Overview
C. elegans comportamiento de puesta de óvulos puede proporcionar información importante en estudios de desarrollo, reproductivos y anatómicos. Este video presenta los pasos importantes de un ensayo de puesta de huevos y muestra un experimento de muestra en el que un fármaco se prueba para detectar toxicidad reproductiva.
Protocol
Lee y Kang, Medición del efecto de los productos químicos en el crecimiento y reproducción de Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2017).
1.C. Ensayo de puesta de huevos elegans
- Incubar los huevos sincronizados por edad en la placa NGM que contenga DMSO o etoposide durante 64 h (antes del primer nacimiento) hasta la etapa de adulto joven a 20 °C.
NOTA: Es opcional utilizar los gusanos de los experimentos de medición de crecimiento. Es conveniente hacer la medición del crecimiento y el ensayo de puesta de huevos juntos. - Transfiera 5 gusanos adultos a las nuevas placas NGM sin productos químicos (condición 1, tratamiento químico dentro de un cierto período de tiempo, desde huevos a la etapa de adultos jóvenes) o nueva placa NGM que contenga el mismo pretratamiento químico (condición 2, exposición continua de productos químicos durante el período experimental general) y luego incubarlos durante 24 h.
NOTA: Se recomienda realizar réplicas utilizando placas NGM 3-5 para cada tratamiento; estas réplicas se pueden utilizar para el análisis estadístico. - Transfiéralo a la nueva placa NGM como se describió anteriormente y cuenta el número de huevos todos los días. Cuente los gusanos que se arrastraron, murieron y fueron eclosionados internamente.
- Repita estos pasos hasta que los gusanos no dejen más huevos, generalmente en 5 días.
- Calcule el número de huevos colocados por gusano de cada plato y sume estos valores todos los días durante 5 días para determinar el número total de huevos puestos.
NOTA: Excluya el número de gusanos que se arrastraron y eclosionaron internamente del cálculo.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
