के प्रत्यक्ष कमानी इंट्रा यकृत प्रसव के एक चूहा जिगर hilar क्लैंप मॉडल का उपयोग करते हुए विधि

Medicine
 

Summary

एक अनूठा चूहा जिगर hilar क्लैंप मॉडल ischemia-reperfusion चोट सुधारने में pharmacologic अणुओं के प्रभाव के अध्ययन के लिए विकसित किया गया था। यह मॉडल प्रत्यक्ष यकृत प्रसव के लिए अनुमति देता है, पोर्टल शिरा की एक शाखा के माध्यम से इस्कीमिक जिगर खंड के लिए पोर्टल की आपूर्ति के प्रत्यक्ष केन्युलेशन भी शामिल है।

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Beal, E. W., Dumond, C., Kim, J. L., Mumtaz, K., Hayes Jr., D., Washburn, K., Whitson, B. A., Black, S. M. Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model. J. Vis. Exp. (122), e54729, doi:10.3791/54729 (2017).

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Abstract

प्रवाह रोड़ा, और यकृत प्रत्यारोपण के साथ मेजर यकृत सर्जरी, गर्म ischemia की अवधि, और ischemia / reperfusion (आई / आर) असंख्य नकारात्मक परिणामों के साथ चोट करने के लिए अग्रणी reperfusion की अवधि आवश्यकता होती है। यकृत प्रत्यारोपण के लिए किस्मत में सीमांत अंगों में संभावित मैं / आर चोट वर्तमान दाता कमी एक कम अंग उपयोग दर करने के लिए माध्यमिक योगदान देता है। एक महत्वपूर्ण जरूरत आदेश प्रत्यारोपण में भ्रष्टाचार समारोह पर इसके प्रभाव मध्यस्थता करने में यकृत मैं / आर चोट का पता लगाने के लिए मौजूद है। चूहा जिगर hilar क्लैंप मॉडल यकृत मैं / आर चोट पर विभिन्न अणुओं के प्रभाव की जांच करने के लिए किया जाता है। मॉडल के आधार पर, इन अणुओं परिधीय बेहतर mesenteric नस में साँस लेना, एपीड्यूरल अर्क, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन, नसों में प्रशासन या इंजेक्शन का उपयोग कर वितरित किया गया। एक चूहा जिगर hilar क्लैंप मॉडल मैं / आर चोट सुधारने में pharmacologic अणुओं के प्रभाव का अध्ययन करने में उपयोग के लिए विकसित किया गया है। describचूहा जिगर hilar क्लैंप के लिए एड मॉडल प्रत्यक्ष कमानी यकृत प्रसव के लिए अनुमति देता है, पोर्टल शिरा का एक पक्ष शाखा के माध्यम से इस्कीमिक यकृत खंड के लिए पोर्टल की आपूर्ति के प्रत्यक्ष केन्युलेशन भी शामिल है। हमारा दृष्टिकोण 60 मिनट, जो समय के दौरान अध्ययन के तहत पदार्थ संचार कर रहा है के लिए छोड़ दिया पार्श्व और मंझला पालियों में ischemia प्रेरित करने के लिए है। इस मामले में, पेगीलेटेड-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (पीईजी-एस ओ डी), एक मुक्त कणों मेहतर, सीधे इस्कीमिक खंड में संचार कर रहा है। प्रयोगों की इस श्रृंखला को दर्शाता है कि पेग-एस ओ डी के अर्क यकृत मैं / आर चोट के खिलाफ रक्षात्मक है। इस दृष्टिकोण के लाभ वितरण और प्रणालीगत दुष्प्रभाव में कमी की मात्रा में कमी के साथ फलस्वरूप इस्कीमिक खंड में अणु के प्रत्यक्ष इंजेक्शन शामिल हैं।

Introduction

प्रवाह रोड़ा, और यकृत प्रत्यारोपण के साथ मेजर यकृत सर्जरी, गर्म ischemia की अवधि, और ischemia / reperfusion (आई / आर) चोट 1 के लिए अग्रणी reperfusion की अवधि आवश्यकता होती है। जिगर में मैं / आर चोट के परिणामों बड़े पैमाने पर 1, 2, 3 विस्तृत किया गया है। मैं के परिणाम / आर चोट साहित्य में दिए गए विवरण में शामिल हैं: प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की पीढ़ी, न्यूट्रोफिल की सक्रियता, Kupffer कोशिकाओं, और अंतर्कलीय कोशिकाओं, टोल की तरह रिसेप्टर्स की हीम oxygenase प्रणाली के सक्रियण और सक्रियण, एक सहित भड़काऊ झरना की दीक्षा endothelin और नाइट्रिक ऑक्साइड, परमाणु कारक-κB की सक्रियता, और proinflammatory cytokine और आसंजन अणु संश्लेषण 1, 2, 3 को बढ़ावा देने के बीच असंतुलन। ये समर्थक भड़काऊ घटनाओं एल मईapoptosis, परिगलन, अंग में शिथिलता और अंतिम अंग विफलता से 3 ead।

मैं / जिगर प्रत्यारोपण के लिए किस्मत में अंगों में आर चोट जल्दी भ्रष्टाचार हानि हो और मौजूदा दाता कमी के लिए योगदान के रूप में सीमांत अंगों चोट 3 लिए अतिसंवेदनशील होते हैं कर सकते हैं। वर्तमान में 15,226 संयुक्त राज्य अमेरिका 4 में जिगर प्रत्यारोपण के लिए प्रतीक्षा सूची पर संभावित प्राप्तकर्ताओं और केवल 5,950 यकृत प्रत्यारोपण 2015 5 में प्रदर्शन किया गया हैं। अंग उपलब्धता में इस चरम सीमा के कारण, अनुसंधान की खोज यकृत मैं / आर चोट आदेश भ्रष्टाचार समारोह और अंग का सदुपयोग करने के लिए की जरूरत है।

पशु यकृत मैं / आर चोट अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया मॉडल चूहे hilar क्लैंप मॉडल और चूहा जिगर प्रत्यारोपण मॉडल शामिल हैं। वहाँ वर्तमान में उपयोग में चूहे hilar क्लैंप मॉडल की एक किस्म है। सबसे आम है, जिसमें से एक है पोर्टल शिरा, यकृत धमनी और पित्त डुसीटी की आपूर्ति बाईं पार्श्व और मंझला पालियों microsurgical क्लिप 6, 7, 8, 9, 10, 11, 60 मिनट से reperfusion की 30 से 60 मिनट के 6, 7, 10, 13, 14, और उसके बाद करने के लिए अवधि के लिए 12 का उपयोग कर क्लैम्प किया जाता है करने के लिए 24 घंटे 7, 9, 10, 13, 14 अनुमति दी है। चूहा जिगर के बाएँ पार्श्व और मंझला पालियों यकृत पैरेन्काइमा 9 का लगभग 70% शामिल हैं। इस्कीमिक शर्त अध्ययन करने के लिए तैयार किया गया है कुछ प्रोटोकॉल hilar वाहिकाओं के रुक-रुक कर clamping शामिलया हिंद-अंग ischemia की एक लंबी अवधि hilar वाहिकाओं 9, 13 क्लैम्पिंग द्वारा प्रेरित करने से पहले। वहाँ भी कई साहित्य में वर्णित संशोधनों कर रहे हैं। पहले क्लैंप को पोर्टल शिरा और यकृत धमनी छोड़ दिया पार्श्व और मंझला पालियों की आपूर्ति, लेकिन पित्त नली 15 को बाहर है। एक दूसरा संशोधन उनके विभाजन 16, 17, 18, 19, 20 से पहले पोर्टल शिरा, यकृत धमनी और पित्त नली क्लैम्पिंग द्वारा कुल यकृत ischemia प्रेरित करने के लिए है। एक तीसरा संशोधन 30 से 60 मिनट के लिए 8 दाएं पालि तक hilar वाहिकाओं के clamping भी शामिल है। एक अतिरिक्त संशोधन के क्रम में एक हिंद अंग में संवहनी बंडल क्लैम्पिंग जिगर 13, 21 में चोट प्रेरित करने के लिए शामिल है चित्रा 1 ए डी दर्शाए गए हैं।

चूहा जिगर hilar क्लैंप मॉडल यकृत मैं / आर पर विभिन्न अणुओं और यौगिकों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। मॉडल के आधार पर इस्तेमाल किया इन अणुओं परिधीय बेहतर mesenteric नस 8 में साँस लेना 11, एपीड्यूरल अर्क 12, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन 17, 18, 21, 22, नसों में प्रशासन 10, 14, 15, 19, 23, 24 या इंजेक्शन का उपयोग कर वितरित किया गया ।

चूहा जिगर hilar क्लैंप के लिए मॉडल इस रिपोर्ट में दिए गए विवरण समेतपोर्टल शिरा का एक पक्ष शाखा के माध्यम से इस्कीमिक खंड के लिए पोर्टल की आपूर्ति (चित्रा 2) है, जो अध्ययन के तहत औषधीय पदार्थ के प्रत्यक्ष कमानी यकृत प्रसव के लिए अनुमति देता है के प्रत्यक्ष केन्युलेशन es। हमारा दृष्टिकोण जो समय के दौरान अध्ययन के तहत पदार्थ के अर्क, इस मामले में, पेगीलेटेड-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस, एक मुक्त कणों मेहतर 25, इस्कीमिक सेगमेंट में सीधे संचार किया जाता है, 60 मिनट के लिए छोड़ दिया पार्श्व और मंझला पालियों में ischemia प्रेरित करने के लिए है । रक्त के नमूने ischemia के शामिल होने से पहले और 120 मिनट के बाद reperfusion में लिया जाता है। इस बिंदु पर, चूहे बलिदान है और नमूने छोड़ दिया और मंझला पालियों से लिया जाता है। साथ ही, नमूने एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में सेवा करने के लिए सही पालि से लिया जाता है।

इस दृष्टिकोण के लिए कई लाभ हैं। सबसे पहले, मात्रा ओ जब अध्ययन के तहत pharmacologic पदार्थ सीधे इस्कीमिक खंड में इंजेक्ट किया जा सकता हैच वितरण प्रणालीगत संचलन में इंजेक्शन के वितरण की मात्रा या पेरिटोनियल गुहा की तुलना में काफी कम है। साथ ही, इस दृष्टिकोण को कम कर देता है, हालांकि समाप्त नहीं करती है, प्रणालीगत दुष्प्रभाव की संभावना।

Protocol

सभी प्रक्रियाओं संस्थागत पशु की देखभाल और ह्यूमेन देखभाल और प्रयोगशाला पशु का प्रयोग करें (IACUC) के लिए राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद की गाइड के दिशा निर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया गया और ओहियो राज्य विश्वविद्यालय IACUC समिति द्वारा अनुमोदन आया है।

1. आरंभिक सेटअप

  1. सेट अप शल्य माइक्रोस्कोप और ऑपरेटिंग थिएटर (चित्रा 3, चित्रा 4)। संज्ञाहरण बनाए रखने और महत्वपूर्ण संकेत की निगरानी के लिए सहित कि सभी उपकरणों को चालू करें। Electrosurgical यूनिट और वार्मिंग पैड चालू करें। ऑपरेटिंग टेबल के पास आसव पंप स्थित करें।
    1. संज्ञाहरण सिरिंज में साँस लेना (आणविक भार 184.5) के लिए तरल isoflurane के 10 एमएल तैयार और संज्ञाहरण इकाई में रखें।
    2. सेट अप अपकेंद्रित्र जहां रक्त के नमूनों कार्रवाई की जाएगी पास ऑपरेटिंग टेबल के पास तरल नाइट्रोजन का एक 200 एमएल कंटेनर और एक अन्य।
    3. स्थितिशल्य चिकित्सा उपकरणों, 4-0 और 7-0 चोटी रेशम टांका, बाँझ कपास के फाहे, 4x4 गैर बुना स्पंज, 5 एमएल सीरिंज, और 27 ऑपरेटिंग टेबल के पास गेज इंसुलिन सीरिंज ition।
  2. isoflurane कक्ष तैयार करें और सुनिश्चित करें कि पर्याप्त isoflurane संज्ञाहरण प्रेरण वितरण प्रणाली में पैदा किया जाता है।

2. संज्ञाहरण की प्रेरण

  1. चूहा निम्नलिखित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पर डाल से निपटने से पहले: सर्जिकल मास्क, शल्य चिकित्सा दस्ताने, और डिस्पोजेबल गाउन।
  2. चूहे का वजन और वजन रिकॉर्ड है।
    ध्यान दें: Sprague Dawley चूहों इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
  3. संज्ञाहरण कक्ष में चूहे रखें और isoflurane और ऑक्सीजन को चालू करें। isoflurane कक्ष का उपयोग कर संज्ञाहरण प्रेरित।
  4. जानवर के पेट के बालों क्लिप एक बिजली के बाल क्लिपर का उपयोग कर क्लीनर जोखिम (चित्रा 5) के लिए अनुमति देने के लिए।
  5. एक additio के लिए isoflurane कक्ष में पशु वापस जगहएनएएल एक मिनट। संज्ञाहरण की गहराई सत्यापित करने के लिए एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन करते हैं।

3. प्रक्रिया

  1. नाक शंकु में जानवर की नाक और चार हाथ पैरों वार्मिंग पैड पर मजबूरी या टेप के साथ स्थिर साथ चूहे रखें।
  2. 200 और 250 ग्राम और 4% से अधिक 250 ग्राम वजन जानवरों के लिए के बीच वजन जानवरों के लिए 3.6% पर संज्ञाहरण वितरण प्रणाली, नाक शंकु और एनेस्थीसिया के साथ isoflurane का उपयोग संज्ञाहरण जारी रखें। एक पैर की अंगुली चुटकी और एक त्वचा चुटकी प्रदर्शन से संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
  3. त्वचा तेज कैंची (चित्रा 6) का उपयोग कर के माध्यम से जिफाएडा को जघनरोम से एक मध्य रेखा पेट चीरा बनाओ।
  4. जघनरोम से लिनिया अल्बा के साथ पेरिटोनियम में एक चीरा जिफाएडा और पेट लेने देखभाल मूत्राशय या आंत्र नुकसान न दर्ज करने के लिए सुनिश्चित करें। जिगर भी पूर्व से असिरूप प्रक्रिया के पास पेरिटोनियम से चिपक के रूप में, सुनिश्चित करें कि यह विज्ञप्ति इस ar में पेट की दीवार incising करने से पहलेईए।
  5. त्वचा के माध्यम से एक अनुप्रस्थ चीरा और जिगर की सही पालि के अवर सीमा के स्तर पर पेरिटोनियम करें।
  6. संज्ञाहरण 200 और 250 ग्राम और 2% से अधिक 250 ग्राम वजन जानवरों के लिए के बीच वजन जानवरों के लिए 1.6% करने के लिए कम करें।
  7. असिरूप प्रक्रिया एक घुमावदार मच्छर क्लैंप का उपयोग कर वापस लें।
  8. प्लेस रिब रिट्रैक्टर मध्य रेखा से पसलियों खींच के रूप में दूर संभव के रूप में (चित्रा 7)। दात्राकार, मध्यच्छद और गैस्ट्रिक स्नायुबंधन काटें। सिक्त बाँझ कपास के फाहे का उपयोग कर जिगर अप पलटें।
  9. पोर्ट तक पहुँचने में अतिरिक्त स्नायुबंधन कटौती के रूप में आवश्यक। खारा सिक्त जाली (चित्रा 7) के साथ आंत का रोटेशन निष्पादित करें।
  10. ढीला संयोजी ऊतक overlying पोर्टल नाभिका तेज या कुंद विच्छेदन का उपयोग कर निकालें। ढीला संयोजी ऊतक पोर्टल शिरा की लंबाई overlying निकालें।
  11. ढीले संयोजी टी के माध्यम से पुश करने के लिए संदंश का प्रयोग करेंबाईं पोर्टल शिरा, धमनी और पित्त एक खिड़की बनाने नली को मुद्दा पीछे और जगह 4-0 पॉट्स टांका लेकिन (चित्रा 8) नीचे चिंच नहीं है।
  12. ढीला संयोजी ऊतक पोर्टल शिरा कि लगभग दाएं गुर्दे की स्तर में आता है के पीछे शाखा overlying बंद साफ़ करें। यह नस केन्युलेशन के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।
  13. निचली वेना केवा (आईवीसी) एक इंसुलिन सिरिंज (चित्रा 9) के साथ से बाहर रक्त के 0.5 एमएल ड्रा। 12 मिनट के लिए 135 XG पर एक छोटी शीशी में खून की 0.5 एमएल रखें, अपकेंद्रित्र। सीरम बंद आकर्षित करने के लिए प्रयास करें।
    1. पर 135 x जी 3 मिनट - एक अलग लाइन लाल रक्त कोशिकाओं और सीरम के बीच की सराहना नहीं की जा सकती हैं, तो एक अतिरिक्त 2 के लिए अपकेंद्रित्र का प्रयास करें। alanine-एमिनोट्रांस्फरेज (एएलटी) के लिए एक शीशी में सीरम और जगह बंद ड्रा। स्नैप यह सीधे रखने तरल नाइट्रोजन में से यह नमूना फ्रीज।
  14. कि प्रवेशनी लिए इस्तेमाल किया जाएगा 7-0 टांके और नस के पास जगह के दो टुकड़े काटेंtion। इस नस के आसपास पहली 7-0 पाश जहाँ तक संभव के रूप में औसत दर्जे का रखें। इस पाश टाई और इसका इस्तेमाल एक घुमावदार मच्छर क्लैंप (चित्रा 10) का उपयोग कर वापस लेना। नस उस के साथ पोर्टल शिरा अपने चौराहे के पास केन्युलेशन लिए इस्तेमाल किया जाएगा और एक टाई जगह पर एक दूसरे 7-0 पाश जगह है, लेकिन नीचे चिंच नहीं है।
  15. अभिकर्मक के 3 एमएल के साथ एक 5 एमएल सिरिंज के साथ निषेचन पंप तैयार करें। प्रधानमंत्री ट्यूबिंग।
  16. क्लैंप बाहर का पोर्टल शिरा एक microsurgical क्लैंप का उपयोग कर।
    नोट: जब नस केन्युलेशन के लिए छिन्न है यह खून बह रहा है कम हो जाएगा।
  17. 7-0 ठहरने टांका और के साथ छोटे microsurgical कैंची का उपयोग कर पोर्टल शिरा अपने चौराहे के बीच में नस में एक 0.5 मिमी छेद काटें। बाईं पोर्टल शिरापरक प्रणाली (चित्रा 11, चित्रा 12) cannulate के 27-0 कैथेटर का प्रयोग करें। बाएँ और दाएँ पोर्टल नसों के विभाजन पिछले कैथेटर डालें।
  18. Infus द्वारा प्रवेशनी की नियुक्ति की जाँच करेंसामान्य नमक की 1 एमएल ing और Blanch को जिगर के बाएँ पार्श्व और मंझला पालियों के लिए देखते हैं। मैन्युअल रूप से पुष्टि करते हैं कि कैथेटर अतीत सही पोर्टल शिरा के टेक ऑफ है, लेकिन नहीं पोर्टल शिरा मंझला पालि खिला की टेक ऑफ से परे है।
  19. पॉट्स टांका नीचे चिंच और ischemia के समय शुरू करते हैं। नस के आसपास 7-0 टांके और 27-0 कैथेटर जगह में इसे पकड़ और से बाहर का पोर्टल शिरा क्लैंप दूर करने के लिए कस दें।
  20. polyethylene glycol-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (पीईजी-एस ओ डी, ०.०००६७ ग्राम / एमएल) जलसेक पंप का उपयोग कर के अर्क की शुरुआत करें। आसव यथासंभव निकट इस्कीमिक समय के शुरू होने से शुरू करो।

4. निगरानी

  1. आसव भर जानवर के महत्वपूर्ण संकेत नजर रखने के लिए जारी रखें। 0.9% सामान्य नमक की 2 एमएल या पेग-एस ओ डी के 2 एमएल (०.०००६७ ग्राम / एमएल) 15 मिनट की अवधि में 0.9% सामान्य खारा में भंग वितरित करें।

5. Reperfusion

  1. एक घंटे मैं की शुरुआत से पारित करने के लिए अनुमति देंschemic समय। यह गर्म ischemia समय से 1 घंटे है।
  2. पॉट्स टांका निकालें। 27-0 कैथेटर निकालें। नस के आसपास 7-0 टांका नीचे चिंच। नोट समय। यह reperfusion के समय चिह्नित करता है।

6. जारी सैम्पलिंग

  1. रक्त के 0.5 एमएल 120 मिनट के बाद reperfusion पर आईवीसी से बाहर ड्रा। रक्त ड्रा धीरे धीरे लाल रक्त कोशिकाओं lysing से बचने के लिए। धीरे-धीरे एक शीशी में रक्त ड्रिप। सुनिश्चित करें कि आईवीसी से खून बह रहा प्रत्येक रक्त की बराबरी के बाद नियंत्रित किया जाता है।
    1. अगर वहाँ खून बह रहा है जारी है एक बाँझ कपास पट्टी या द्वारा जाली से 1 सेमी अनुभाग में कटौती एक छोटा सा 1 सेमी के साथ कोमल दबाव लागू होते हैं।
  2. 12 मिनट के लिए 135 XG पर अपकेंद्रित्र। पर 135 x जी 3 मिनट - पर्याप्त जुदाई हासिल नहीं है, तो एक अतिरिक्त 2 का प्रयास करें।
  3. सीरम के आधे एएलटी के लिए बाद में प्रसंस्करण के लिए एक शीशी में रखें। स्नैप इन नमूनों फ्रीज।

7. इच्छामृत्यु

  1. जबकि चूहे संज्ञाहरण के तहत अब भी है कटौती आईवीसी और रोंuperior वेना कावा (SVC) और रक्त प्रवाह, श्वसन और हृदय की धड़कन संघर्ष जब तक निगरानी।
  2. डायाफ्राम काटकर अलग कर देना और एक सर्कल में डायाफ्राम incising और अतिरिक्त संयोजी ऊतक कि पेरिटोनियल गुहा को जिगर जोड़ने रहता incising द्वारा एक संक्षिप्त hepatectomy प्रदर्शन करते हैं। पेरिटोनियल गुहा से जिगर निकालें।
  3. जिगर का सही पालि से जिगर के बाईं और मंझला पालियों से चार नमूने और चार नमूने लेने। नमूने संभव के रूप में के रूप में बड़े होना चाहिए और उनके आकार ही उपलब्ध जिगर ऊतक की राशि से सीमित हो जाएगा। इन छोटे, लेबल शीशियों में रखें, और तरल नाइट्रोजन में फ्रीज स्नैप करें। ऊतक एडेनोसाइन ट्रायफ़ोस्फेट (ADP), malondialdehyde (एमडीए) और ग्लूटेथिओन (GSH) के लिए बाद में प्रसंस्करण के लिए इन्हें उपयोग करें।

8. के ​​बाद प्रयोग विश्लेषण

  1. ग्लूटेथिओन (GSH), malondialdehyde (एमडीए) और alanine एमिनोट्रांस्फरेज (एएलटी) जिगर ऊतक में गतिविधियों और सीरम नमूनों का निर्धारण नैदानिक ​​किट का उपयोग करनिर्माता के निर्देशों के अनुसार।
  2. lysis बफर के साथ जिगर ऊतक Homogenize और एक ब्रैडफोर्ड परख का उपयोग कर यों। विश्लेषण सोडियम dodecyl सल्फेट-पॉलीएक्रिलमाइड जेल वैद्युतकणसंचलन और immunoblot cleaved capase -3 और actin के विरुद्ध रोग का उपयोग करके ऊतक lysate। सार्वजनिक रूप से उपलब्ध सॉफ्टवेयर के साथ प्रदर्शन पश्चिमी दाग ​​यों।

Representative Results

इस प्रयोग n के 2 समूहों = 3 चूहों से प्रत्येक के साथ किया गया था। तीन चूहा जिगर 15 मिनट की अवधि में आसव पंप के साथ सामान्य नमक की 2 एमएल (एन एस) का इंजेक्शन दिया गया था। तीन चूहा जिगर सामान्य नमक की 2 एमएल (एन एस) 15 मिनट की अवधि में आसव पंप के साथ पेगीलेटेड-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (पीईजी-एस ओ डी, ०.०००६७ ग्राम / एमएल) के साथ मिश्रित का इंजेक्शन दिया गया था। ऊपर प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में, रक्त के नमूनों पूर्व hilar क्लैंप और 120 मिनट के बाद reperfusion पर ले जाया गया। इसके अतिरिक्त, के बाद reperfusion चार जिगर ऊतक के नमूने के 120 मिनट के पूरा होने को छोड़ दिया और मंझला पालियों और चार जिगर नमूने से लिया गया चूहा जिगर की सही पालि से ले जाया गया।

सीरम alanine aminotransferase (एएलटी) पूर्व hilar क्लैंप और (एन एस) नियंत्रण में 120 मिनट के बाद reperfusion और प्रयोगात्मक (पीईजी-एस ओ डी) जानवरों पर मापा गया। वहाँ नियंत्रण के एएलटी स्तर बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था (एन एस)जानवरों पूर्व hilar क्लैंप और 120 मिनट के बाद reperfusion पर। वहाँ नियंत्रण के एएलटी स्तर (एन एस) और प्रयोगात्मक जानवरों (पीईजी-एस ओ डी) 120 मिनट (चित्रा 13A) में बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था। ऊतक malonaldehyde (एमडीए) नियंत्रण (एन एस) और प्रयोगात्मक (पीईजी-एस ओ डी) जिगर के दोनों दाएं और बाएं पालियों में जानवरों के लिए मापा गया था। नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) और प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) के साथ सही पालि (गैर hilar क्लैंप) में ऊतक एमडीए कोई महत्वपूर्ण अंतर का प्रदर्शन। नियंत्रण इंजेक्शन के साथ छोड़ दिया लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) ऊतक एमडीए (एन एस) की तुलना में सही पालि (गैर hilar क्लैंप) पी <0.001 काफी अलग है। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) बनाम प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) पी <0.005 (चित्रा 13B) के साथ ऊतक एमडीए की काफी अलग स्तर है। ऊतक ग्लूटेथिओन (GSH) मापा गया था और साथ नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) एक सही पालि (गैर hilar क्लैंप) में ऊतक ग्लूटेथिओनnd प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) कोई महत्वपूर्ण अंतर का प्रदर्शन। नियंत्रण इंजेक्शन के साथ छोड़ दिया लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) ऊतक GSH (एन एस) काफी के साथ नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) पी <0.05 सही पालि (गैर hilar क्लैंप) से अलग है। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) पी <0.005 (चित्रा 13C) बनाम साथ ऊतक ग्लूटेथिओन की काफी अलग स्तर है। पश्चिमी धब्बा नियंत्रण जानवरों के दाएं और बाएं पालि की तुलना प्रदर्शन किया गया था और यह दर्शाता है वृद्धि हुई कस्पासे -3 hilar क्लैंप और reperfusion (चित्रा 13D) के बाद बाईं पालि में cleaved। एक दूसरा वेस्टर्न ब्लॉट नियंत्रण के साथ और पेग-एस ओ डी (चित्रा 13E) के साथ इलाज जानवरों के बाईं पालियों की तुलना प्रदर्शन किया था। यह पेग-एस ओ डी के साथ इलाज जानवरों के जिगर ऊतक में cleaved कस्पासे -3 की कमी हुई दर्शाता। डेन्सिटोमीटरी भी प्रदर्शन है प्रदर्शन किया गया थाटिंग कि cleaved कस्पासे -3 जिगर ऊतक में के स्तर में काफी नियंत्रण जानवरों (चित्रा 13F) की सही पालि बनाम छोड़ दिया में वृद्धि हुई है। प्रयोगात्मक जानवरों के बाईं पालि जिगर ऊतक, पेग-एस ओ डी के साथ संचारित, और नियंत्रण जानवरों के बाईं पालि जिगर ऊतक, सामान्य नमकीन के साथ संचारित की तुलना में, डेन्सिटोमीटरी काफी cleaved कस्पासे -3 पेग-एस ओ डी के साथ इलाज किया पशुओं में तुलना में जानवरों तक की कमी दर्शाता है नियंत्रण (चित्रा 13G) के साथ इलाज।

आकृति 1
चित्र 1: शारीरिक रेखांकन। चूहा जिगर के शारीरिक चित्रण। चूहा जिगर की बी शारीरिक चित्रण। जिगर के बाईं और मंझला पालियों को पोर्टल डंठल जोड़ा जाता है। छोड़ दिया और मंझला पालियों इस्कीमिक हैं। सी शारीरिकचूहा जिगर के चित्रण। बाईं पालि के लिए पोर्टल डंठल जोड़ा जाता है। बाईं पालि इस्कीमिक है। चूहा जिगर की डी शारीरिक चित्रण। दाएं पालि तक पोर्टल डंठल साथ जोड़ा जाता है और सही पालि इस्कीमिक है।

चित्र 2
चित्र 2: शारीरिक रेखांकन। पोर्टल के साथ चूहा जिगर की शारीरिक चित्रण नस एक पक्ष शाखा के माध्यम से cannulated। जिगर के बाईं और मंझला पालियों को पोर्टल डंठल एक टांका से घिरा हुआ है और एक microvessel क्लैंप संवहनी बंडल के आसपास मजबूत करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। छोड़ दिया और मंझला पालियों इस्कीमिक हैं।

चित्र तीन
चित्र 3: साधन सेट-अप। यह आंकड़ा दर्शाता वें ई साधन सेट अप।

चित्रा 4
चित्र 4: ऑपरेटिंग कमरे का सेट-अप। यह आंकड़ा ऑपरेटिंग कमरे सेट-अप को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्र 5: पेट के बालों के ट्रिमिंग। यह आंकड़ा पेट के बालों के ट्रिमिंग को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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चित्र 6: स्थिरीकरण और त्वचा चीरा। यह आंकड़ा चूहा और त्वचा चीरा के स्थिरीकरण को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7
चित्र 7: रिब Retractor प्लेसमेंट और अंतड़ी निकालना। यह आंकड़ा रिब प्रत्यागामी स्थान और अंतड़ी निकालना को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

आंकड़ा 8
चित्र 8: प्लेस सिवनी की ment। यह आंकड़ा टांका की नियुक्ति को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 9
चित्र 9: निम्न वेना कावा से रक्त ड्रा। यह आंकड़ा निम्न वेना कावा से खून ड्रॉ को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 10
चित्रा 10: नस शाखा बंद बंधी और वापस लिया। शाखा को बांध कर मुकर नस यह आंकड़ा दर्शाता है। ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig10large.jpg "target =" _ blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 11
चित्रा 11: नलिका की प्रक्रिया। यह आंकड़ा केन्युलेशन की प्रक्रिया को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 12
चित्रा 12: नलिका। यह आंकड़ा केन्युलेशन को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

सामग्री "के लिए: रखने together.within-पन्ने की =" 1 "> चित्रा 13
चित्रा 13: प्रतिनिधि परिणाम: पेगीलेटेड-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस के प्रत्यक्ष कमानी Intrahepatic प्रसव के एक चूहा hilar क्लैंप मॉडल का उपयोग करना। एन एस सामान्य खारा =। पेग-एस ओ डी = पेगीलेटेड-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस, alt = alanine एमिनोट्रांस्फरेज, एमडीए = malondialdehyde। सीरम alanine aminotransferase (ALT, म्यू / एमएल) पूर्व hilar क्लैंप और 120 मिनट के बाद reperfusion के बीच तुलना में। वहाँ नियंत्रण (एन एस) पूर्व hilar क्लैंप और नियंत्रण 120 मिनट के बाद reperfusion पर (एन एस) (पी <0.001) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर है। वहाँ भी 120 मिनट के बाद reperfusion (पी <0.05) पर नियंत्रण (एन एस) और प्रयोगात्मक समूहों (पीईजी-एस ओ डी) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर है। एक छात्र की टी परीक्षण इस्तेमाल किया गया था। त्रुटि बार मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं। साथ नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) एक सही पालि (गैर hilar क्लैंप) में बी ऊतक malondialdehydeघ प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) कोई महत्वपूर्ण अंतर का प्रदर्शन। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) के साथ ऊतक malondialdehyde सही पालि (गैर hilar क्लैंप) पी <0.001 से काफी अलग है। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) बनाम प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) पी <0.005 के साथ ऊतक malonaldehyde की काफी अलग स्तर है। एक छात्र की टी परीक्षण इस्तेमाल किया गया था। त्रुटि बार मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं। नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) और प्रयोगात्मक इंजेक्शन (पीईजी-एस ओ डी) के साथ सी सही पालि (गैर hilar क्लैंप) में ऊतक ग्लूटेथिओन कोई महत्वपूर्ण अंतर का प्रदर्शन। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) के साथ ऊतक ग्लूटेथिओन काफी के साथ नियंत्रण इंजेक्शन (एन एस) पी <0.05 सही पालि (गैर hilar क्लैंप) से अलग है। वाम लोब (बाद hilar क्लैंप और reperfusion) नियंत्रण injectio साथ ऊतक ग्लूटेथिओन की काफी अलग स्तर हैn (एन एस) प्रयोगात्मक इंजेक्शन बनाम (पीईजी-एस ओ डी) पी <0.005। एक छात्र की टी परीक्षण इस्तेमाल किया गया था। त्रुटि बार मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं। डी पश्चिमी धब्बा नियंत्रण जानवरों के बाईं पालि (के बाद hilar क्लैंप और reperfusion) बनाम सही पालि (गैर hilar क्लैंप) (सामान्य नमकीन) के जिगर ऊतक में cleaved कस्पासे -3 वृद्धि हुई का प्रदर्शन है। पश्चिमी धब्बा प्रदर्शन नियंत्रण (सामान्य नमकीन) के साथ इलाज जानवरों की तुलना में पेग-एस ओ डी के साथ इलाज जानवरों के जिगर ऊतक में cleaved कस्पासे -3 की कमी हुई। Cleaved कस्पासे -3 जिगर ऊतक में की एफ स्तर काफी बाद hilar क्लैंप और reperfusion जानवरों (पी <0.05) में वृद्धि हुई है। एक छात्र की टी परीक्षण इस्तेमाल किया गया था। त्रुटि बार मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं। जी बाईं पालि जिगर प्रयोगात्मक जानवरों के ऊतकों (पीईजी-एस ओ डी के साथ संचारित) और नियंत्रण जानवरों के लिए छोड़ दिया पालि जिगर ऊतक (सामान्य नमकीन के साथ संचारित) की तुलना में, वहाँ काफी cleaved कस्पासे -3 एक में कमी आई हैनियंत्रण (सामान्य नमकीन) के साथ इलाज जानवरों की तुलना में पेग-एस ओ डी के साथ इलाज किया imals। एक छात्र की टी परीक्षण इस्तेमाल किया गया था। त्रुटि बार मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते हैं।

Discussion

प्रयोगों की इस श्रृंखला प्रदर्शन किया है कि बाईं में पेग-एस ओ डी और मंझला पालियों एएलटी की रिहाई में महत्वपूर्ण कम हो जाती है के लिए नेतृत्व किया, कोशिका झिल्ली के लिपिड peroxidation (एमडीए), और (GSH) ग्लूटेथिओन के रखरखाव के इंजेक्शन जब नियंत्रण के साथ तुलना में (सामान्य नमकीन )। Alanine aminotransferase (एएलटी) सहित जिगर ऊतक ट्रांसएमिनेस हेपैटोसेलुलर चोट के मार्करों स्थापित कर रहे हैं। एएलटी में कमी जब छोड़ दिया पालि पेग-एस ओ डी के साथ इंजेक्ट किया जाता है पेग-एस ओ डी के एक सुरक्षात्मक प्रभाव पता चलता है। बढ़ी हुई ऊतक एमडीए लिपिड peroxidation वृद्धि हुई इंगित करता है और oxidative तनाव और ऊतक चोट की एक मार्कर माना जाता है। प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के अधिक एमडीए 26 के उत्पादन में वृद्धि होती है। जानवर की बाईं और मंझला पालियों में ऊतक एमडीए में काफी कमी जब पेग-एस ओ डी इंजेक्शन पेग-एस ओ डी के एक सुरक्षात्मक प्रभाव को दर्शाता है। यह वर्तमान समझ है कि पेग-एस ओ नुकसान से कोशिकाओं की रक्षा के साथ संगत हैआंशिक रूप से कम प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों 27 की वजह से। साथ ही, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की उपस्थिति में, ग्लूटेथिओन डाइसल्फ़ाइड ग्लूटेथिओन (GSH) 28 के लिए कम है। जिगर आगे पेग-एस ओ डी इंजेक्शन के बाईं और मंझला पालियों में GSH में रखरखाव पेग-एस ओ डी के सुरक्षात्मक प्रभाव पुष्ट। इसके अतिरिक्त यह दिखा दिया है कि वहाँ cleaved कस्पासे -3, apoptosis के एक उत्पाद की वृद्धि हुई है ischemia-reperfusion चोट के संपर्क में ऊतकों में,। बाईं पालि जब पेग-एस ओ डी के साथ इलाज में cleaved कस्पासे -3 में कमी पता चलता है कि पेग-एस ओ डी apoptosis में कमी हो जाती है।

सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (एस ओ डी) प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की विषहीन में एक महत्वपूर्ण एंजाइम है। एंजाइम हाइड्रोजन पेरोक्साइड और पानी में दो सुपरऑक्साइड anions का रूपांतरण catalyzes। एंजाइम केटालेज़ तो, पानी और ऑक्सीजन को हाइड्रोजन पेरोक्साइड धर्मान्तरित प्रक्रिया 25 को पूरा करने। का आधा जीवनदेशी एसओडी संयुग्मित polyethylene glycol-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस (पीईजी-एस ओ डी) के विकास जब तक प्रयोगात्मक मॉडल में इसके उपयोग सीमित कर दिया। polyethylene glycol के लिए एस ओ डी के संयुग्मन 14 घंटे के लिए 6 मिनट से इसका अर्द्ध जीवन काल बढ़ जाती है। गुयेन एट अल। एक चूहे मॉडल में यकृत ischemia में लिपिड peroxidation कम करने के लिए अपनी क्षमता का प्रदर्शन किया, प्रणालीगत वितरण 29 का उपयोग कर।

वहाँ तकनीक यहाँ विस्तृत और कुछ पहले से साहित्य में वर्णित किया गया है के संभावित संशोधनों की एक किस्म है। अणुओं मॉडल का इस्तेमाल किया पर निर्भर करता है साँस लेना 11, एपीड्यूरल अर्क 12, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन 17, 18, 21, 22, नसों में प्रशासन 10, 14, 15 का उपयोग कर वितरित किया गया 19, 23, 24 या इंजेक्शन परिधीय बेहतर mesenteric नस 8 में।

इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम हैं। सबसे महत्वपूर्ण पोर्टल शिरा के cannulation है। ध्यान रखा जाना चाहिए कि छेद नस में कटौती बहुत बड़ी नहीं है। ऊतक बहुत लोचदार है और छेद अपने आप ही विस्तार होगा। हम एक छेद microsurgical कैंची के साथ 0.5 मिमी है कि कटौती करके शुरुआत करें। प्रवेशनी एक साधन है, जो हाथ से प्रक्रिया के इस हिस्से को प्रदर्शन करने के लिए कोशिश कर रहा से अगर अधिक से अधिक चपलता के लिए अनुमति देता है का उपयोग करते हुए छेद के माध्यम से खिलाया जा सकता है। इसके अतिरिक्त, जबकि शुरू में प्रवेशनी खिला, यह सीधे छोड़ दिया और सही पोर्टल नसों के विभाजन की ओर नस के पीछे की दीवार के माध्यम से एक छेद poking से बचने के लिए उद्देश्य से किया जाना चाहिए। प्रवेशनी टिप विभाजन तक पहुँच जाता है, यह तो विशिष्ट बाईं नस में खिलाया जा सकता हैसहयोगी। एक बार जब प्रवेशनी बाईं पोर्टल शिरा, जो दोनों को छोड़ दिया और मंझला पालियों की आपूर्ति में खिलाया जाता है, अपनी स्थिति को नस के अंदर यह महसूस करके स्वयं भी पुष्टि की जा सकती। इसकी स्थिति भी ठंड खारा की एक छोटी राशि इंजेक्शन लगाने और जिगर की आपूर्ति क्षेत्रों पर blanching प्रभाव को देखने के द्वारा पुष्टि की जा सकती है।

चूहे में जिगर hilar क्लैंप मॉडल यकृत इस्कीमिक-reperfusion चोट प्रदर्शन करने के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और स्थिर मंच प्रदान करता है। चर hilar क्लैंप मॉडल शोधकर्ताओं द्वारा इस्तेमाल किया गया है विरोधी oxidants और अन्य छोटे अणुओं 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 के सुरक्षात्मक प्रभाव का अध्ययन करने के। भिन्नता के अंक में शामिल हैं जो जहाजों क्लैंप हैं एड, जो खंड इस्कीमिक बना रहे हैं या नहीं, पित्त नली शामिल किया गया है और reperfusion 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 की अवधि की लंबाई, 19, 20, 21। इसके अतिरिक्त, जब इस मॉडल एक अणु प्रशासन का मार्ग के प्रशासन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है यह भी विषम है 8, 10, 11,"> 12, 14, 15, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24। वहाँ वर्णित दृष्टिकोण के लिए कई फायदे हैं। सबसे पहले, इस्कीमिक खंड के लिए पोर्टल की आपूर्ति के प्रत्यक्ष केन्युलेशन के प्रत्यक्ष कमानी यकृत प्रसव के लिए अनुमति देता है अध्ययन के तहत औषधीय पदार्थ। यह एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में जिगर के अन्य खण्डों के उपयोग की अनुमति देता है। दूसरा, कमानी यकृत केन्युलेशन अणु के लिए वितरण की एक कम मात्रा अध्ययन किया जा रहा के लिए अनुमति देता है। यह दृष्टिकोण जिससे प्रणालीगत दुष्प्रभाव के खतरे को कम पदार्थ हित के जिगर सेगमेंट में सीधे इंजेक्ट किया जाता है। यकृत खंड के प्रत्यक्ष केन्युलेशन वितरित किए जाने वाले पूर्व ischemia पदार्थ के लिए अनुमति देता है, इंट्रा-ischemia या बाद ischemia। यह ischemia-reperfusion चोट चक्र में किसी भी बिंदु पर अणु के प्रभाव के अध्ययन के लिए अनुमति देता है। इस्कीमिक समय की वृद्धि की लंबाई और जिगर उत्थान अध्ययन करने के लिए उपलब्ध होगा चोट अतिरिक्त अवसर के बढ़े हुए स्तर के साथ।

वहाँ भी इस दृष्टिकोण का कुछ सीमाएं हैं। पहले शुरू हुआ लागत है। एक शल्य माइक्रोस्कोप की खरीद एक प्रयोगशाला है कि पहले से ही एक अधिकारी नहीं है के लिए एक महत्वपूर्ण स्टार्ट-अप लागत हो सकता है। इस तकनीक को मुश्किल या असंभव एक खुर्दबीन के बिना हो सकता है। दूसरी अवस्था समय सीख रहा है। हालांकि इस प्रक्रिया अपेक्षाकृत सरल है, यह कुछ अभ्यास की आवश्यकता होती है और यह संभावना है कि एक नौसिखिया प्रक्रियाओं की एक महत्वपूर्ण संख्या की आवश्यकता होती है एक विशेषज्ञ बनने के लिए होगा।

संक्षेप में, इस मॉडल यकृत ischemia-reperfusion चोट अध्ययन करने के लिए एक, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य सरल है, और लागत प्रभावी मंच के लिए अनुमति देता है। हालांकि प्रोटोकॉल में यहाँ polyethylene जीएल वर्णितycol-सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस, एक मुक्त कणों मेहतर 25, संचार किया गया था, इस मॉडल आदेश जिगर में मैं / आर चोट पर उनके प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए अलग अलग pharmacologic पदार्थों की एक किस्म डालने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता।

Disclosures

सभी लेखक रिपोर्ट की तो उन्हें कोई खुलासे की है।

Acknowledgments

हम अपने काम के लिए उदाहरण डेनिस मैथियास स्वीकार करने के लिए करना चाहते हैं। इस काम एनआईएच T32AI 106704-01A1 और ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी में अंग प्रत्यारोपण, छिड़काव, इंजीनियरिंग और उत्थान के लिए टी फ़्लेश कोष द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sprague-Dawley Rat  Harlan Sprague Dawley Inc.  200- 250 grams 
Surgical Microscope  Leica  M500-N w/ OHS
Charcoal Canisters Kent Scientific SOMNO-2001-8
Isoflurane Molecular Weight 184.5  Piramal Healthcare
Pressure-Lok Precision Analytical Syringe   Valco Instruments Co, Inc.  SOMNO-10ML
Electrosurgical Unit Macan  MV-7A
Warming Pad Braintree Scientific  HHP2
SomnoSuite Small Animal Anesthesia System Kent Scientific  SS-MVG-Module
PhysioSuite Kent Scientific  PS-MSTAT-RT
Isoflurane chamber  Kent Scientific SOMNO-0530LG
SurgiVet Isotec CDS 9000 Tabletop
Oxygen  Praxair 98015
27-0 Micro-Cannula Braintree Scientific  MC-28
Rib retractors  Kent Scientific  INS600240
Polyethylene Glycol - Superoxide Dismutase (PEG-SOD) Sigma Aldrich  S9549 SIGMA
GenieTouch Kent Scientific
Normal Saline Baxter NDC 0338-0048-04
4 x 4 Non-Woven Sponges  Criterion 104-2411
Sterile Q-Tips Henry Schein Animal Health 1009175
U-100 27 Gauge Insulin Syringe Terumo 22-272328
5 mL Syringe BD  REF 309603
4-0 Braided Silk Suture Deknatel, Inc. 198737LP
7-0 Braided Silk Suture Teleflex Medical  REF 103-S
1.8 mL Arcticle Cryogenic Tube USA Scientific  1418-7410
Microsurgical Instruments
Name Company  Catalog Number Comments
Small Scissors  Roboz  RS-5610
Large Scissors S&T  SAA-15
Forceps - Large Angled S&T  JFCL-7
Forceps - Small Angled  S&T FRAS-15 RM-8
Clip Applier ROBOZ RS-5440
Scissors - non micro FST 14958-11 14958-11
Forceps - Straight Tip  S&T  FRS-15 RM8TC
Large Microsurgical Clip Fine Scientific Tools 18055-01
Small Microsurgical Clip Fine Scientific Tools 18055-01
Small Microsurgical Clip Fine Scientific Tools 18055-02
Small Microsurgical Clip Fine Scientific Tools 18055-03
Other Instruments
Name Company  Catalog Number Comments
Small Mosquito Clamps Generic 
Analysis 
Name Company  Catalog Number Comments
Alannine aminotransferase (ALT) assay  Biovision K752-100
Malondialdehye (MDA) assay  Abcam  ab118970
Glutathione (GSH) assay Cayman Chemical 7030002
Antibodies - Cleaved Caspase-3 and Actin  Cell Signaling Tecnology Antibody 9661
ImageJ Software  National Institutes of Health 
RIPA Lysis and Extraction Buffer  Millipore 10-188

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References

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