SNAP – tagとCLIP -タグタンパク質のラベリングシステムは生細胞で目的のタンパク質に、蛍光色素を含む分子の特定の、共有結合を、有効にしてください。一度クローン化と発現し、タグ付けされたタンパク質は、再度クローンを作成することなく、多くのダウンストリームアプリケーションのための基板の様々な使用することができます。
SNAP – tagとCLIP -タグタンパク質のラベリングシステムは生細胞で目的のタンパク質に、蛍光色素を含む分子の特定の、共有結合を、有効にしてください。これらのシステムは、イメージング計測の範囲に最適化された蛍光基質の幅広い選択を提供する。一度クローン化と発現し、タグ付けされたタンパク質は、再度クローンを作成することなく、多くのダウンストリームアプリケーションのための基板の様々な使用することができます。このシステムを使用する2つの手順があります。SNAPタグ融合、及び選択肢のSNAP – tagを基板との融合のラベルとして、目的のタンパク質のクローニングおよび発現。 SNAP – tagは、人間のOに基づいて小さなタンパク質である<sup> 6</supDNA修復タンパク質、(hAGT)> – alkylguanine – DNA – alkyltransferase。 SNAPタグラベルは、ベンジルリンカーを介してグアニンに結合した染料またはピリミジン脱離基である。ラベリング反応で、基質の置換ベンジル基が共有結合SNAPタグに添付されます。 CLIP – tagはbenzylcytosineではなく、ベンジルグアニン誘導体と反応するように設計さSNAP – tagの修正版です。 SNAPタグと組み合わせて使用すると、CLIP – tagは、同じセル内で同時に2つのタンパク質の直交すると補完的なラベリングが可能になります。
フルオロフォアの光安定が退色する前に捕捉されている必要がありますどのように迅速に蛍光を決定するような焦点、レーザー強度、機器の機能、レンズが使用される、などの観測結果に影響を与えるいくつかの変数があります。
タンパク質標識のこの方法は汎用性と、多くのアプリケーションに適しています。合成プローブとの融合タンパク質の特定のラベルのためのSNAP – tagとCLIPタグ技術が生きている細胞で、細胞溶解物の動的なプロセスのさまざまなを含むタンパク質の機能のさまざまな側面を、有効にしてください。 SNAP -、CLIP -、MCP -およびACP -タグ技術は、ライブと固定された細胞中のタンパク質のイメージング、およびin vitroでのタンパク質の研究にシンプルさと異常な汎用性を提供します。単一の遺伝子コンストラクトの作成は、蛍光色素、ビオチン、またはビーズを含む官能基、のさまざまな共有結合を形成することができるタグ付き融合タンパク質が得られます。目的のタンパク質をクローニングし、発現し一度だけして、融合はそのような生細胞内の同時タンパク質標識、タンパク質の局在や転座、パルス – チェイス実験、受容体の内在化の研究など、数多くのダウンストリームアプリケーションのための蛍光基質の様々で使用することができますする必要があります。 、選択的な細胞表面のラベリング、タンパク質はアッセイ、SDS – PAGEにおけるタンパク質の検出、フローサイトメトリー、高スループットのマイクロタイタープレートに結合アッセイ、バイオセンサーの相互作用の実験、およびFRETに基づく結合アッセイをプルダウン。
The authors have nothing to disclose.
カイヨーンソン
イヴァンコレア
アンドレアスブレヒト
カトリンMüentener
クリスのれん
羅日
明許
セオドアデイビス
サルヴァトーレRussello
愛華張
インカゴーシュ
エリッサMaunus
ニコラスラバルト
ジェームズマクファーランド
ジョンバスウェル
ブレンダデズモンド
ジェームズエラード
ドンコーム
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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CHO-K1 Cells | ATCC | CCL-61 | ||
Serum free F-12K | ||||
Lab-Tek II Chambered Coverglass with #1.5 borosilicate coverglass chambers | Nalgene Nunc Int. | 155409 | Lot: 100808-8-0 | |
DMEM | ||||
Hoechst 33342, trihydrochloride, trihydrate (10 mg/ml solution in water, 16.2 mM solution) | Invitrogen Molecular Probes | H3570 | 470519 | |
Zeiss Apotome Axiovert 200M fluorescent microscope | Zeiss | |||
Transpass V | New England Biolabs | M2561S | 0030709 | |
Transpass D2 | New England Biolabs | M2554S | 0060802 | |
SNAP-Cell TMR Star | New England Biolabs | S9105S | 0010811 | |
pSNAP-ADBR2 Control Plasmid | New England Biolabs | N9178S | 0010811 | |
pSNAP-H2B Control Plasmid | New England Biolabs | N9179S | 0010811 |