Overview
此视频描述了 肺卵巢的一般解剖,并采用一种解剖卵巢进行活体或固定成像的方法。
Protocol
本协议摘自帕克等人,研究线粒体结构和功能在 德罗索菲拉 卵巢,J.Vis.Exp.(2017 年)。
1. 德罗索菲拉 的准备(所需的工具在 图1A中描述)
- 对于描述的任何实验,在电子封闭后 5 天内收集 Drosophila( 在室温下保持或 25 °C),并将其放在小瓶中,里面装满 5 - 7 mL 的 德罗索菲拉 食物(见 材料表),每个小瓶中不超过 25 只苍蝇:保持女性:男性比例为2:1。
- 撒少量的颗粒酵母,以刺激 果蝇 蛋的生产。在 2 - 4 天内执行实验操作。
2. 德 罗索菲拉 卵巢解剖(所需工具在 图1A中描述)
- 温暖的昆虫解剖介质(见 材料表)到室温,25°C。 将三口井装满一个八井玻璃解剖盘,每口井中均有200μL的介质。
- 通过将吹枪的针头放在小瓶塞下,用二氧化碳麻醉德罗索菲拉。把它们放在飞垫上。使用解剖显微镜,整理出5个女性,并把它们放在解剖盘的第一口井里。在进行现场显微镜检查时,一次处理一个果蝇。
- 在通过解剖显微镜的目镜观察时,使用两对钳子切断腹部的胸腔。使用钳子,小心地将腹部转移到菜的第二口井。
- 使用一对钳子将腹部抱在后端,并用另一对钳子缓慢地将卵巢(与其他腹部内容一起)推出。如果此尝试失败,请通过将钳子插入前端以释放卵巢来小心地切除腹部外骨骼。
- 使用钳子,在不透明的后端(即蛋黄填充的后期鸡蛋)前固定单个卵巢,并小心地将其移到菜的第三口井,以便戏弄以进行活显微镜处理或固定以进行免疫染色。
- 小心地从卵巢周围梳理保护护套,轻轻从后部扫到每个卵巢前端的戏弄针,同时用一对钳子将其抱在后端。
注: 为了尽量减少戏弄过程中的损伤,弯曲针尖,通过增加显微镜的放大倍数(图1A)放大每个卵巢。戏弄应该足够有效,以打破护套,但它也应该仔细做,以保持卵石的完整性。
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Representative Results
图1:实验计划和准备。(A)所述方法中使用的工具:A. 飞瓶:B. 昆虫解剖介质:C. 甲醛:D. 飞刷:E. 解剖菜:F. 盖玻璃:G. 微胶管。H. 玻璃底菜;I. 玻璃滑梯:J. 1,000-μL微皮:K. 200-μL 微皮埃:L. 2.5-μL 微皮埃:M. 用弯曲的尖头戏弄针头(尖端放大):N. 厚钳:O. 细钳。(B)代表所述方法的流程图示意图。请单击此处查看此图的更大版本。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Grace's Media (Insect Dissecting Medium) | Fisher Scientific | 30611031-2 | |
41 Paraformaldehyde AQ | Electronic Microscopy Sciences | 50-259-99 | |
PolyLysine | MP Biomedicals | ICN15017625 | |
Fly Vials | Fisher Scientific | AS-515 | |
Fly Vial Plugs | Fisher Scientific | AS273 | |
Jazzmix Drosophila food (Drosophila food) | Fisher Scientific | AS153 | |
Azer Scientific EverMark Select Microscope Slides | Fisher Scientific | 22-026-252 | |
Microscope Cover Glass | Fisher Scientific | 12-542-B | |
Mat Tek Corp Glass Bottom Mircrowell Dish | Fisher Scientific | P35G-0-14-C | |
Active Dried Yeast | Fisher Scientific | ICN10140001 | |
Dumont #5 Forceps | Fine Science Technologies | 11251-20 | |
Moria Nickel Plated Pin Holder | Fine Science Technologies | 26016-12 | |
Minutien Pins | Fine Science Technologies | 26002-15 | |
MYFP ( w[*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 ) | Bloomington Stock Center | 7194 | |
Fly Pad | Fly stuff | 59-118 | |
Blowgun | Fly stuff | 54-104 | |
Blowgun needle | Flystuff | 54-119 | |
Dissecting Microscope | Carl Zeiss | Stemi 2000 |