و<em> خارج الحي</em> بروتوكول ناضجة لتوليد خلايا الدم الحمراء من الجذعية المكونة للدم / أسلاف الموصوفة. بالإضافة إلى ذلك وصفنا فعال lentiviral التسليم طريقة لضربة قاضية في TAL1 عامل النسخ في الخلايا الأولية محمر. وأظهر كفاءة تسليم الفيروسة البطيئة بوساطة الجينات باستخدام الفيروسات GFP الإعراب.
تكون الكريات الحمر هو نظام نموذجي تستخدم عادة لدراسة تمايز الخلايا. أثناء تكون الكريات الحمر ، والكبار الإنسان المحفزة الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) تفرق في oligopotent الأسلاف ، والسلائف ملتزمة وخلايا الدم الحمراء الناضجة 1. وينظم هذه العملية جزءا كبيرا على مستوى الجينات ، حيث عوامل النسخ النسب المحددة تنشيط جينات معينة في حين تقمع متزامنة الجينات التي هي محددة لأنواع الخلايا الأخرى 2. وكثيرا ما تتم الدراسات على عوامل النسخ التي تنظم تكون الكريات الحمر باستخدام خطوط الخلايا البشرية والفئران التي تمثل ، إلى حد ما ، والخلايا الحمر في مراحل معينة من التمايز 3-5. يمكن تحويل خطوط الخلية ولكن جزئيا فقط تحاكي الخلايا محمر والأهم من ذلك أنها لا تسمح لأحد لدراسة مفهومة التغيرات الدينامية التي تحدث مع تقدم الخلايا من خلال عدة مراحل من أجل مصيرهم محمر النهائي. ولذلك ، فإن التحدي الحالي لا يزال في وضع بروتوكول للحصول على السكان متجانسة نسبيا من الخلايا الأولية وHSCs محمر في مراحل مختلفة من التمايز في الكميات التي تكفي لإجراء التجارب والجينوميات البروتيوميات.
نحن هنا وصف خلية فيفو السابقين بروتوكول للحث على تمايز الثقافة محمر من الخلايا الجذعية البشرية / السلف للدم التي تم عزلها من دم الحبل السري سواء ، ونخاع العظام أو الدم المحيطي الكبار حشدت مع G – CSF (leukapheresis). ثقافة هذا النظام ، وضعت في البداية من قبل المختبر Douay 6 ، يستخدم السيتوكينات وشارك الثقافة على خلايا اللحمة المتوسطة لتقليد المكروية نخاع العظام. باستخدام هذا التمايز فيفو السابقين البروتوكول ، أن نلاحظ التضخيم قوية من أسلاف محمر ، وتحريض تمايز حصرا نحو النسب محمر والنضج الكامل إلى مرحلة منزوعة النواة خلايا الدم الحمراء. وبالتالي ، فإن هذا النظام يوفر فرصة لدراسة الآلية الجزيئية لتنظيم النسخي كما تقدم الخلايا الجذعية المكونة للدم على طول نسب محمر.
دراسة تكون الكريات الحمر على الصعيد الترانسكربتي يتطلب أيضا القدرة على عوامل محددة الإفراط في التعبير عن ضربة قاضية أو محمر في الخلايا الأولية. لهذا الغرض ، ونحن نستخدم تسليم الجين الفيروسة البطيئة بوساطة نظام يسمح لكفاءة كل من العدوى وعدم تقسيم تقسيم خلايا 7. هنا نظهر أننا قادرون على ضربة قاضية بكفاءة TAL1 عامل النسخ في الخلايا الأولية محمر الإنسان. بالإضافة إلى ذلك ، GFP التعبير يدل على كفاءة عدوى lentiviral ما يقرب من 90 ٪. وهكذا ، لدينا بروتوكول يوفر نظام مفيدا للغاية لتوصيف الشبكة التنظيمية للعوامل النسخ التي تكون الكريات الحمر السيطرة.
وقد تم استخدام عدد من الأساليب للتمييز من قبل الخلايا الحمر في الثقافة بدرجات متفاوتة من النجاح. على سبيل المثال ، بعض البروتوكولات بدون ثقافة مشتركة على MS – 5 يتيح التوسع في الخلايا محمر ولكن ليست فعالة في انتاج ناضجة تماما منزوعة النواة خلايا الدم الحمراء 12-17. ?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر L. Douay ومولودية Giarratana (جامعة باريس السادسة ، فرنسا) للحصول على المشورة بشأن المفاضلة المجراة سابقا محمر ، D. ألان واتكينز H. (OHRI ، كندا) لتوفير عينات الدم (التي تم الحصول عليها تحت مستشفى أوتاوا مجلس أخلاقيات البحث # 2007804 – 01H) ، D. Trono (ايكول بوليتكنيك دي الاتحادية لوزان) لتوفير ناقلات lentiviral وFJ Dilworth (OHRI ، كندا) لقراءة نقدية للمخطوطة. وقد تم تمويل هذا المشروع من خلال منحة CIHR (MOP – 82813) لMBCGP هي المستفيدة من صندوق البحوث أونتاريو الحاسوبية زمالة التدريب Regulomics بعد الدكتوراة. MB يحمل كرسي أبحاث كندا في تنظيم التعبير الجيني.