Overview
C. एलिगेंस अंडा बिछाने वाला व्यवहार विकास, प्रजनन और शारीरिक अध्ययनों में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान कर सकता है। यह वीडियो एक अंडा बिछाने परख के महत्वपूर्ण चरणों का परिचय देता है और एक नमूना प्रयोग दिखाता है जिसमें प्रजनन विषाक्तता के लिए एक दवा का परीक्षण किया जाता है।
Protocol
ली और कांग, कैनोरहैब्डिटिस एलिगेंस,जे विस एक्सपी के विकास और प्रजनन पर रसायनों के प्रभाव को मापने। (2017).
1.C. elegans अंडा बिछाने परख
- 20 डिग्री सेल्सियस पर युवा वयस्क चरण तक 64 घंटे (पहले जन्म से पहले) के लिए डीएमएसओ या एटोपोसाइड युक्त एनजीएम प्लेट पर उम्र-सिंक्रोनाइज्ड अंडे को इनक्यूबेट करें।
नोट: विकास माप प्रयोगों से कीड़े का उपयोग करना वैकल्पिक है। विकास मापन और अंडा बिछाने परख एक साथ करना सुविधाजनक है। - रसायनों के बिना नई एनजीएम प्लेटों में 5 वयस्क कीड़े स्थानांतरित करें (शर्त 1, समय की एक निश्चित अवधि के भीतर रासायनिक उपचार, अंडे से युवा वयस्क चरण तक) या एक ही रासायनिक प्रीट्रीटमेंट (कंडीशन 2, समग्र प्रायोगिक अवधि के माध्यम से रसायनों के निरंतर संपर्क) वाले नए एनजीएम प्लेट, और फिर उन्हें 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
नोट: प्रत्येक उपचार के लिए 3-5 एनजीएम प्लेटों का उपयोग करके प्रतिकृति बनाने की सिफारिश की जाती है; इन प्रतिकृति का उपयोग सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए किया जा सकता है। - ऊपर वर्णित नई एनजीएम प्लेट में स्थानांतरित करें और हर दिन अंडे की संख्या गिनें। कीड़े कि बंद रेंगते, मर गया, और आंतरिक रूप से रची गई गिनती ।
- इन चरणों को तब तक दोहराएं जब तक कि कीड़े कोई और अंडे न दें, आमतौर पर 5 दिनों में।
- प्रत्येक प्लेट से प्रति कीड़ा रखे अंडे की संख्या की गणना करें, और रखे गए अंडों की कुल संख्या निर्धारित करने के लिए हर दिन 5 दिनों के लिए इन मूल्यों का योग करें।
नोट: गणना से क्रॉल और आंतरिक रूप से रची गई कीड़े की संख्या को बाहर करें।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
