SNAP – 태그와 클립 태그 단백질 라벨링 시스템은 라이브 세포에 대한 관심의 단백질, 형광 염료를 포함하여 분자의 특정 공유 결합 첨부 파일을 활성화합니다. 일단 복제된과 표현, 태그 단백질 다시 복제하지 않고도 수많은 스트림 애플 리케이션을위한 기판의 다양한 사용할 수 있습니다.
SNAP – 태그와 클립 태그 단백질 라벨링 시스템은 라이브 세포에 대한 관심의 단백질, 형광 염료를 포함하여 분자의 특정 공유 결합 첨부 파일을 활성화합니다. 이러한 시스템은 이미징 장비의 범위에 최적화된 형광 기판의 넓은 선택을 제공합니다. 일단 복제된과 표현, 태그 단백질 다시 복제하지 않고도 수많은 스트림 애플 리케이션을위한 기판의 다양한 사용할 수 있습니다. 이 시스템을 사용하는 두 가지 단계가 있습니다 : SNAP – 태그 융합, 그리고 선택의 SNAP 태그 기판과 융합의 상표로 관심의 단백질의 복제, 그리고 표현. SNAP 태그 인간 O를 기반으로 작은 단백질이다<sup> 6</sup(hAGT)> – alkylguanine – DNA – alkyltransferase DNA 수리 단백질. SNAP 태그 레이블은 벤질 링커를 통해 구아닌에 복합 염료 또는 chloropyrimidine 떠나는 그룹입니다. 라벨 반응에서 기판의 치환 벤질 그룹은 covalently SNAP 태그에 첨부되어 있습니다. CLIP – 태그 benzylcytosine보다는 benzylguanine 파생 상품과 함께 반응하도록 설계 SNAP 태그의 수정된 버전입니다. SNAP 태그와 함께 사용할 경우, 클립 – 태그는 동일한 셀에 동시에 두 단백질의 직교 및 보완 라벨 수 있습니다.
형광단의 photostability은 퇴색하기 전에 캡처해야합니다 얼마나 빨리 형광 결정 등 초점, 레이저 강도, 장비 기능, 렌즈 사용 등 관찰 결과에 영향을 미치는 여러 변수가 있습니다.
단백질 라벨의이 방법은 다양한 여러 애플 리케이션에 적합합니다. 합성 프로브와 함께 융합 단백질의 특정 상표에 대한 SNAP – 태그와 클립 태그 기술은 라이브 세포에서 세포 lysates의 역동적인 프로세스를 포함하여 다양한 단백질 기능의 다양한 측면을 활성화하십시오. SNAP -, 클립, MCP 및 ACP 태그 기술이 생활하고 고정된 세포에 단백질의 이미지와 체외에서 단백질 연구에 단순하고 특별한 다기능을 제공합니다. 하나의 유전자 구조의 생성은 fluorophores, 비오틴, 또는 구슬을 포함하여 기능 그룹의 다양한 공유 결합 결합을 형성 수있는 태그 융합 단백질을 산출. 관심의 단백질은 복제 및 표현 한 번만 후 융합이 같은 라이브 셀 내부에 동시 단백질 라벨, 단백질 현지화 및 translocation, 펄스 – 체이스 실험, 수용체의 국제화 연구 등 다양한 스트림 애플 리케이션을위한 형광 기판의 다양한 사용할 수 있어야합니다 , 선택적 세포 표면 라벨, 단백질은 assays, SDS – PAGE, 유동세포계측법, microtiter 접시, 바이오 센서 상호 작용 실험에서 높은 처리량 바인딩 assays의 단백질 감지, 그리고 걱정 기반 바인딩 assays를 가져옵니다.
The authors have nothing to disclose.
카이 Johnsson
이반 코레아
안드레아스 브레히트
카트린 Müentener
크리스 노렌
루오 일
밍 쑤
테오도르 데이비스
살바토레 Russello
Aihua 장
잉카 가쉬
엘리사 Maunus
니콜라스 라바흐뜨
제임스 맥팔랜드
존 버스웰
브렌다 데즈먼드
제임스 엘라드
돈 빗
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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CHO-K1 Cells | ATCC | CCL-61 | ||
Serum free F-12K | ||||
Lab-Tek II Chambered Coverglass with #1.5 borosilicate coverglass chambers | Nalgene Nunc Int. | 155409 | Lot: 100808-8-0 | |
DMEM | ||||
Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate (10 mg/ml solution in water, 16.2 mM solution) | Invitrogen Molecular Probes | H3570 | 470519 | |
Zeiss Apotome Axiovert 200M fluorescent microscope | Zeiss | |||
Transpass V | New England Biolabs | M2561S | 0030709 | |
Transpass D2 | New England Biolabs | M2554S | 0060802 | |
SNAP-Cell TMR Star | New England Biolabs | S9105S | 0010811 | |
pSNAP-ADBR2 Control Plasmid | New England Biolabs | N9178S | 0010811 | |
pSNAP-H2B Control Plasmid | New England Biolabs | N9179S | 0010811 |