Summary
हम ट्रेकिआ के माध्यम से anesthetized चूहों के फेफड़ों में गैर सर्जिकल परीक्षण सामग्री के वितरण का वर्णन. इस विधि फेफड़ों बैक्टीरियल और वायरल रोगज़नक़ों, साइटोकिन्स, एंटीबॉडी, मोती, रसायन, या रंजक के लिए जोखिम देता है. हम आगे और कटाई का वर्णन प्रवाह cytometry के लिए और फेफड़ों फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) के प्रसंस्करण.
Abstract
वायुकोशीय मैक्रोफेज और फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं (एलडीसी) के रूप में ऐसे Phagocytic कोशिकाओं को फेफड़ों में वायुकोशीय स्थान से लगातार प्रतिजनों नमूना. एलडीसी, विशेष रूप में, के लिए फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) जहां वे टी कोशिकाओं की शुरुआत एक उपयुक्त immunogens 1,2 की एक किस्म के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए साँस एंटीजन मौजूद हैं. को विस्थापित करने के लिए जाना जाता है चूहों में फेफड़ों और हवाई प्रतिजनों के बीच बातचीत मॉडल करने के लिए, प्रतिजनों 1,3,4 intranasally प्रशासित किया जा सकता है, intratracheally 5 या 6 एयरोसौल्ज़ के रूप में . प्रत्येक मार्ग द्वारा डिलिवरी विशिष्ट तकनीकी कौशल और सीमाओं कि एक प्रयोग डिजाइन करने से पहले विचार किया जाना चाहिए शामिल है. उदाहरण के लिए, intranasal और aerosolized जोखिम दोनों फेफड़ों और ऊपरी श्वास पथ के लिए प्रतिजनों उद्धार. इसलिए प्रतिजनों नाक जुड़े lymphoid ऊतक (NALT) 7 का उपयोग कर सकते हैं, संभावित परिणामों की व्याख्या उलझी. इसके अलावा, निगल, छींकने, और माउस के साँस लेने की दर भी दिया खुराक में विसंगतियों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. हालांकि ऊपरी श्वास नलिका के भागीदारी कुछ अध्ययनों के लिए पसंद किया जा सकता है, यह विशेष रूप से फेफड़ों में शुरू की घटनाओं पर ध्यान केंद्रित प्रयोगों को जटिल बना सकता है. इस सेटिंग में, intratracheal मार्ग (यह) बेहतर है के रूप में यह परीक्षण सामग्री सीधे फेफड़ों में और उद्धार NALT नजरअंदाज. कई लोग इसे इंजेक्शन प्रोटोकॉल मौखिक गुहा या ट्रेकिआ की शल्य चिकित्सा जोखिम फेफड़ों का उपयोग ट्रेकिआ के माध्यम से या तो अंधे इंटुबैषेण शामिल है. इस के साथ साथ, हम यह टपकाना के लिए एक सरल, संगत, गैर सर्जिकल विधि का वर्णन. ट्रेकिआ के उद्घाटन के एक फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र का उपयोग करते हुए कल्पना और एक तुला gavage सुई तो ट्रेकिआ में सीधे डाला innoculum उद्धार. हम भी कटाई और LDLNs और प्रतिजन तस्करी के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के लिए फेफड़ों के प्रसंस्करण के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन.
Protocol
1. प्रक्रिया से पहले तैयार करते हैं, और निम्नलिखित मदों को इकट्ठा
- चित्रा 1a में छवि देखें) और 1b एक लकड़ी के मंच के निर्माण प्रक्रिया के दौरान माउस को नियंत्रित करने के लिए).
- HBSS + 1.25mg/ml Collagenase TypeIV या 2.5 मिलीग्राम / एमएल Collagenase डी - लिम्फ नोड्स के लिए पाचन मिश्रण
- फेफड़ों के लिए पाचन मिश्रण - HBSS + 1 Collagenase मिलीग्राम / एमएल
- पीबीएस में लेटेक्स (01:20) intraperitoneal इंजेक्शन के लिए मनकों को पतला LDLNs कल्पना
नोट: LDLNs छोटे और खोजने के लिए मुश्किल हैं. सीखें कि कैसे उन्हें खोजने के लिए, लाल फ्लोरोसेंट लाटेकस मोतियों माउस में आईपी पतला 1:20 200μl इंजेक्षन. पेरिटोनियम इन 8 LDLNs नालियों. 24 HPI, माउस के रूप में ऊपर वर्णित के वक्ष गुहा का पर्दाफाश. LDLNs मोती कि peritoneal गुहा से सूखा से गुलाबी प्रकट होता है.
- लाल रक्त सेल (आरबीसी) lysis बफर - 0.15M एनएच 4 सीएल, 10mm 3 KHCO, 0.1 मिमी ना 1L DH 0 2 में 2 EDTA. 7.2-7.4 पीएच समायोजित और कमरे के तापमान पर दुकान.
- 70μm या 100μm सेल झरनी
- 0.5m EDTA = 8.0 पीएच के स्टॉक समाधान
- 2 CaCl और MgCl 2 के बिना HBSS
- कैंची और कुंद समाप्त संदंश
- फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र
- एक कोण पर Gavage सुई तुला (22 गेज) (चित्रा 2)
- स्टायरोफोम बोर्ड और माउस के प्रसार के लिए पिन
- शीर्ष पैन संतुलन
- Aniline ब्लू समाधान - एच 2 हे में 10mg/ml
नोट: हम यह इंजेक्शन तकनीक के प्रदर्शन के लिए इस समाधान का उपयोग किया जाएगा.
2. माउस चतनाशून्य करनेवाली औषधि की तैयारी प्रशासन
- बाँझ पीबीएस में Xylazine और Ketamine के एक मिश्रण तैयार इतनी है कि अंतिम सांद्रता 2mg/ml और 10mg/ml क्रमशः रहे हैं.
- एक शीर्ष पैन संतुलन पर माउस वजन.
- प्रत्येक माउस के लिए आवश्यक खुराक की गणना. Xylazine (2-4 मिलीग्राम / किग्रा) और Ketamine (70-80 मिलीग्राम / किग्रा) शरीर के वजन पर खुराक तैयार मिश्रण की उचित मात्रा का उपयोग और intaperitoneally इंजेक्षन. प्रत्येक माउस तनाव संवेदनाहारी के अनुकूलन की आवश्यकता हो सकती है. बहुत ज्यादा चतनाशून्य करनेवाली औषधि प्राप्त चूहे एक कम श्वसन की दर है कि बाद inoculum फेफड़ों में डाले है घातक हो सकता है हो सकता है.
- 3-5 मिनट के बाद, चतनाशून्य करनेवाली औषधि के प्रभाव के लिए माउस का निरीक्षण करते हैं. निम्नलिखित लक्षण के लिए जाँच करने के लिए पुष्टि करते हैं कि माउस पूरी तरह से anesthetized है:
- साँस लेने की दर धीमा चाहिए.
- माउस अपने हाथ नहीं खिंचाव जब गर्दन द्वारा उठाया जाना चाहिए.
- वहाँ किसी भी प्रतिक्रिया जब हिंद अंग प्रेरित कर रहे हैं नहीं होना चाहिए.
अगर इन मानदंडों को नहीं मिले हैं, कुछ मिनट के लिए प्रतीक्षा करें और अगले कदम के लिए आगे बढ़ने से पहले फिर से जाँच करें.
3. Intratracheal इंजेक्शन
- 50μl खारा में innoculum तैयार. एक 1ml innoculum के साथ एक बाँझ तुला gavage सुई के साथ लगे सिरिंज भरें. सिरिंज innoculum पीछे एक 100μl हवा जेब के साथ लोड किया जाना चाहिए करने के लिए सुनिश्चित है कि फेफड़ों में तरल पदार्थ के सभी डाले है.
- Angled लकड़ी के तार पर अपने incisors द्वारा फांसी मंच पर माउस प्लेस और धीरे रिबन के एक टुकड़े के साथ जगह में इसे नियंत्रित.
- अपने बाएँ हाथ के साथ फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र पर मुड़ें (अगर आप सही हाथ कर रहे हैं) और कुंद समाप्त संदंश के एक जोड़ी ले लो. फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र और संदंश के टिप का उपयोग करने के लिए धीरे मुँह खोलने की जिज्ञासा.
- संदंश के साथ, जीभ बाहर खींच और यह पक्ष को पकड़. मुँह के पीछे की ओर फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र ब्लेड गाइड. नीचे बहुत धीरे जब तक आप ट्रेकिआ के उद्घाटन देखते हैं एक 90 डिग्री कोण पर दबाया फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र रखें. फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र जगह में पकड़ो. देखभाल जब मुँह से जीभ खींच और यह धीरे से किया जाना चाहिए तो कोई ऊतक नुकसान होता है लिया जाना चाहिए.
- अपने दूसरे हाथ के साथ, 1ml innoculum युक्त सिरिंज, तुला gavage सुई के साथ फिट अपने दाहिने हाथ के साथ लेने के लिए और ट्रेकिआ में सुई सम्मिलित सुई में मोड़ जब तक सामने incisors द्वारा है. Innoculum देने सवार समान रूप से पुश. innoculum बुलबुला नहीं चाहिए. सुई ट्रेकिआ की जितनी जल्दी हो सके बाहर खींचो. चूहे दम और मरने अगर ट्रेकिआ भी लंबे समय के लिए अवरुद्ध है. माउस कुछ सेकंड के लिए ईमानदार innoculum फेफड़ों में साँस करने के लिए अनुमति पकड़ो.
- माउस मंच के बाहर ले जाओ और यह एक हीटिंग दीपक के पास जगह है. प्रत्यक्ष गर्मी के तहत समय की विस्तारित अवधि के लिए चूहों को छोड़ मत करो. माउस प्रक्रिया (वसूली समय उपभेदों के आधार पर भिन्न हो सकते हैं) के बाद 30 मिनट के भीतर पूरी तरह से जाग जाना चाहिए. चूहे इस समय के दौरान हो यत्न मनाया जाना चाहिए और बहुत गर्म या बहुत ठंडा नहीं दी जानी चाहिए, यह भी मौत के लिए अग्रणी श्वसन संकट में चूहों डाल सकता है.
4. फसल काटने वाले फेफड़े और प्रसंस्करण draining लिम्फ और प्रवाह cytometry के लिए नोड्स फेफड़ों
- AVMA इच्छामृत्यु के दिशा - निर्देशों के अनुसार के रूप में वांछित विधि का उपयोग चूहों बलिदान. यह व्यक्तिगत फसल के परिणामों के आधार पर भिन्न हो सकते हैं. सोडियम की एक घातक pentobarbital का प्रशासन एक उपयुक्त इच्छामृत्यु की प्रक्रिया का एक उदाहरण है. हम इच्छामृत्यु के नकारात्मक फेफड़े प्रभाव सीओ 2 द्वारा नहीं देखा है.
- हाथ, पैर और एक विच्छेदन बोर्ड पर पिन. कैंची से उदर पक्ष के बीच के साथ एक चीरा बनाओ. धीरे त्वचा को खींचने के लिए और वक्ष दीवार की मांसपेशियों को बेनकाब.
- वक्ष दीवार की मांसपेशियों के माध्यम से चीरों बनाने के लिए पेट अंगों को बेनकाब.
- संदंश और पंचर डायाफ्राम के साथ उरोस्थि की नोक पकड़ो. रिब पिंजरे के पक्ष के साथ डायाफ्राम कट.
- साथ विच्छेदन बोर्ड की सतह के समानांतर कैंची, दोनों पक्षों पर लाइन dorso वेंट्रल साथ वक्ष गुहा के माध्यम से कटौती.
- थोड़ा रिब पिंजरे के ऊपर उठा. दिल के सही पक्ष पर, thymus नीचे, बस दो लिम्फ नोड्स के लिए देखो. एक थोड़ा बड़ा तीसरे लसीका नोड एक छोटे धमनी रक्त वाहिका है कि ट्रेकिआ के लिए सीधा रन के नीचे स्थित है. लसीका नोड पाचन मिश्रण का 1 मिलीलीटर में हार्वेस्ट लिम्फ नोड्स.
- लिम्फ नोड्स की कटाई के बाद, संदंश की एक जोड़ी के साथ दिल की पकड़ और दूसरे के साथ फेफड़ों हड़पने. 6 अच्छी तरह से एक थाली में बर्फ के ठंडे पीबीएस के 3ml में हार्वेस्ट फेफड़ों.
- फेफड़ों की अलग lobes, पीबीएस aspirate और संदंश और कैंची का उपयोग कर छोटे टुकड़ों में काट lobes. फेफड़ों के लिए पाचन मिश्रण के 3ml जोड़ें. इस कदम के दौरान बर्फ पर 6 अच्छी तरह से थाली रखो.
- 37 पर 30 मिनट के लिए 25-30 मिनट और फेफड़ों के लिए लिम्फ नोड्स सेते डिग्री सेल्सियस 10mm के एक अंतिम एकाग्रता के लिए EDTA पाचन मिश्रण के प्रत्येक के लिए प्रतिक्रिया और बर्फ पर जगह को रोकने में जोड़ें.
- एक 3ml सिरिंज का प्रयोग, एक 18GA सुई के माध्यम से फेफड़ों के टुकड़े 3 बार से गुजारें. मैश 70-100μm सेल strainers 1ml सिरिंज सवार के पीछे के अंत का उपयोग कर के माध्यम से फेफड़े और LNS के टुकड़े. 2 Ca बिना HBSS के 10ml के साथ सेल strainers धो + और 2 मिलीग्राम +. 5 मिनट के लिए 500 XG अपकेंद्रित्र.
- आरबीसी lysis बफर के 5 मिलीलीटर में गोली Resuspend और कमरे के तापमान पर 3 मिनट के लिए सेते हैं. 2 Ca बिना HBSS के 10ml जोड़ें + और 2 मिलीग्राम + lysis बुझाना. 5 मिनट के लिए 500 XG अपकेंद्रित्र. फेफड़ों और LDLN एकल कक्ष निलंबन क्रमशः 10ml और 5ml लाओ. Trypan नीले अपवर्जन द्वारा जीना एक hemacytometer का उपयोग कोशिकाओं की गणना. कक्ष अब कर रहे हैं प्रवाह cytometry के लिए दाग के लिए तैयार है. फेफड़ों की एक पालि प्रवाह cytometry के लिए पर्याप्त हो सकता है. अन्य lobes साइटोकिन्स या ऊतक विज्ञान के लिए ऊतक के लिए homogenates जैसे ही माउस के भीतर अन्य प्रयोगात्मक प्रश्नों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
5. प्रतिनिधि परिणाम:
एलडीसी और फेफड़ों में वायुकोशीय मैक्रोफेज फेफड़ों की वायुकोशीय स्थान से प्रतिजन अधिग्रहण तुरंत यह इंजेक्शन के बाद. चित्रा 3 + CD11c (एलडीसी और वायुकोशीय मैक्रोफेज पर व्यक्त) का प्रतिशत कोशिकाओं है कि fluorescently लेबल बेसिलस anthracis spores के लिए सकारात्मक रहे हैं, 30 मिनट के बाद यह इंजेक्शन से पता चलता है. इस समय, फेफड़ों एकल कक्ष निलंबन में CD45 + CD11c + कोशिकाओं की ~ 15.9% बेसिलस anthracis spores (चित्रा 3, कम पैनल) harbored. फेफड़ों में CD11c + कोशिकाओं के आगे लक्षण वर्णन के लिए, किम और Braciale 4 देखें . Fluorescently लेबल मोतियों नियमित LDLNs 9 कण प्रतिजनों की तस्करी का आकलन किया जाता है . फेफड़ों से LDLNs करने के लिए यह परिवहन का आकलन करने के लिए, फ्लोरोसेंट लाटेकस मोतियों LPS और LDLNs 24 hpi पर विश्लेषण के साथ अंतःक्षिप्त थे. LDLNs में 4% CD11c हाय कोशिकाओं के 24hpi (चित्रा 4) में फ्लोरोसेंट मोती harbored. ये प्रतिनिधि प्रयोगों चलता है कि इस प्रोटोकॉल कुशलतापूर्वक फेफड़ों LDLNs और बाद में उन्हें यातायात में कोशिकाओं है कि साँस कण प्रतिजनों के अधिग्रहण को ट्रैक करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
चित्रा 1. यह इंजेक्शन के दौरान चूहों निरोधक के लिए लकड़ी के मंच. एक लकड़ी के ब्लॉक एक कोण पर काटा गया था और धातु सलाखों, सामने देखने आंकड़ा 1a लगे थे) और पक्ष दृश्य आंकड़ा 1b). तार का एक छोटा सा टुकड़ा धातु पट्टी के आसपास घाव था करने के लिए माउस के सामने incisors लंगर. रिबन के एक टुकड़े के लिए माउस के चारों ओर टाई मंच की प्रक्रिया के दौरान जगह में इसे रख करने के लिए संलग्न किया गया था.
चित्रा 2. यह इंजेक्शन के लिए Gavage सुई एक gavage सुई (दाएं) यह इंजेक्शन के लिए ~ ° 135 (बाएं) का एक कोण पर तुला हुआ था.
चित्रा 3. फेफड़ों कि यह इंजेक्शन बेसिलस anthracis व्यक्त GFP (Sterne-p6GFP) 5hrs पोस्ट चुनौती बंदरगाह में सभी CD11c + कोशिकाओं का प्रतिशत. ए जे चूहों 1x साथ चुनौती थे10 8 GFP-बेसिलस anthracis spores और फेफड़ों 5hrs पोस्ट संक्रमण पर विश्लेषण किया गया. डॉट भूखंडों CD11c का प्रतिशत दिखाने + फेफड़ों की कोशिकाओं है कि बेसिलस anthracis के लिए सकारात्मक रहे हैं.
चित्रा 4. फ्लोरोसेंट मोतियों के लिम्फ नोड्स के मैं. टी इंजेक्शन के बाद 24 घंटे draining फेफड़ों में जांच (पीले हरी / ). ए जे चूहों 10μg LPS (सही पैनल) और यह LDLNs 24hpi विश्लेषण किया गया के साथ या तो (बाएं पैनल) पीबीएस या 5x10 9 Fluoresbrite YG microspheres (0.5μm) दिए गए. प्रतिनिधि डॉट भूखंडों LDLNs कि बंदरगाह फ्लोरोसेंट मोती एक खाली चैनल के खिलाफ प्लॉट किए जाते हैं में CD11c हाय कोशिकाओं के प्रतिशत दिखा .
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Discussion
हम इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया है बेसिलस anthracis spores के फेफड़ों से LDLNs तस्करी अध्ययन. इसी तरह के अनुप्रयोगों के लिए, फेफड़ों के लिए दिया कणों की संख्या सावधानी से चुना जाना चाहिए ताकि इंजेक्शन सामग्री प्रवाह cytometry द्वारा LDLNs में पता लगाया जा सकता है. हम भी सफलतापूर्वक कोशिकाओं और विशिष्ट फेफड़ों सेल fluorescently लेबल एंटीबॉडी का उपयोग कर आबादी की लेबलिंग के दत्तक हस्तांतरण के लिए इस विधि का इस्तेमाल किया. इसके अलावा, इस पद्धति का नियमित 10 फेफड़ों में सीधे bleomycin (फुफ्फुसीय तंतुमयता के एक रासायनिक inducer) और साइटोकिन्स प्रशासन के लिए प्रयोग किया जाता है.
हालांकि इस पद्धति फेफड़ों में परीक्षण सामग्री की लगातार वितरण की अनुमति देता है, यह व्यापक प्रशिक्षण और मान्यता (फेफड़ों में डाई instilling द्वारा हासिल) की आवश्यकता है. इस विधि साँस लेना के अन्य मार्गों के रूप में एक ही शारीरिक प्रासंगिकता नहीं है क्योंकि यह ऊपरी श्वास पथ जहां महत्वपूर्ण बातचीत और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया शुरू हो सकता है शामिल नहीं हो सकता है. हालांकि, यह बेहतर है जहां व्याख्या सिर और गर्दन में क्षेत्रीय लिम्फ नोड्स और श्वसन पथ उपकला की उत्तेजना से प्रशासित एजेंट के तेज से जटिल हो सकता है है. सभी मॉडलों के साथ के रूप में, खुराक, प्रसव के लिए वाहन, इंजेक्शन सामग्री, श्वसन उपकला और संज्ञाहरण के प्रभाव को नुकसान का वितरण जैसे प्रयोगात्मक कारकों सभी जबकि प्रयोगों के डिजाइन पर विचार किया जाना चाहिए. यह टपकाना के लिए पारंपरिक प्रक्रियाओं की तुलना में, हम मानते हैं कि इस पद्धति में काफी श्वसन पथ उपकला नुकसान को कम कर देता है. बहरहाल, चोट के लिए उचित नियंत्रण समूहों खाते में इस्तेमाल किया जाना चाहिए नुकसान के बाद से टीका की साइट पर लिम्फ नोड्स 11 के लिए प्रतिजनों की डिलीवरी को प्रभावित हो सकता है. हम एक वाहन के रूप में खारा का उपयोग करने की सलाह देते हैं, लेकिन अगर परीक्षण सामग्री प्रभावशीलता के लिए विशिष्ट मीडिया की आवश्यकता है, वाहन नियंत्रण उपेक्षित नहीं किया जाना चाहिए. फेफड़ों की अलग lobes में इंजेक्ट कण सामग्री के वितरण में कुछ प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण पैरामीटर हो सकता है. ऐसे मामलों में, lobes के प्रत्येक को अलग से इसे तुरंत इंजेक्शन के बाद विश्लेषण किया जा सकता है. फेफड़ों की अलग lobes में सामग्री के वितरण टपकाना के मार्ग निम्नलिखित कोस्टा एट अल 12 के द्वारा वर्णित किया गया है .
हम draining है जो सबसे जंगली प्रकार में सुलभ हैं ऊपर वर्णित लिम्फ नोड्स पर हमारे विश्लेषण ध्यान केंद्रित करने और हमारी प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल चूहों के बाहर दस्तक उपभेदों. हालांकि, वहाँ अतिरिक्त draining है कि यह भी विश्लेषण किया जा सकता है वक्ष 13,14 क्षेत्र में लिम्फ नोड्स रहे हैं . यदि अधिक लिम्फ नोड्स एक प्रयोग के लिए वांछनीय है, हम प्रारंभिक पहचान फ्लोरोसेंट प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में मोती का आईपी इंजेक्शन का उपयोग की सलाह देते हैं. लिम्फ नोड्स है कि हम विश्लेषण के लिए सिफारिश दो इसलिए देखभाल निकासी के दौरान लिया जाना चाहिए thymus के करीब निकटता में हैं.
जैसा कि पहले उल्लेख किया है, इस विधि संक्रामक जीवों एलर्जी, या विषाक्त पदार्थों की एक किस्म फेफड़ों को बेनकाब करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. यह साँस लेना जोखिम के परंपरागत मार्गों के लिए एक सरल और सुसंगत विकल्प प्रदान करता है और ऊपरी श्वास पथ शामिल है. यह प्रयोगों घटनाओं है कि फेफड़ों और किसी भी अन्य साइट से पहले फेफड़ों से draining लिम्फ नोड्स में आरंभ पर ध्यान केंद्रित करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 70μm Cell stariner | BD Biosciences | ||
| Aniline Blue | Fisher Scientific | A967-25 | |
| Animal Feeding needle | Popper & Sons, Inc. | 7920 | |
| Collagenase | Sigma-Aldrich | C2139 | |
| Collagenase TypeIV | Worthington Biochemical | ||
| Collagenase D | Roche Group | 11088974103 | |
| DPBS | Invitrogen | 14190 | |
| Fluoresbrite YG Microspheres (0.5μm) | Polysciences, Inc. | 17152 | |
| HBSS without Calcium chloride and magnesium chloride | Invitrogen | 14170 | |
| Ketamine HCl (100mg/ml) | Hospira Inc. | ||
| Laryngoscope Blade | PennCentury, Inc | For Model LS-1 | Refer to www.penncentury.com |
| Lightweight Fiber Optic Laryngoscope | Welch Allyn | 80814 | |
| Red Fluorescent Beads (0.5μm) | Invitrogen | F8812 | For i.p injection |
| Xylazine (100mg/ml) | Lloyd, Inc. |
References
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