Overview
このビデオは、ショ ウジョウバエ卵巣の一般的な解剖学を説明し、生きているまたは固定画像のために卵巣を解剖する方法を特色にする。
Protocol
このプロトコルは、パーカーらからの抜粋です, ショ ウジョウバエ 卵巣のミトコンドリア構造と機能を研究, J. Vis. Exp. (2017).
1. ショウジョウバエ の準備(必要な道具は 図1A)に示す)
- 記載された実験のいずれに対しても、除菌から5日以内に ショウジョウバエ (室温、または25°Cで維持)を収集し、5〜7mLの ショウジョウバエ 食品( 材料表を参照)で満たされたバイアルに入れ、各バイアルに25個以下のハエを使用します。2:1の女性:男性比を維持する。
- ショ ウジョウバエ の卵の生産を刺激するために粒状酵母を少量振りかけます。2~4日以内に実験的操作を行います。
2. ショ ウジョウバエ 卵巣の解剖(必要な道具は 図1Aに示す)
- 温かい昆虫解剖媒体( 材料表を参照)を室温まで、25°C 8ウェルガラスの解剖皿の3つの井戸を、各井戸に200 μLの媒体で満たします。
- バイアルプラグの下にブローガンの針を置くことによって、CO2でショウジョウバエを麻酔します。フライパッドの上に置きます。解剖顕微鏡を使用して、5人のメスを選別し、解剖皿の最初の井戸に入れます。ライブ顕微鏡を行う際には、一度に1つのショウジョウバエを扱う。
- 解剖顕微鏡の接眼を通して、2組の鉗子を用いて腹部から胸郭を切断する。鉗子を使用して、慎重に皿の第二の井戸に腹部を移します。
- 一対の鉗子を使用して後端で腹部を保持し、他方の鉗子と一緒に卵巣をゆっくりと押し出す(他の腹部の内容物と一緒に)。この試みが失敗した場合は、慎重に卵巣を解放するために前端に鉗子を挿入することによって腹部外骨格を除去する。
- 鉗子を使用して、不透明な後端(すなわち、黄身で満たされた後期卵)によって個々の卵巣を保持し、生きた顕微鏡のためにそれを処理するためにそれをからかうか、または免疫染色を行うための固定のために皿の第3の井戸に慎重に移動する。
- 後部から後部の端部に鉗子を持ちながら、後部からかい針を軽く後部から前部端まで軽く掃いて、卵巣の周りから保護シースを慎重にいじめます。
注: からかう際の損傷を最小限に抑えるために、針先を曲げて、顕微鏡の倍率を上げて各卵巣を拡大します(図1A)。からかいは鞘を壊すのに十分有効であるべきですが、卵巣の完全性を保つためにも慎重に行う必要があります。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
図1:実験計画と準備(A)上記の方法で使用されるツール: A. フライバイアル;B. 昆虫の解剖媒体;C. パラホルムアルデヒド;D. フライブラシ;E. 料理を解剖する。F. カバーガラス;G. マイクロフュージチューブ.H. ガラス底の料理;I. ガラススライド;J. 1,000-μLマイクロピペット;K. 200-μLマイクロピペット;L. 2.5-μLマイクロピペット;M. 曲がった先端(先端が拡大される)とのからかい針;N. 厚い鉗子;O. 薄い鉗子。(B)記載した方法を表すフローチャート図。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Grace's Media (Insect Dissecting Medium) | Fisher Scientific | 30611031-2 | |
| 41 Paraformaldehyde AQ | Electronic Microscopy Sciences | 50-259-99 | |
| PolyLysine | MP Biomedicals | ICN15017625 | |
| Fly Vials | Fisher Scientific | AS-515 | |
| Fly Vial Plugs | Fisher Scientific | AS273 | |
| Jazzmix Drosophila food (Drosophila food) | Fisher Scientific | AS153 | |
| Azer Scientific EverMark Select Microscope Slides | Fisher Scientific | 22-026-252 | |
| Microscope Cover Glass | Fisher Scientific | 12-542-B | |
| Mat Tek Corp Glass Bottom Mircrowell Dish | Fisher Scientific | P35G-0-14-C | |
| Active Dried Yeast | Fisher Scientific | ICN10140001 | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Technologies | 11251-20 | |
| Moria Nickel Plated Pin Holder | Fine Science Technologies | 26016-12 | |
| Minutien Pins | Fine Science Technologies | 26002-15 | |
| MYFP ( w[*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 ) | Bloomington Stock Center | 7194 | |
| Fly Pad | Fly stuff | 59-118 | |
| Blowgun | Fly stuff | 54-104 | |
| Blowgun needle | Flystuff | 54-119 | |
| Dissecting Microscope | Carl Zeiss | Stemi 2000 |
