헬리 우스 진 건을 사용하여 양파 세포에서 단백질 - 단백질 상호 작용에 대한 Bimolecular 형광 Complementation (BiFC) 어세이
Summary
이 문서는 제대로 BioRad는 양파 표피 세포에 플라스미드 DNA을 소개하는 진 건 헬리 우스 및 Bimolecular 형광 Complementation의 원칙 (BiFC)를 기반으로 양파 세포에서 단백질 – 단백질 상호 작용에 대한 테스트를 사용하는 방법을 보여줍니다
Abstract
다양한 생물의 유전자 기능을 조사 유전자 제품들이 정상 세포 환경에서 서로 상호 작용하는 방법에 대한 지식에 의존하고 있습니다. Bimolecular 형광 Complementation (BiFC) 어세이<sup> 1</sup> 연구자들이 살아있는 세포에서 단백질 – 단백질 상호 작용을 시각화 수 있도록하고 필수적인 연구 도구가되었습니다. 이 분석은 각 잠재적인 상호 작용하는 단백질 파트너 융합하는 형광 단백질 (GFP)의 두 조각의 촉진 협회를 기반으로합니다. 두 단백질 파트너의 상호 작용 형광로 이어지는, N – 터미널과 GFP의 C – 말단 조각의 연결을 용이하게합니다. 식물 연구원, 양파 표피 세포 때문에 양파 조직을 얻는 방법과 준비의 용이성과 최소한의 배경 형광과 형광의 직접적인 시각화의 BiFC 분석을 실시를위한 이상적인 실험 시스템입니다. 헬리 우스 진 건 (BioRad)은 일반적으로 양파 세포에 플라스미드 DNA를 bombarding에 사용됩니다. 우리의 사용 두 개의 상호 작용에 대한 플라스미드 구조를 소개 진 건 헬리 우스 입증<em> Arabidopsis thaliana</em> 전사 요소 수스 (겁쟁이)와 LEUNIG의 상동체 (LUH)<sup> 2</sup>와 양파 표피 세포에 의해 매개 BiFC들의 상호 작용의 시각화.
Protocol
Discussion
- : GFP 또는 35S : : : 거스 처음 사용자를 위해, 우리는 35S와 같은 하나의 플라스미드 제정 기자와 카트리지 준비에서 관찰하는 전체 절차를 연습하는 것이 좋습니다. 우리는 35S 사용 : 플라스미드 GFP는 DRS 얻은. 스티브 마운트 및 Xiaoning 장 6 (그림 1A, D). RioRad (CAT 165-2244)에서 판매하고 유전자 촬영 제어 카트리지 공장에 적합하지 않습니다.
- BiFC 들어, 두 번째 긍정적인 제어가 각각 YFP의 C – 터미널과…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 DRS 감사합니다. 35S에 대한 스티브 마운트 및 Xiaoning 장 : GFP pGlowbug 구조 Z. L'의 실험실에서 CH 연구에 Hokensen 박사 원정대는 미국 국립 과학 재단 (IOB0616096 및 MCB0744752)에 의해 지원됩니다. ZL는 부분적으로 메릴랜드 농업 실험 역 대학에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Yellow onion | Any supermarket | |||
| Helios Gene Gun | BioRad | |||
| Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP | Zeiss, Nikon, Olympus |
References
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