Overview
此视频描述了一种从小鼠肝脏中生成器官条件介质的方法。该模型系统可用于识别和研究器官衍生的可溶性因子及其对癌细胞器官三位一体和转移行为的影响。
Protocol
1. 肺和脑条件介质的生成
- 在无菌组织培养罩中，倒置含有肺或大脑的 PBS 管三次，从器官中取出残留血液，并吸气含有血液的 PBS。重复与新鲜的冷PBS，直到解决方案显示清楚，没有血液的证据。
- 将肺和大脑分别放在 60 mm2 玻璃培养皿中。使用两个无菌手术刀片，薄荷肺或大脑反复切开来回，直到组织碎片是大约约1毫米大小。
- 确定从计算的重量差异中恢复组织片段所需的介质量。
注： 肺和脑组织在 4：1 介质：组织比率 （vol/wt） 中通过悬念使体重正常化。 - 杜尔贝科的改良鹰介质 （DMEM）： F12 介质辅以 1x 浓缩线粒蛋白补充剂和青霉素 （50μg/ml） /链霉素 （50μg/ml）的适当体积（以前在步骤 1.3 中确定）。
- 将恢复的肺部或脑组织片段添加到 6 井板的一口井中。
- 在介质中孵化组织片段 24 小时，在 37 °C 和 5% CO2。孵化后，为每个组织收集条件介质，并在 50 毫升圆锥管中加入三个等量的新鲜介质，进一步稀释。
- 在 4 °C 的稀释条件下介质中，以 1，000 x g 的离心机在 15 分钟内清除大型组织碎片。通过 0.22 μm 注射器过滤器收集介质超标并进行过滤。
- 池调节介质从每个器官（即肺与肺和大脑与大脑）从多个小鼠，以解释小鼠对小鼠的变异性。阿里报价和存储条件介质在-80°C，直到使用。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1x Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010-023 | Keep sterile |
| 60 mm2 glass petri dishes | Sigma-Aldrich | CLS7016560 | Keep sterile |
| DMEM:F12 | Life Technologies | 21331-020 | Warm in 37 °C water bath before use, keep sterile |
| Penicillin-Streptomycin (10,000 U/ ml) | Life Technologies | 15140-122 | Keep sterile |
| 50 ml conical tubes | Thermo Scientific (Nunc) | 339652 | Keep sterile |
| 0.22 μm syringe filters | Sigma-Aldrich | Z359904 | Keep sterile |
| 6-well tissue culture plates | Thermo Scientific (Nunc) | 140675 | Keep sterile |
| Scalpel blades | Fisher Scientific | S95937A | Keep sterile |
