Overview
ג. התנהגות הטלת ביצים של אלגנס יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, רבייה ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומראה ניסוי מדגם שבו נבדקת תרופה לרעילות הרבייה.
Protocol
לי וקאנג, מדידת ההשפעה של כימיקלים על הצמיחה והרבייה של אלגנים Caenorhabditis, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. אלגנס ביצה מטילה אסאי
- דגירה ביצים מסונכרנות גיל על צלחת NGM המכיל DMSO או etoposide עבור 64 שעות (לפני הלידה הראשונה) עד שלב הבוגר הצעיר ב 20 °C (69 °F).
שים לב: זה אופציונלי להשתמש בתולעים מניסויי מדידת הצמיחה. זה נוח לעשות את מדידת הצמיחה ואת הביצה הטלת assay יחד. - העבר 5 תולעים בוגרות ללוחות NGM החדשים ללא כימיקלים (מצב 1, טיפול כימי בתוך פרק זמן מסוים, מביצים לשלב מבוגר צעיר) או צלחת NGM חדשה המכילה את אותו טיפול כימי (מצב 2, חשיפה מתמשכת של כימיקלים במהלך תקופת הניסוי הכוללת), ולאחר מכן דגירה אותם במשך 24 שעות.
שים לב: מומלץ לעשות שכפולים באמצעות 3-5 לוחות NGM עבור כל טיפול; ניתן להשתמש בשכפולים אלה לצורך ניתוח סטטיסטי. - מעבירים לצלחת ה-NGM החדשה כמתואר לעיל וסופרים את מספר הביצים מדי יום. ספור את התולעים שזחלו, מתו, ובקעו מבפנים.
- חזור על שלבים אלה עד התולעים להטיל ביצים יותר, בדרך כלל ב 5 ימים.
- לחשב את מספר הביצים שהוטלו לכל תולעת מכל צלחת, לסכם ערכים אלה כל יום במשך 5 ימים כדי לקבוע את המספר הכולל של ביצים שהוטלו.
שים לב: אל תכלול את מספר התולעים שנסרקו ובקעו באופן פנימי מהחישוב.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
