Automatic Translation

This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Biology

الأسلوب MODS لتشخيص السل والسل المقاوم للأدوية المتعددة

1, 2, 3, 4

1The Warren Alpert Medical School of Brown University, 2Laboratorio de Investigacion de Enfermedades Infecciosas, Universidad Peruana Cayetano Heredia, 3Department of International Health, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, 4Wellcome Trust Centre for Clinical Tropical Medicine, Imperial College London

Article
    Downloads Comments Metrics Publish with JoVE

    You must be subscribed to JoVE to access this content.

    Enter your email to receive a free trial:

    Welcome!

    Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!


    Admit it, you like to watch.

     

    Summary

    الملاحظة المجهرية للأدوية الحساسية (MODS) مقايسة هي منخفضة التكلفة ومنخفضة التكنولوجيا أداة عالية الأداء لاكتشاف الدرن (السل) والسل المقاوم للأدوية المتعددة (MDRTB). هذا الفيديو يصف MODS ثقافة الإعلام أسلوب السائل.

    Date Published: 8/11/2008, Issue 18; doi: 10.3791/845

    Cite this Article

    Brady, M. F., Coronel, J., Gilman, R. H., Moore, D. A. The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. J. Vis. Exp. (18), e845, doi:10.3791/845 (2008).

    Abstract

    المرضى المصابين بالسل الرئوي النشط (السل) 10-15 تصيب غيرهم من الأشخاص سنويا ، مما يجعل من الضروري تشخيص السل النشط على كل من علاج المريض ومنع حدوث إصابات جديدة. وعلاوة على ذلك ، وظهور السل المقاوم للأدوية المتعددة (MDRTB) يعني أن الكشف عن مقاومة الجراثيم للأدوية هو ضروري لوقف انتشار سلالات مقاومة للعقاقير. الملاحظة المجهرية للأدوية الحساسية (MODS) مقايسة هي منخفضة التكلفة ومنخفضة التكنولوجيا أداة عالية الأداء للكشف عن السل وMDRTB. يستند مقايسة MODS على ثلاثة مبادئ هي : 1) المتفطرة السل (MTB) ينمو أسرع من السائل في وسائل الإعلام على وسائل الاعلام الصلبة 2) يمكن الكشف المجهري MTB النمو في وقت سابق في وسائل الإعلام السائلة من الانتظار لظهور المستعمرات العيانية على وسائل الاعلام الصلبة ، و ان النمو هو سمة من MTB ، مما يسمح تمييزه عن تلوث متفطرات شاذة أو فطرية أو جرثومية 3) يمكن إدراج الأدوية الإيزونيازيد والريفامبيسين في مقايسة MODS للسماح للكشف عن المباشرة في وقت واحد MDRTB ، تنتفي الحاجة إلى ثقافة فرعية لتنفيذ المخدرات غير مباشرة الى قابلية الاختبار. وأعاق التشخيص الحالية التي تتنافس مع انخفاض الحساسية مسحة البلغم ، والتأخير الطويل حتى مع التشخيص الثقافة وسائل الاعلام الصلبة ، والتكلفة الباهظة مع السائل الموجود أساليب الثقافة وسائل الإعلام ، والحاجة إلى قيام ثقافة فرعية لاختبار حساسية العقاقير غير المباشرة للكشف عن MDRTB. في المقابل ، فإن الأسلوب MODS غير مملوكة لديه حساسية عالية لمكافحة السل وMDRTB ، هو وسيلة الثقافة سريع نسبيا ، ويوفر في نفس الوقت اختبار الحساسية للدواء لMDRTB ، ويمكن الوصول إلى البيئات محدودة الموارد بمبلغ يقل قليلا عن 3 لاختبار لمكافحة السل و MDRTB.

    Protocol

    1. إعداد الحلول الأسهم
      1. الفوسفات عازلة الأسهم
        1. مزيج ثنائي القاعدة 950ml من محلول الصوديوم (9.47g من ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوم الذائب في الماء المقطر 1000ml) مع 950ml من البوتاسيوم أحادي القاعدة الفوسفات الحل (9.07g من البوتاسيوم أحادي القاعدة الفوسفات المذاب في الماء المقطر 1000ml) ويحرك ؛ إبقاء الظهر 50ml كل حل لضبط الحموضة إذا لزم الأمر
        2. ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 6.8 ± 0.2 : إضافة حل ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوم لرفع درجة الحموضة ، إضافة البوتاسيوم حل الفوسفات أحادي القاعدة إلى انخفاض الرقم الهيدروجيني
        3. الأوتوكلاف على 121-124 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة للتعقيم
        4. صحن قسامة 100μl من الفوسفات عازلة على حل وسط آغار المغذيات في طبق بتري واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة للتأكد من العقم
        5. تخزينها في الثلاجة على 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد

          ملاحظة : كل عينة البلغم 10ML يتطلب حل العازلة الفوسفات
      2. تطهير الأسهم
        1. تجمع كميات متساوية من محلول هيدروكسيد الصوديوم (8.0g من هيدروكسيد الصوديوم الذائب في الماء المقطر 200ml العقيمة) وسترات الصوديوم (5.8g من سيترات الصوديوم في الماء المقطر 200ml مقطر معقم)
        2. ومزيج الأوتوكلاف في 121-124 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة
        3. تخزينها في الثلاجة على 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد

          ملاحظة : كل عينة بلغم من 2ml يتطلب تطهير الأسهم
      3. ثقافة الإعلام الأسهم
        1. في 900ml من الماء المقطر المعقم إضافة 3.1ml من الجلسرين و1.25g من casitone و5.9g من مسحوق المتوسطة 7H9 ؛ الاختلاط مع التحريض المستمر حتى تتفكك
        2. الأوتوكلاف على 121-124 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة
        3. بارد وتقسيم المتوسطة العقيمة في aliquots 4.5ml العقيمة في 16X 100 ملم أنابيب زجاجية لتحضير العينة ، وaliquots 10.8ml لإعداد الحلول والضوابط الداخلية للمضادات الحيوية
        4. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة للتحقق من العقم (عدم وجود عكارة)
        5. في مخزن 2-8 درجة مئوية مع غطاء مغلق بإحكام لمدة تصل إلى شهر واحد

          ملاحظة : كل عينة البلغم يتطلب أنبوب واحد تحتوي على 4.5ml المتوسطة 7H9
      4. الأسهم حلول المضادات الحيوية
        1. أيزونيازيد ألف سهم (8 ملغ / مل)
          1. حل 20 ملغ الإيزونيازيد تماما في الماء المقطر المعقم 2.5ml
          2. فلتر مع فلتر حقنة 0.2μm عن المذيبات المائية
          3. متجر في aliquots 20μl العقيمة في أنابيب الطرد المركزي في الدقيقة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر

            ملاحظة : كل قسامة 20μl تخزين ما يكفي لمدة تصل إلى 100 ​​عينة (بما في ذلك الهدر)
        2. باء ريفامبيسين الأسهم (8 ملغ / مل)
        1. تذوب تماما في ريفامبيسين 20mg DMSO 1.25ml
        2. إضافة الماء المقطر 1.25ml معقمة ومزيج
        3. فلتر مع فلتر حقنة 0.2μm عن المذيبات العضوية
        4. متجر في aliquots 20μl في أنابيب معقمة في microcentrifuge -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر

          ملاحظة : كل قسامة 20μl تخزين ما يكفي لمدة تصل إلى 100 ​​عينة (بما في ذلك الهدر)
    2. إعداد الحلول العمل
      1. حل التطهير العمل
        1. حل 0.1g من بلورات NALC في كل 20ml من محلول تطهير المطلوبة

          ملاحظة : تحتاج كل عينة من محلول تطهير 2ml

          ملاحظة : تخلصي من أي حل التطهير هيدروكسيد الصوديوم ، التي لا تزال غير مستخدمة NALC بعد 24 ساعة كما NALC يفقد نشاطه حال للمخاط مع مرور الوقت
      2. ثقافة الإعلام الحل العمل
        1. المبينة :
          1. بحيث تتم معالجتها مع أنبوب 1 7H9 المتوسطة لكل عينة البلغم ، زائد 1 أنبوب إضافية عن كل لوحة (للعمود التحكم السلبي)
          2. 2 أنابيب متوسطة 7H9 لعناصر إيجابية (3 في حال استخدام سلالات monoresistant)
          3. 1-2 أنابيب مع 7H9 10.8ml لإعداد حل للمضادات الحيوية
        2. إضافة إلى OADC 0.5ml 4.5ml من 7H9 في كل أنبوب العينة
        3. إضافة إلى أنابيب OADC 1.2ml مع 7H9 10.8ml
        4. 2 أنابيب جانبا مع 5ml OADC - 7H9 لعناصر إيجابية ، وأنبوب (s) مع 12ml 7H9 - OADC لاستخدامها في إعداد حل المضادات الحيوية (وهذه لا تتطلب بانتا)
        5. بانتا إعادة وإضافة إلى كل 0.1ml أنبوب العينة وللأنابيب السيطرة السلبية (7H9 - OADC - بانتا : الحجم الكلي = 5.1ml)

          ملاحظة : يستخدم المتوسطة كاملة مع بانتا (7H9 - OADC - بانتا) لعينات من البلغم والضوابط السلبية ، واستخدام 7H9 - OADC دون بانتا لعناصر إيجابية وإعداد حل للمضادات الحيوية
      3. المضادات الحيوية تعمل حلول
        1. 1. انظر الشكل رقم 1 لمعرفة الخطوات اللازمة لجعل حل المضادات الحيوية التي تعمل في لوحة 24 غير مستخدمة بشكل جيد

          ملاحظة : للحصول على نتائج دقيقة الحساسية ، وتركيزات المضادات الحيوية النهائية هي الحاسمة. الإجراء التالي هو مناسبة للترaboratories مجهزة micropipettes. إذا لم تتوفر micropipettes ، يمكن استخدام الحقن توبركولين مع سلسلة مختلفة من التخفيفات هو موضح في دليل المستخدم في الملحق 3 modsperu.org

          ملاحظة : لا إعادة تجميدها أو إعادة استخدام المضادات الحيوية تعمل أو الحلول الأسهم قد تكون فقدت نشاط المخدرات تجاهل كل الحلول غير المستخدمة للمضادات الحيوية في نهاية اليوم لتجهيز الشكل 1. المضادات الحيوية مما يجعل الحلول العمل (من دليل المستخدم على modsperu.org)
    3. عينة البلغم وإعداد لوحة
      1. إزالة التلوث
        1. 2ml مكان عينة بلغم في أنبوب الطرد المركزي 15ml (إذا كان أقل من ذلك ، ما يصل إلى 2ml مع العازلة الفوسفات ، وإذا كان أكثر من ذلك ، استخدام 2ml فقط)
        2. إضافة هيدروكسيد الصوديوم ، 2ml NALC الحل
        3. أنبوب الغطاء بإحكام ودوامة لمدة 20 ثانية ؛ عكس أنبوب لتأمين الاتصالات محلول NaOH - NALC كامل السطح الداخلي للأنبوب وغطاء
        4. اسمحوا الوقوف لمدة لا تقل عن 15 دقيقة -- يمكن أن تطيل من قبل بضع دقائق إذا كانت العينة لزجة جدا. لتجنب الإفراط العلاج ، يجب ألا تتجاوز 20 دقيقة
        5. ملء أنبوب ل14ml مع العازلة الفوسفات (درجة الحموضة 6.8) لتحييد القلوية وإنهاء عملية التطهير ، ومزيج جيد من قبل على عكس أنبوب 4 مرات
        6. ز الطرد المركزي في 3000 لمدة 15 دقيقة (انظر الملحق 2 في دليل المستخدم على modsperu.org لمعادلة التناوب في الدقيقة اللازمة للوصول إلى 3000 غرام)
        7. صب بعناية قبالة طاف في حاوية النفايات السائلة مع هيبوكلوريت الصوديوم 10 ٪ أو مطهر مناسبة أخرى والاحتفاظ بها بيليه
      2. إعداد تعليق العينة النهائية والنسخ الاحتياطي
        1. باستخدام 7H9 - OADC - بانتا (من أنبوب يحتوي على 5.1ml) ، وبيليه resuspend العينة في الحجم الكلي لل2ml في أنبوب الطرد المركزي مع ماصة باستير ؛ مزيج جيد
        2. 1ml إزالة التعليق العينة وتخزينها في أنبوب في microcentrifuge 2-8 درجة مئوية على سبيل الاحتياط
        3. إضافة 1ml الثانية من تعليق العينة إلى أنبوب مع ما تبقى من 7H9 - OADC - بانتا ؛ المزيج جيدا. هذا هو الحل العينة النهائية جاهزة للتصفيح
      3. وضع الايقاف في 24 عينة جيدة لوحة
        1. 900μl مكان لتعليق العينة النهائية في كل من آبار 4 من عمود في 24 لوحة جيدا
        2. كرر مع عينات إضافية حتى كافة الأعمدة من لوحة ، ما عدا العمود 3 ، تمتلئ (أو حتى يتم مطلي جميع العينات)
        3. 900μl مكان 7H9 - OADC وسيط وبدون عينة في الآبار 4 من العمود 3 من كل لوحة عينة (الضوابط الداخلية السلبية)
      4. إضافة المضادات الحيوية لعينات
        1. باستخدام ماصة متعدد القنوات ، وملء بعناية مع 4 نصائح 100μl من الآبار مع 7H9 - OADC المضادات الحيوية وحلول العمل (العمود 2 في التخفيف المضادات الحيوية لوحة ، انظر الشكل 1)
        2. إضافة إلى aliquots 100μl آبار 1 عمود مع حلول عينة 900μl دون لمس لوحة أو العينة
        3. كرر كافة الأعمدة حتى حصلوا على 100μl إضافية من المتوسط ​​(خالية من المخدرات الآبار) أو حلول المضادات الحيوية (بما في ذلك السيطرة السلبية العمود 3)
        4. إغلاق اللوحة مع غطاء لها وضعها في كيس قابل للغلق (Ziplock) البوليثين وختم (لا يتم فتح الكيس مرة أخرى من هذه النقطة فصاعدا)
        5. احتضان عند 37 درجة مئوية (CO 2 تخصيب اليورانيوم ليست ضرورية)
    4. ضبط الجودة
      1. يتم تشغيل ضوابط السلبية على كل صفيحة ، وجود أي نمو في أي من الآبار في العمود السيطرة السلبية يشير عبر التلوث ، ولذلك يجب التخلص منها لوحة كاملة وعينات إعادة مطلي.
      2. يتم تشغيل الضوابط الإيجابية على لوحة منفصلة في نهاية اليوم. تشغيل واحد تماما من المخدرات عرضة السلالة في عمود ومقاومة لسلالة INH وRIF تشغيل في عمود آخر. إذا كان هناك قلق حول تشغيل عبئا المقاوم ، سواء عبئا INH monoresistant ويمكن تشغيل سلالة RIF monoresistant في مكان عرضة للسلالات والمقاوم. ينبغي لجميع الضوابط الإيجابية والنمو في الآبار خالية من المخدرات لإثبات أن وسائل الإعلام دعم النمو. لإثبات أن تركيزات المخدرات صحيحة ، يجب أن سلالة معرضة لا تنمو في INH RIF أو الآبار ، ولكن الضغوط MDR يجب أن ينمو أيضا تنمو في INH والآبار RIF.
    5. لوحة القراءة
      1. مع اليوم من الطلاء "يوما 0 ،" قراءة لوحة تبدأ يوم 5 ، وإذا كان سلبيا في يوم 5 تتم قراءة كل يوم (أو أيام بديلة اعتمادا على عبء العمل) وحتى 14 يوما وبعد ذلك كل 2-3 أيام من يوم 15 -21. ويتم فحص لوحات علىضوء المجهر المقلوب مع الهدف 10X
      2. ثقافة إيجابية هي واحدة التي توجد فيها وحدات مستعمرة اثنين أو أكثر من تشكيل (> 2 CFU) في الآبار خالية من المخدرات على حد سواء. النمو المبكر بالمتفطرات يشبه الفواصل الصغيرة المنحنية أو اللوالب (أيام 5-9). تشكيل مستعمرة تقدم عادة الى "الحبال" أو "التشابك" (انظر الصورة على مكتبة modsperu.org)
      3. في اليوم ثقافة إيجابية في الآبار خالية من المخدرات 2 ، وينبغي أن يقرأ من الآبار التي تحتوي على المخدرات. أي نمو في وجود المخدرات يشير إلى أن مقاومة المخدرات.

        ملاحظة : يعتبر أحيانا إذا تم القراءة من الآبار التي تحتوي على المخدرات> 1 بعد اسبوع ويلاحظ ثقافة إيجابية في الآبار خالية من المخدرات ، وهذا قد لا يمثل المقاومة وكسر من خلال النمو
      4. تعتبر العينات التي ليست ايجابية بحلول يوم 21 الثقافات السلبية
      5. الغيوم من الآبار هو نتيجة لفرط التلوث ، في حين أن النمو بالمتفطرات لا ينتج الغيوم
      6. قد على الانتهاء من 21 يوما يتم تجاهل الثقافات. ثقافات البقاء في حقائبهم مختومة وتوضع في أكياس تعقيم وتعقيمها عند درجة 121-124 عن 45-60 دقيقة

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Discussion

    واستهدفت مقايسة MODS في الأماكن المحدودة الموارد. للمرة الأولى ، MODS يجلب القدرة على الكشف السريع ثقافة السائل من السل ، والسل المقاوم للأدوية المتعددة في الأماكن المحدودة الموارد بمبلغ يقل قليلا عن 3 في الاختبار. MODS هي غير مملوكة ، تكرارية المنهجية ، وتهتم دائما المجتمع MODS في مختبرات أخرى التحسينات التي تمكنت من القيام بها.

    والقلق هو المتكررة للسلامة الأحيائية لثقافة الإعلام السائل من السل لأنه لا يمكن تسرب سوائل أو رذاذ. نحن نؤمن بأن مقايسة MODS أكثر من أي biosafe مقايسة التي تنطوي على حساسية المخدرات غير المباشرة غير المباشرة لاختبار اختبار الحساسية المخدرات ينطوي على تلاعب من الحلول عالية التركيز من متفطرات مع المخاطر المصاحبة لانسكاب وهباء ، وفي المقابل ، ينطوي MODS ببساطة تلقيح عينة البلغم في لوحة ، وبعد ذلك يتم إغلاق لوحة داخل كيس من البلاستيك وعدم فتحها مرة أخرى. ويؤيد ذلك البيانات من كوريا (كيم 2007) التي أظهرت أن المخاطر المهنية للعاملين في المختبرات الذين مطلي من عينات البلغم دون أن تفعل المخدرات قابلية الاختبار كان أكبر من ذلك في أي العمال الذين يؤدون البلغم المجهري اللطاخة ، في المقابل ، أولئك الذين يقومون المخدرات وكان اختبار قابلية المخاطر المهنية أعلى من ذلك بكثير لمكافحة السل.

    ونحن نوصي بشدة أن تجري أيا من هذه الاجراءات بدون الاحتياطات المناسبة للعاملين في المختبر. وهذا يشمل N - 95 أقنعة لحماية الجهاز التنفسي الشخصية ، والفئة 2 لمجلس الوزراء مع السلامة البيولوجية الجوية استنفدت تصفيتها من خلال مرشحات HEPA ، وقفل على الباب مختبر لوقف الاضطرابات في تدفق الهواء في حين يجري التلاعب العينات.

    إجراءات التشغيل القياسية لتجهيز العينات خارج الرئة ، ومكتبة صور tubercuclosis المتفطرة وغيرها من التلوث والمتفطرات البكتيرية والفطرية ، وضمان الجودة الاستراتيجية الموصى بها ، وإجراء لاعتماد المختبرات لبدء استخدام MODS ، ورقة التعليمات متوفرة في modsperu.org

    Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

    Disclosures

    Acknowledgements

    نود أن نعترف شون فيتزواتر وكارمن جيانينا كولومبو لونا للجزء النمو السل الفيديو مرور الزمن. نشكر مارتي روبر للتغذية الراجعة لها شاملة وممتازة خلال التحرير وشارك في التأليف دليل المستخدم ، الذي اتخذ من البروتوكول الحالي حرفية في الغالب. وقد تم تمويل إنتاج هذا الفيديو من قبل المعاهد الوطنية للصحة / فوغارتي المركز الدولي http://www.fic.nih.gov/ ساهم ديفيد مور AJ كزميل يلكوم ترست البحوث السريرية في طب المناطق الحارة ، وقارئ في الأمراض المعدية في امبريال كوليدج في لندن (زمالة عدد الجائزة 078067/Z/05). ساهم علامة F. برادي وزميل المعهد الوطني للصحة الدولية / مركز بحوث فوغارتي.

    Materials

    Name Type Company Catalog Number Comments
    Refrigerator/ freezer Equipment to store pre-prepared broth and antibiotic stocks
    Vortex Equipment to aid sputum decontamination
    Centrifuge Equipment for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; d–s not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed)
    Incubator (37 degree C) Equipment for culture; need not be CO2 enriched
    Inverted light microscope Microscope to read MODS plates
    Autoclave Equipment to sterilize media, PBS and used plates
    Balance Equipment to weigh isoniazid, rifampicin and NALC
    Middlebrook 7H9 broth (Difco) Reagent Fisher Scientific DF0713-17-9 500gr/bottle; culture media base
    Casitone (pancreatic digest casein) Reagent Fisher Scientific DF0259‐17‐9 500gr/bottle; culture media base
    Glycerol (glycerin) lyophilized Reagent Sigma-Aldrich G‐33‐500 500ml/bottle; culture media base
    PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) Reagent Fisher Scientific B4345114 6 bottles/pack; antibiotic media supplement
    OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) Reagent Fisher Scientific B11886 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement
    Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) Reagent Sigma-Aldrich D-2650 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock
    Antibiotic stocks: isoniazid Reagent Sigma-Aldrich I-3377 50gr/bottle; direct susceptibility testing
    Antibiotic stocks: rifampicin Reagent Sigma-Aldrich R-3501 1gr/bottle; direct susceptibility testing
    Sodium hydroxide (pellets) Reagent Sigma-Aldrich 221465 500gr/bottle; sputum decontamination
    Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) Reagent Sigma-Aldrich S-4641 500gr/bottle; sputum decontamination
    N-acetyl-L-cysteine Reagent Sigma-Aldrich A-7250 50gr/bottle; sputum decontamination
    Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 Reagent Sigma-Aldrich P0662 500gr/bottle; sputum decontamination
    Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 Reagent Sigma-Aldrich S0876 500gr/bottle; sputum decontamination
    Sodium hypochlorite Reagent household bleach to discard contaminated waste
    15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) Consumable Fisher Scientific 14‐959‐49B 500ea/case; for sputum decontamination and concentration
    24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) Consumable Fisher Scientific 08-772-1 50 plates/case; for culture and reading
    Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) Consumable for biosecurity to contain 24 well plate
    Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) Consumable VWR international 47729-583 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth
    Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) Consumable Fisher Scientific 05‐669‐22 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks
    0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue Consumable Fisher Scientific SLGL 025 OS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
    0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow Consumable Fisher Scientific SLGV 033 RS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
    Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ Consumable Fisher Scientific 13‐678‐20C 720ea/case; to mix PANTA with media mix
    Aerosol barrier tips 1000‐1300μl Consumable Fisher Scientific 02‐707‐51 1000ea/pk; to dispense media into plate
    USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips Consumable Fisher Scientific 1111‐0006 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks

    References

    1. Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
    2. Caviedes, L. Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru. J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).
    3. Caviedes, L., Moore, D. A. Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).
    4. Caws, M. Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis. PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).
    5. Ejigu, G. S. Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB. Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).
    6. Kim, S. J. Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea. Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).
    7. Mello, F. C. Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin. J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).
    8. Moore, D. A. Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis. Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).
    9. Moore, D. A. Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting. Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).
    10. Moore, D. A. Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).
    11. Moore, D. A. Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings. J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).
    12. Moore, D. A., Roper, M. H. Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS. Lancet. 370, 1033-1033 (2007).
    13. Oberhelman, R. A. Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method. Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).
    14. Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. MODS assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).
    15. Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).
    16. Shiferaw, G. Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).
    17. Tovar, M. Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique. Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).
    18. Vargas, D. Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru. Lancet. 365, 150-150 (2005).

    Comments

    4 Comments

    I think it is an interesting video about the rapid diagnosis of tuberculosis by MODS assay but I also think this assay might be improve if the casein is replaced by simple amino acids in order to generate a chemically culture medium.
    Reply

    Posted by: AnonymousJanuary 10, 2009, 11:21 AM

    nice work.  how dŒs this compare to the MABA method?  what is the false positive and false negative rates with samples from adult humans?
    Reply

    Posted by: AnonymousMarch 9, 2009, 9:47 AM

    very good site for TB, but method lacks the video of reading a plate on inverted microscope.
    Reply

    Posted by: AnonymousMarch 31, 2009, 3:38 PM

    Excelente trabajo, el MODS es una tecnica infalible, considero que existe buena concordancia con las pruebas confirmatorias de sensibilidad a drogas como metodo proporciones, APP, TEMA, MABA e incluso Fagotipificacion.
    Reply

    Posted by: cesar augusto r.November 3, 2009, 11:17 PM

    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Metrics

    Waiting
    simple hit counter