Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży

Published 11/09/2006
1 Comment
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Szybkie techniki wizualizacji coraz unieruchomionych komórek drożdży, tutaj stosowane do świetlówek dziennikarzom w cichej krycia loci HML i HMR

Cite this Article

Copy Citation

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Prezentujemy proste, szybkie i bardzo elastyczne technikę do immobilizacji i wizualizacji rosnących komórek drożdży epifluorescencją mikroskopii. Technika jest odpowiedni zarówno do wizualizacji statycznych populacji drożdży i eksperymentów kursy czas do dziesięciu godzin w długości. My mikroskopii bada Dziedziczenie epigenetyczne w cichej loci krycia w S. cerevisiae Istnieją dwa ciche loci krycia, HML i HMR, które nie są normalnie wyrażane są one pakowane w heterochromatyny. W sir1 wyciszanie mutant tle jest osłabiony tak, że każdy locus może być w wyraźnych lub wyciszony stan epigenetyczne, więc w całej populacji jest połączenie komórki z różnych państw epigenetyczne dla HML i HMR. My mikroskopia wykazała, że ​​nie ma żadnego związku między epigenetyczne stan HML i HMR w poszczególnych komórek. sir1 komórek stochastycznie przełącznik epigenetyczne państwa, ustanawiający wyciszania na wcześniej wyrażone locus lub wyrażając wcześniej wyciszony locus. My mikroskopii oczywiście czas śledzone poszczególnych sir1 komórek i ich potomstwa na zdobycie częstotliwości każdego z czterech możliwych przełączników epigenetyczne, a tym samym stabilność każdego z państw epigenetyczne w sir1 komórek. Zobacz także Xu et al. Mol. Piosenki 2006 roku.

Protocol

  1. Unieruchomionych komórek oczywiście mikroskopii czas epifluorescencją. Należy pamiętać, że protokół ten jest przydatna tylko gdy obiektywy swojego mikroskopu są pod sceną mikroskopem.

  2. Komórek miejsce pożądanego stężenia w płynie mediów na długo szkiełko (ok. 24x50mm)

  3. Cut bloku agar o pożądanej wielkości z syntetycznych płyta media (te mają niższe autofluorescencję) i umieścić w komórkach. Miejsce z boku bloku agar nie obsługiwane przez pincety w kontakcie z komórkami.

  4. W przypadku krótszych okresów czasu (do 3 godzin), takie ustawienie jest wystarczające. Jeżeli komórki są w ruchu, gdy wyświetlone na mikroskopem, zmniejszenie objętości komórek lub obszaru wzrost bloku agar.

  5. W przypadku dłuższych okresów czasu, miejsce spadek świeżych ciekłych na szczycie bloku agar, i umieścić szkiełka w górnej części bloku agar. Ten slajd zmniejsza parowanie przez szczyt bloku agar. W razie potrzeby, krawędzie bloku agar w kontakcie z poślizgu okładka może być zamknięte z wazeliną w celu dalszego zmniejszenia wilgoci. Używałem tego zestawu do filmów do 9 godzin, z dzielących się komórek w dzikie stawki typu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Jest to szybka technika, która unieruchamia komórek drożdży, umożliwiając jednocześnie wzrostu. Śledzimy rozwój drożdży do dziesięciu godzin, z drożdży wyświetlania dzikich stóp podział typu w trakcie eksperymentu. Zauważ, że ta instalacja wymaga obiektywu być pod sceną mikroskopem.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Chcielibyśmy podziękować Pete Houston i Eugenia Xu za pomoc.

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats