Overview
Le comportement de ponte de C. elegans peut fournir l’information importante dans les études développementales, reproductrices, et anatomiques. Cette vidéo présente les étapes importantes d’un test de ponte et montre une expérience d’échantillon dans laquelle un médicament est testé pour la toxicité reproductive.
Protocol
Lee et Kang, Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans Egg Laying Assay
- Incuber les œufs synchronisés par âge sur la plaque NGM contenant du DMSO ou de l’etoposide pendant 64 h (avant la première naissance) jusqu’au stade du jeune adulte à 20 °C.
REMARQUE: Il est facultatif d’utiliser les vers des expériences de mesure de croissance. Il est commode de faire la mesure de croissance et l’essai de ponte ensemble. - Transférer 5 vers adultes dans les nouvelles plaques NGM sans produits chimiques (état 1, traitement chimique dans un certain laps de temps, des œufs au stade du jeune adulte) ou de la nouvelle plaque NGM contenant le même prétraitement chimique (état 2, exposition continue de produits chimiques pendant la période expérimentale globale), puis les incuber pendant 24 h.
REMARQUE: Il est recommandé de faire des répliques à l’aide de plaques 3-5 NGM pour chaque traitement; ces répliques peuvent être utilisées pour l’analyse statistique. - Transférer dans la nouvelle plaque NGM décrite ci-dessus et compter le nombre d’œufs par jour. Comptez les vers qui ont rampé, qui sont morts et qui ont été éclos à l’intérieur.
- Répétez ces étapes jusqu’à ce que les vers ne pondent plus d’œufs, généralement en 5 jours.
- Calculez le nombre d’œufs pondus par ver à partir de chaque assiette et résumez ces valeurs chaque jour pendant 5 jours pour déterminer le nombre total d’œufs pondus.
REMARQUE: Exclure le nombre de vers qui ont rampé et éclos à l’intérieur du calcul.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
