מתואר כאן היא טכניקה שבה lipopolysaccharide מוזרקת לתוך בלוטת החלב המניק באמצעות עכבר הפטמה כדי לדמות דלקת בשד, מצב שנגרם בדרך כלל על ידי זיהום חיידקים. תוצאות הזרקה בLipopolysaccharide מוגברת גרעינית גורם kappa B (NF-κB) איתות, מדמיינים באמצעות הדמית bioluminescent של עכבר כתב לוציפראז NF-κB.
מודלים בבעלי חיים למחלות אנושיות הם הכרחיים על מנת ללמוד בקפדנות שלבי התקדמות מחלה ומנגנונים נלווים, וסופו של דבר, כמודלים טרום קליניים כדי לבדוק התערבויות. בשיטות אלה, אנו מתארים טכניקה שבה lipopolysaccharide (LPS) מוזרקת לתוך בלוטת החלב המניק עכבר דרך הפטמה, ביעילות הדלקת בשד דוגמנות, או דלקת, של הבלוטה. תוצאות זיהום זה מדומה במוגבר גרעינית גורם kappa B (NF-κB) איתות, ראו בעיני רווחו באמצעות הדמית bioluminescent של עכבר כתב לוציפראז NF-κB 1.
המטרה שלנו בפיתוח שיטות אלה הייתה ללמוד הדלקת קשורה בדלקת בשד בבלוטת המניקות, אשר לעתים קרובות כוללת אדמומיות, נפיחות, וחדירה לתא חיסונית 2,3. לכן, היינו מודעים היטב לכך שחתך, או כל סוג של פציעה של העור, הפטמה, או בלוטה כדי להציג את יכל LPSלא להיות מנוצל בשיטות שלנו מאז שהגישה הזאת עשויה לבלבל את הקריאה מתוך של דלקת. אנחנו גם רצויים שיטה ישר קדימה, שלא הצריך pipettes נעשה במיוחד מצויר ביד או על השימוש בmicromanipulators להחזיק כלים מיוחדים האלה במקום. לפיכך, אנו נחושים להשתמש במזרק אינסולין זמין מסחרי ולהזריק לתוך סוכן צינור החלב של פטמה ללא פגע. שיטה זו הייתה מוצלחת ואפשרה לנו ללמוד הדלקת קשורה בהזרקת LPS ללא תופעות נוספות מעולפות על ידי התהליך של הזרקה. בנוסף, שיטה זו מנוצלת גם NF-κB לוציפראז כתב מהונדס עכבר וטכנולוגיית הדמית bioluminescent חזותי וכמותית להראות גדל NF-κB איתות בתוך הבלוטה LPS-4 המוזרקת.
שיטות אלה הן עניין לחוקרים מתחומים רבים המבקשים למחלת מודל בתוך בלוטת חלב מניקות, כסופו של דבר, הטכניקהמתואר כאן יכול להיות מנוצל עבור זריקה של מספר החומרים, ואינו מוגבל לLPS בלבד.
כאן אנו מנצלים עכבר מהונדס NF-κB כתב וטכניקת הזרקה מותאמת לדלקת בשד מודל, דלקת ברקמת השד נגרמת לרוב על ידי זיהום חיידקים. השלב הקריטי ביותר בהליך זה הוא הזרקת intraductal עצמו.
בפועל, זה בדרך כלל ברור אם הזרקת intraductal הייתה מוצלחת. ההזרקה ש?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו מומנה על ידי מענק NIH CA113734 הוענק לF Yull והמחלקה לענייני יוצאי הצבא (TS לקוול).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Lipopolysaccharide from Escherichia coli (LPS) |
Sigma | L 2880 | serotype 055:B5 |
PBS | Mediatech, Inc. | 46-013-CM | |
31 Gauge insulin syringe | Becton Dickinson | 328438 | Short needle |
Forceps | World Precision Instruments | 15908 | |
Dissecting scope | Leica | M3Z | |
Terrell Isoflurane, USP | MINRAD INC. for Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
IVIS 200 imaging system | Caliper (formerly Xenogen) | N/A | |
Syringe for luciferin injection | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5/8 |
D-Luciferin Firefly, sodium salt monohydrate (Luciferin substrate) |
Biosynth Chemistry and Biology | L-8240 | Dilute to 10 mg/ml |