Bir<em> Ex vivo</em> Protokolü açıklanan hematopoietik kök / atalarıdır olgun insan kırmızı kan hücreleri oluşturmak için. Ayrıca biz demonte transkripsiyon faktörü TAL1 birincil eritroid hücrelerde etkili bir lentiviral teslim yöntemi açıklanmaktadır. Lentivirüs aracılı gen teslim verimliliği GFP ifade virüsler kullanılarak gösterilmiştir.
Eritropoiesis hücre farklılaşması incelemek için yaygın olarak kullanılan bir model sistem. Eritropoezi sırasında, pluripotent yetişkin insan hematopoietik kök hücreleri (HKH'lerin) oligopotent progenitörlerle taahhüt öncüleri ve olgun kırmızı kan hücreleri 1 farklılaşırlar. Bu süreç, eş zamanlı olarak, diğer hücre türleri 2 için belirli genlerin bastırma soy belirli genlerin spesifik transkripsiyon faktörleri aktive sayede gen ekspresyonu, düzeyinde büyük bir kısmı için düzenlenir. Eritropoez düzenleyen transkripsiyon faktörleri ile ilgili çalışmalar genellikle farklılaşma 3-5 aşamada, bir dereceye kadar, eritroid hücreler temsil insan ve fare hücre hatları kullanılarak yapılmaktadır. Ancak dönüştürülmüş hücre hatları eritroid hücreler sadece kısmen taklit edebilir ve en önemlisi de bir anlaşılır son eritroid kaderi karşı birçok aşamalardan geçerek hücreler ilerleme olarak ortaya çıkan dinamik değişiklikleri incelemek için izin vermez. Bu nedenle, güncel bir sorun genomik ve proteomik deneyler gerçekleştirmek için yeterli miktarda farklılaşma çeşitli aşamalarında birincil HKH'lerin ve eritroid hücrelerin nispeten homojen nüfus elde etmek için bir protokol gelişme kalır.
Burada, kordon kanı, kemik iliği, veya G-CSF (leukapheresis) ile mobilize yetişkin periferik kan ya da izole edilmiştir insan hematopoietik kök / progenitör hücrelerin eritroid farklılaşma ikna etmek için bir ex vivo hücre kültürü protokolü açıklar . Başlangıçta Douay Laboratuvar 6 tarafından geliştirilen bu kültür sistemi, kemik iliği mikroçevresinin taklit etmek, mezenkimal hücreler sitokinler ve co-kültür kullanır . Bu ex vivo farklılaşması protokolü kullanarak, güçlü bir amplifikasyon eritroid progenitörlerle özel eritroid soy ve enükleasyon kırmızı kan hücrelerinin sahne için tam bir olgunlaşma yolunda farklılaşma bir indüksiyon gözlemliyoruz. Böylece, bu sistem eritroid soy boyunca hematopoietik kök hücre ilerleme olarak transkripsiyonel yönetmelik moleküler mekanizmayı incelemek için bir fırsat sağlar.
Transkripsiyonel düzeyde eritropoezi incelenmesi aynı zamanda birincil eritroid hücrelerde aşırı açık veya demonte özgü faktörler yeteneği gerektirir. Bu amaçla, bölme ve bölünen hücreleri 7 hem de verimli bir enfeksiyon için izin veren bir lentivirüs-aracılı gen dağıtım sistemi kullanır . Burada biz verimli birincil insan eritroid hücrelerde transkripsiyon faktörü TAL1 demonte mümkün olduğunu göstermektedir. Buna ek olarak, GFP ifade lentiviral enfeksiyon% 90 yakın bir verimlilik göstermektedir. Böylece, protokolü düzenleyici transkripsiyon faktörleri ağ kontrol eritropoezi karakterizasyonu için oldukça yararlı bir sistem sağlar.
Yöntemler bir dizi değişken derecelerde başarı ile kültür eritroid hücrelerin ayırt etmek için daha önce kullanılmıştır. Örneğin, MS-5 ko-kültür olmadan bazı protokolleri eritroid hücrelerin genişlemesi sağlar, ancak 12-17 tam olgun enükleasyon kırmızı kan hücrelerinin üretiminde etkili değildir . Diğer yöntemlerle verimli enükleasyon izin verirken, proliferasyon 18,19 pahasına. Başlangıçta Douay laboratuvar 6 tarafından geliştirilen, burada kullan?…
The authors have nothing to disclose.
Biz kan örnekleri (Ottowa Hastanesi Araştırma Etik Kurulu altında elde edilen sağlamak için ex vivo eritroid farklılaşma, D. Allan ve H. Atkins (Ohri, Kanada) tavsiye L. Douay ve MC Giarratana (Université Paris VI, Fransa) teşekkür # 2007804-01H), D. Trono (Ecole Polytechnique Federale de Lausanne) eleştirel bir yazının okunması için lentiviral vektörler ve FJ Dilworth (Ohri, Kanada) sağlamak için. Bu proje MBCGP bir CIHR hibe (MOP-82.813) tarafından finanse edildi Ontario Araştırma Fonu Hesaplamalı Regulomics Eğitim Doktora Sonrası Araştırma Bursu bir alıcı. MB, Kanada Araştırma Başkanı Gen İfadesi Yönetmeliği tutar.