Snap-תג קליפ תג תיוג מערכות חלבון לאפשר את הקובץ המצורף ספציפי, קוולנטי של מולקולות, כולל צבעי ניאון, לחלבון עניין בתאים חיים. משובטים לאחר והביע, החלבון מתויג ניתן להשתמש עם מגוון מצעים עבור יישומים רבים במורד הזרם מבלי שיבוט שוב.
Snap-תג קליפ תג תיוג מערכות חלבון לאפשר את הקובץ המצורף ספציפי, קוולנטי של מולקולות, כולל צבעי ניאון, לחלבון עניין בתאים חיים. מערכות אלו מציעות מבחר רחב של מצעים פלורסנט אופטימיזציה עבור מגוון רחב של מכשור הדמיה. משובטים לאחר והביע, החלבון מתויג ניתן להשתמש עם מגוון מצעים עבור יישומים רבים במורד הזרם מבלי שיבוט שוב. ישנם שני צעדים באמצעות מערכת זו: שיבוט וביטוי של החלבון של עניין כמו היתוך SNAP-תג, וסימון של התמזגות עם המצע SNAP-התג של בחירה. הצמד תג הוא חלבון קטן מבוסס על אדם O<sup> 6</sup>-Alkylguanine-DNA-alkyltransferase (hAGT), חלבון תיקון דנ"א. Snap-תג ותוויות צבעים מצומדות כדי גואנין או קבוצות עוזב chloropyrimidine באמצעות מקשר בנזיל. בתגובה תיוג, הקבוצה בנזיל להחליף המצע מחוברת קוולנטית לתייג-SNAP. קליפ תג הוא גירסה שונה של תג-SNAP, מהונדסים להגיב benzylcytosine ולא נגזרים benzylguanine. הפועל בשיתוף עם תג-SNAP, CLIP-תג מאפשרת תיוג אורתוגונליים ומשלימים בו זמנית של שני חלבונים בתאים זהים.
ישנם מספר משתנים המשפיעים על התוצאות שנצפו כגון אינטנסיביות, לייזר מיקוד, יכולות הציוד, עדשות השתמשו וכו 'photostability של fluorophore קובע כמה מהר את הקרינה חייב להיות בשבי לפני דהייה.
שיטה זו של תיוג חלבון צדדי מתאים ליישומים רבים. Snap-תג קליפ תג טכנולוגיות תיוג הספציפי של חלבונים היתוך עם בדיקות סינתטי לאפשר היבטים שונים של תפקוד החלבון, כולל מגוון רחב של תהליכים דינמיים בתאים חיים וב lysates התא. Snap-, קליפ, MCP ו-ACP-תג טכנולוגיות לספק צדדיות פשטות יוצאת דופן הדמיה של חלבונים בתאים חיים קבוע ללימוד חלבונים במבחנה. יצירת לבנות גן יחיד התשואות חלבון היתוך מתויג מסוגל להרכיב הצמדה קוולנטי למגוון של קבוצות פונקציונליות, כולל fluorophores, ביוטין, או חרוזים. החלבון של עניין יש משובטים והביע רק פעם אחת ולאחר מכן את היתוך ניתן להשתמש עם מגוון מצעים ניאון עבור יישומים במורד רבים כגון תיוג חלבון בו זמנית בתוך תאים חיים, לוקליזציה של חלבונים טרנסלוקציה, הדופק לרדוף ניסויים, הפנמה מחקרים קולטן , תא סלקטיבית משטח תיוג, חלבון לנתץ מבחני, גילוי חלבון SDS-PAGE, cytometry זרימה, תפוקה גבוהה מבחני מחייב צלחות microtiter, ניסויים אינטראקציה biosensor, ו סריג מבוססי מבחני מחייב.
The authors have nothing to disclose.
קאי Johnsson
איוון קוראה
אנדריאס ברכט
קתרין Müentener
כריס נורן
לואו יום ראשון
שו מינג
תיאודור דייויס
סלווטורה Russello
Aihua ג'אנג
האינקה גוש
אליסה Maunus
ניקולס Labarthe
ג'יימס מקפרלנד
ג'ון באזוול
ברנדה דזמונד
ג'יימס Ellard
דון מסרק
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
CHO-K1 Cells | ATCC | CCL-61 | ||
Serum free F-12K | ||||
Lab-Tek II Chambered Coverglass with #1.5 borosilicate coverglass chambers | Nalgene Nunc Int. | 155409 | Lot: 100808-8-0 | |
DMEM | ||||
Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate (10 mg/ml solution in water, 16.2 mM solution) | Invitrogen Molecular Probes | H3570 | 470519 | |
Zeiss Apotome Axiovert 200M fluorescent microscope | Zeiss | |||
Transpass V | New England Biolabs | M2561S | 0030709 | |
Transpass D2 | New England Biolabs | M2554S | 0060802 | |
SNAP-Cell TMR Star | New England Biolabs | S9105S | 0010811 | |
pSNAP-ADBR2 Control Plasmid | New England Biolabs | N9178S | 0010811 | |
pSNAP-H2B Control Plasmid | New England Biolabs | N9179S | 0010811 |