Extracción de sangre para análisis bioquímicos en adultos de pez cebra

Summary

Este trabajo presenta una técnica para la recolección de sangre de la aorta dorsal del pez cebra. También proporciona instrucciones para la obtención de suero para uso en los análisis bioquímicos, tales como ensayos para determinar los niveles de colesterol y triglicéridos.

Abstract

El pez cebra se ha utilizado como un modelo animal para estudios de varias enfermedades humanas. Puede servir como una plataforma preclínica potente para los estudios de sucesos moleculares y estrategias terapéuticas, así como para evaluar los mecanismos fisiológicos de unos ¹ patologías.

Hay relativamente pocas las publicaciones relacionadas con la fisiología del pez cebra adulto de órganos y sistemas ^2, que pueden conducir a los investigadores a deducir que las técnicas básicas necesarias para permitir la exploración de los sistemas de pez cebra faltan ^3. Hematológicas valores bioquímicos de pez cebra fueron por primera vez en 2003 por Murtha y ⁴ colegas que empleó una técnica de recogida de sangre descrita por primera vez por Jagadeeswaran y sus colegas en 1999. Brevemente, se recogió sangre a través de una punta de la micropipeta a través de una incisión lateral, aproximadamente 0,3 cm de longitud, en la región de la aorta dorsal ^5. Debido a las dimensiones implicadas minuto, estoEs una técnica de alta precisión que requiere un practicante altamente cualificado. La misma técnica fue utilizada por el mismo grupo en otra publicación en ese mismo año ^6. En 2010, Eames y sus colegas evaluaron los niveles de glucosa en la sangre enteros en el pez cebra ^7. Se tuvo acceso a la sangre mediante la realización de las decapitaciones con unas tijeras y luego insertar un tubo de recogida heparinizado microcapilar en la articulación pectoral. Ellos aluden a la dificultad con la hemólisis que se resolvieron con una temperatura de almacenamiento adecuada basada en el trabajo Kilpatrick et al. ^8. Al intentar usar la técnica Jagadeeswaran en nuestro laboratorio, se encontró que era difícil hacer la incisión en el lugar correcto, precisamente como no permitir que una cantidad significativa de sangre que se pierde antes de la recolección se pudo iniciar.

Recientemente, Gupta et al. ⁹ se describe la forma de diseccionar los órganos adultos de pez cebra, la Kinkle et al. ¹⁰ se describe cómo llevar a cabo intraperitoninyecciones de EAL, y Pugach et al ¹¹ se describe cómo realizar las inyecciones retro-orbital. Sin embargo, se necesita más trabajo para explorar más a fondo las técnicas básicas para la investigación en el pez cebra.

El pequeño tamaño del pez cebra presenta desafíos para los investigadores que lo utilizan como un modelo experimental. Además, dada esta pequeñez de la escala, es importante que las técnicas simples se han desarrollado para permitir a los investigadores a explorar las ventajas del modelo de pez cebra.

Protocol

1. Protocolo de Texto Antes de la recogida de sangre de pez cebra, es necesario para preparar el agua anestésico. Verter ~ 200 ml de agua del acuario en un recipiente con una capacidad de 500-ml. Añadir ~ 200 g de trozos de hielo. La temperatura debe ser de aproximadamente 4 ° C. Como los trozos de hielo se derriten, será necesario añadir más cubos de hielo para mantener una temperatura constante de alrededor de 4 ° C. Cuando el agua anestésico está listo, preparar los materiales necesarios…

Discussion

Este trabajo presenta una técnica sencilla que permite a más análisis de sangre y suero en experimentos de pez cebra. Esta técnica tiene el potencial de contribuir a los estudios futuros de pez cebra hematológicas que requieren los datos de los parámetros sanguíneos. También debería permitir mayores aplicaciones del pez cebra como un modelo experimental.

Esta técnica no requiere habilidades especiales o la aplicación de una técnica precisa. Además, se permite hasta el doble de l…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Low retention tips	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrifuge 5415D	Eppendorf	Discontinued