Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC) Пробирной для белок-белковые взаимодействия в Лук ячеек с использованием генной пушки Helios
Summary
В этой статье показано, как правильно использовать BioRad Гелиос генной пушки ввести ДНК плазмиды в клетки эпидермиса лука и как тест на белок-белковых взаимодействий в клетках лука на основе принципа Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC)
Abstract
Исследование функции генов в различных организмах зависит от знания того, как генные продукты взаимодействуют друг с другом в их нормальной клеточной среды. Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC) Пробирной<sup> 1</sup> Позволяет исследователям представить себе белок-белковых взаимодействий в живых клетках и стала важным инструментом исследований. Этот анализ основан на способствовало объединение двух фрагментов флуоресцентный белок (GFP), каждый из которых слит с потенциальным партнером белка взаимодействуют. Взаимодействие двух партнеров белка будет способствовать ассоциации N-терминал и С-концевой фрагмент GFP, что приводит к флуоресценции. Для завода исследователей, лук клеток эпидермиса являются идеальной экспериментальной системы для проведения анализа BiFC из-за легкости в получении и подготовке лук тканей и прямой визуализации флуоресценции с минимальным флуоресценции фон. Helios генной пушки (BioRad) обычно используется для бомбардирующих плазмиды ДНК в клетках лука. Мы демонстрируем использование Гелиос генной пушки ввести плазмиду конструкции для двух взаимодействующих<em> Arabidopsis thaliana</em> Транскрипционных факторов, Сьюз (СоЭС) и LEUNIG гомолога (LUH)<sup> 2</sup> И визуализации их взаимодействия опосредованы BiFC в луковом клеток эпидермиса.
Protocol
Discussion
- Для пользователей-новичков, мы рекомендуем практикующих всю процедуру, от картриджа подготовка к наблюдению, с одной плазмиды учредительных репортер, такие как 35S:: GFP или 35S:: GUS. Мы использовали 35S:: GFP плазмида получена из докторов. Стив горе и Чжан Сяонин 6 (рис. 1А, D). Ген выстрел контроль кар?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим доктора. Стив горе и Чжан Сяонин для 35S:: GFP pGlowbug построить и Hokensen Докторантура стипендий для CH Исследования в лаборатории З. единиц поддерживается Национальным научным фондом США (IOB0616096 и MCB0744752). ZL частично поддержана Университета штата Мэриленд сельскохозяйственной опытной станции.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Yellow onion | Any supermarket | |||
| Helios Gene Gun | BioRad | |||
| Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP | Zeiss, Nikon, Olympus |
References
- Hu, C. D., Chinenov, Y., Kerppola, T. K. Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation. Mol Cell. 9 (4), 789-789 (2002).
- Sitaraman, J., Bui, M., Liu, Z. LEUNIG_HOMOLOG and LEUNIG perform partially redundant functions during Arabidopsis embryo and floral development. Plant Physiol. 147 (2), 672-672 (2008).
- Walter, M. Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation. Plant J. 40 (3), 428-428 (2004).
- Woods, G., Zito, K. Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture. J Vis Exp. , (2008).
- Azhakanandam, S., Nole-Wilson, S., Bao, F., Franks, R. G. SEUSS and AINTEGUMENTA mediate patterning and ovule initiation during gynoecium medial domain development. Plant Physiol. 146 (3), 1165-1165 (2008).
- Zhang, X. N., Mount, S. M. Two alternatively spliced isoforms of the Arabidopsis SR45 protein have distinct roles during normal plant development. Plant Physiol. 150 (3), 1450-1450 (2009).
