철의 양을 변경하기 위해 조절 될 수있다.

SPIONs 인간 이식을위한 안전하고 시간 (약 40~50일의 반감기) 31 이상 생분해됩니다. 자철광과 PLGA 모두 무해한 degrad을 형성ATION 제품 및 천연 경로 (32)를 통해 몸에서 지워집니다. SPIONs의 생분해 성 특성은 세포 독성 효과가 시간이 감소 의미뿐만 아니라, 몇 개월을 넘어 자신의 자기 적 특성을 유지하기 위해 세포를 필요로하지 않는 사람들에 대한 잠재적 인 응용 프로그램을 제한합니다. SPIONs 또한 세포 표면 라벨링 및 단백질에 대한 필요없이 그들의 자기 효과를 부여도 33,34 생물학적 환경에 노출시 코로나 단백질의 형성을 일으키기 쉬운 리간드를 타겟팅하는 장점을 가지고있다.

세포에 자성을 부여하는 대상 세포 전달을 요구하거나 29 정렬 생물 의학 응용 프로그램의 광범위한 유용합니다. 다양한 종류의 세포 안전하게 중간 엽 줄기 세포 (35), 혈관 내피 전구 세포 (36), 섬의 베타 세포 (37) 및 신경줄 기세포 (38)를 포함 SPIONs을 세포 내 이입 할 수있는 능력을 보여 주었다. 자기 CELL 타겟팅은 배송 조건 고도의 제어가 필요할 때 기법 타겟팅 다른 세포보다 선호 될 수있다.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ammonium Hydroxide solution, 28% NH3 in H2O, ≥99.99% trace metal basis Sigma-Aldrich 338818-100ML  Harmful reagent - wear personal protective equipment
Dreschel bottle, 500 ml Ace Glass 5516-16
Ethyl Acetate, CHROMASOLVR Plus, for HPLC, 99.9%  Sigma-Aldrich 650528-1L Harmful reagent - wear personal protective equipment & work in fume hood
Ethyl alcohol Sigma-Aldrich E7023 Harmful reagent - wear personal protective equipment
Evaporating flask, 50 ml, 24/40 joint Sigma-Aldrich Z515558 For use with rotoevaporator
Filter paper, 3 cm dia, grade 1 Fisher 09-805P For use with glass filter funnel
Glass beakers, 1 L Fisher FB-101-1000 For washing SPIONs
Glass filter funnel, vacuum hose adapter, fits 24/40, 30 mL Fisher K954100-0344 
Glass vial caps Fisher 03-391-46 For use with glass vials
Glass vials, 2 ml Fisher 03-391-44 For collecting magnetite gel & SPIONs
Hexane, CHROMASOLVR, for HPLC, ≥97.0% (GC) Sigma-Aldrich 34859-1L  Harmful reagent - wear personal protective equipment & work in fume hood
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich H1758 Harmful reagent - wear personal protective equipment & work in fume hood
Iron(II) chloride tetrahydrate, ≥99.99% trace metals basis  Sigma-Aldrich 380024-5G Harmful reagent - wear personal protective equipment
Iron(III) chloride anhydrous, powder, ≥99.99% trace metals basis Sigma-Aldrich 451649-1G Harmful reagent - wear personal protective equipment
Isomantle heater, 500 mL Voight Global EM0500/CEX1
Laboratory mixer Silverson L5M-A
Lyophilizer Labconco 7670520
Microspatulas Fisher 21-401-25A For transfering magnetite gel
NdFeB magnet, 1 in x 1 in x 1 in Amazing Magnets C1000H-M Very strong magnet, handle with care
Oleic acid, ≥99% (GC) Sigma-Aldrich O1008-5G  Store in freezer; Harmful reagent - wear personal protective equipment
Overhead stirrer IKA 2572201
Overhead stirrer clamp IKA 2664000 For use with overhead stirrer
Overhead stirrer H-stand IKA 1412000 For use with overhead stirrer
Phosphate buffered saline Life Technologies 10010-023
Plastic beakers, 250 ml Fisher 02-591-28
PLGA PURASORB PDLG (75/25 blend) Purac PDLG 7502 PDLG 7502A may be used as well; Store in freezer
Pluronic F-127 powder, BioReagent, suitable for cell culture Sigma-Aldrich P2443-250G 
PTFE expandable blade paddle, 8 mm dia SciQuip SP4018
PTFE vessel adapter, fits 24/40, 8 mm dia paddle Monmouth Scientific PTFE Vessel Adaptor A480 For use with PTFE expandable blade paddle
Recirculating chiller Clarkson 696613 For use with rotoevaporator
Reflux condenser, fits 24/40, 250 mm Ace Glass 5997-133
Rotoevaporator Clarkson 216949
Rubber septa, fits 24/40 Ace Glass 9096-56
Separatory funnel with stopper, 250 ml Fisher 10-438E
Sodium sulfate ACS reagent, ≥99.0%, anhydrous, granular Sigma-Aldrich 239313-500G 
Three neck round bottom flask, angled, 24/40 joints, 500 ml Ace Glass 6948-16
Ultrasonic cleaner perforated pan Fisher 15-335-20A For use with ultrasonic cleaner
Ultrasonic cleaner, 2.8 L Fisher 15-335-20
Vacuum controller Clarkson 216639 For use with rotoevaporator (optional)
Vacuum pump Clarkson 219959 For use with rotoevaporator

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References

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  2. Nguyen, K. T. Mesenchymal Stem Cells as Targeted Cell Vehicles to Deliver Drug-loaded Nanoparticles for Cancer Therapy. J Nanomed Nanotechol. 4, (1), e128 (2013).
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