Забор крови для биохимического анализа у взрослых данио рерио
Summary
Эта статья представляет собой технику для сбора крови из спинной аорты данио рерио. Он также содержит инструкции для получения сыворотки для использования в биохимических анализов, таких как тесты для определения уровня холестерина и триглицеридов.
Abstract
Данио был использован в качестве животной модели для изучения нескольких заболеваний человека. Это может служить мощным доклинических платформы для изучения молекулярных событий и терапевтических стратегий, а также для оценки физиологических механизмов некоторых патологий 1.
Есть относительно небольшое число публикаций, связанных с физиологией взрослые данио органов и систем 2, что может привести исследователей к выводу, что основные приемы необходимы, чтобы исследование системы данио не хватает 3. Гематологические биохимических показателей данио были впервые опубликованы в 2003 году Мурта и его коллеги 4, которые использовали метод сбора крови впервые описал Jagadeeswaran и его коллеги в 1999 году. Короче говоря, кровь была собрана с помощью пипетки кончик через боковой разрез, примерно 0,3 см в длину, в области спинной аорты 5. В связи с минуту размеры участие, этоявляется высокоточной техники требует высококвалифицированного врача. Та же самая техника была использована та же группа в другой публикации в том же году 6. В 2010 году Эймс и его коллеги оценивали все уровни глюкозы в крови у данио 7. Они получили доступ к крови, выполняя обезглавливания с ножницами, а затем вставить гепаринизированной микрокапиллярных трубы коллекции в грудной артикуляции. Они отмечают трудности с гемолизом, которые были решены с соответствующей температуры хранения на основе работы Килпатрик и соавт. 8. При попытке использовать метод Jagadeeswaran в нашей лаборатории, мы обнаружили, что это было трудно сделать разрез в точно в нужное место, как не допустить значительного количества крови к потере до сбора может быть запущен.
В последнее время Гупта и др. 9. Описал, как анализировать взрослого органов данио, небольшой изгиб и др. 10. Описано, как выполнять intraperitonEAL инъекций, и Пугач и др. 11. описано, как выполнить ретро-орбитальной инъекций. Тем не менее, многое еще предстоит сделать, чтобы более полно изучить основные методы исследования в данио.
Небольшой размер данио создает проблемы для исследователей, используя его в качестве экспериментальной модели. Кроме того, учитывая эту малость масштаба, важно, что простые методы разработаны, чтобы позволить исследователям изучить преимущества данио модели.
Protocol
Discussion
Эта статья представляет собой простой способ, который позволяет еще больше крови и сыворотки анализ рыбок данио экспериментов. Эта технология имеет потенциал внести свой вклад в будущее данио гематологические исследования требуют данных параметров крови. Необходимо также обеспечит?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
FIPE / HCPA – Fundo де Incentivo Pesquisa электронной Eventos
CAPES – Coordenação-де-де Aperfeiçoamento Pessoal де Nivel улучшенный
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Low retention tips | Applied Biosystems | 022493020 | |
| Eppendorf Centrifuge 5415D | Eppendorf | Discontinued |
References
- Schneider, A. C. R., dos Santo, J. L., Porawski, M., Schaefer, P. G., Maurer, R. L., Matte, U., da Silveira, T. R. Implementação de um novo modelo de experimentação animal Zebrafish. Rev. HCPA. 29, 100-103 (2009).
- Briggs, J. P. The zebrafish: a new model organism for integrative physiology. Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 282, 3-9 (2002).
- Menke, A. L., Sptsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P. M., Woutersen, R. A. Normal anatomy and histology of adult Zebrafish. Toxicologic Pathology. 000, 1-16 (2011).
- Murtha, J. M., Qi, W., Keller, E. T. Hematologic and serum biochemical values for Zebrafish. Comp. Med. 53, 37-41 (2003).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P., Craig, F. E., Troyer, D. Identification and characterization of zebrafish thrombocytes. Br. J. Haematol. 107, 731-738 (1999).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. Analysis of blood coagulation in the zebrafish. Blood Cells Mol. Dis. 25, 239-249 (1999).
- Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E., Kinkel, M. D. Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis. Zebrafish. 7, 205-213 (2010).
- Kilpatrick, E. S., Rumley, A. G., Rumley, C. N. The effect of haemolysis on blood glucose meter measurement. Diabet. Med. 12, 341-343 (1995).
- Gupta, T., Mullins, M. C. Dissection of Organs from the Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).
- Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (42), e2126 (2010).
- Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (34), e1645 (2009).
