Bimolecular प्याज जीन Helios गन का उपयोग कक्ष में प्रतिदीप्ति complementation (BiFC) प्रोटीन प्रोटीन सहभागिता के लिए परख
Summary
यह आलेख दिखाता है कि कैसे ठीक से इस्तेमाल करने के लिए BioRad जीन गन Helios प्याज epidermal कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए परिचय और प्याज कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत bimolecular प्रतिदीप्ति complementation के सिद्धांत (BiFC) पर आधारित के लिए परीक्षण
Abstract
विविध जीवों में जीन समारोह की जांच कैसे जीन उत्पादों अपने सामान्य सेलुलर वातावरण में एक दूसरे के साथ बातचीत के ज्ञान पर निर्भर करता है. Bimolecular प्रतिदीप्ति complementation परख (BiFC)<sup> 1</sup> शोधकर्ताओं जीवित कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत कल्पना करने के लिए अनुमति देता है और एक आवश्यक अनुसंधान उपकरण बन गया है. इस परख कि प्रत्येक एक संभावित बातचीत प्रोटीन साथी इनकार कर रहे हैं एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) के दो टुकड़े की सुविधा सहयोग पर आधारित है. दो प्रोटीन भागीदारों की बातचीत एन टर्मिनल और GFP के सी – टर्मिनल टुकड़ा के सहयोग की सुविधा, प्रतिदीप्ति के लिए अग्रणी होगा. संयंत्र के शोधकर्ताओं के लिए, प्याज epidermal कोशिकाओं की वजह से प्राप्त करने और प्याज ऊतकों की तैयारी में आसानी और कम से कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति के साथ प्रतिदीप्ति के प्रत्यक्ष दृश्य BiFC परख के संचालन के लिए एक आदर्श प्रायोगिक प्रणाली रहे हैं. जीन Helios गन (BioRad) आमतौर पर प्याज कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए बौछार करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हम प्रदर्शन का उपयोग जीन गन Helios के लिए दो बातचीत के लिए प्लाज्मिड constructs परिचय<em> Arabidopsis thaliana</em> प्रतिलेखन कारकों (एस ई यू) सिअस और LEUNIG HOMOLOG (LUH)<sup2></sup> और उनके द्वारा मध्यस्थता प्याज epidermal कोशिकाओं में BiFC बातचीत के दृश्य.
Protocol
Discussion
- पहली बार उपयोगकर्ताओं के लिए, हम पूरी प्रक्रिया का अभ्यास करने की सलाह देते हैं, एक एकल 35S जैसे प्लाज्मिड विधान संवाददाता के साथ कारतूस तैयारी से अवलोकन करने के लिए: GFP या 35S: गस. हम एक 35S इस्तेमाल किया: प्लाज्मिड GFP ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम डीआरएस धन्यवाद. स्टीव माउंट और Xiaoning झांग 35S के लिए: GFP pGlowbug निर्माण और जेड एस ल प्रयोगशाला में Hokensen दर्पण अनुसंधान डॉक्टरेट फैलोशिप अमेरिका के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (IOB0616096 और MCB0744752) द्वारा समर्थित है. ZL आंशिक रूप से मैरीलैंड कृषि प्रयोग स्टेशन के विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Yellow onion | Any supermarket | |||
| Helios Gene Gun | BioRad | |||
| Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP | Zeiss, Nikon, Olympus |
References
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