A continuación se describe una técnica en la que lipopolisacárido se inyecta en la glándula mamaria lactante ratón mediante la boquilla para simular la mastitis, una condición comúnmente causada por una infección bacteriana. Resultados lipopolisacárido de inyección en el aumento del factor nuclear kappa B (NF-kB) de señalización, visualizado a través de imágenes bioluminiscentes de un ratón reportero luciferasa NF-kB.
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Artículo de método
Inyección intraductal de LPS como un modelo de ratón de Mastitis: Señalización Visualizada a través de un transgénico NF-kB Reportero
En este artículo
Resumen
Resumen
Los modelos animales de enfermedad humana son necesarios con el fin de estudiar rigurosamente las etapas de progresión de la enfermedad y los mecanismos asociados, y en última instancia, como modelos pre-clínicos para probar intervenciones. En estos métodos, se describe una técnica en la que el lipopolisacárido (LPS) se inyecta en la glándula mamaria lactante ratón a través del pezón, mastitis efectivamente modelado, o la inflamación, de la glándula. Esto resulta en un aumento de infección simulada del factor nuclear kappa B (NF-kB) de señalización, como se visualiza a través de formación de imágenes bioluminiscentes de un ratón reportero NF-kB de luciferasa 1.
Nuestro último objetivo en el desarrollo de estos métodos fue estudiar la inflamación asociada con la mastitis en la glándula lactantes, que a menudo incluye enrojecimiento, hinchazón, y la infiltración de células inmunes 2,3. Por lo tanto, hemos sido muy conscientes de que la incisión o cualquier tipo de heridas de la piel, el pezón o la glándula con el fin de introducir los LPS podríano ser utilizada en nuestros métodos desde el enfoque probablemente confundir la lectura de salida de la inflamación. También se desea un método straight-forward que no requería especialmente hechos a mano de pipetas o el uso de micromanipuladores para sostener estas herramientas especializadas en su lugar. Por lo tanto, se determinó que usar una jeringa de insulina comercialmente disponible y para inyectar el agente en el conducto mamario de un pezón intacto. Este método fue exitoso y nos permitió estudiar la inflamación asociada con la inyección de LPS, sin efectos adicionales superpuestos por el proceso de inyección. Además, este método también se utiliza un NF-kappa B luciferasa de ratones transgénicos y la tecnología bioluminiscente de imágenes para mostrar visualmente y cuantitativamente aumentado NF-kB de señalización dentro de la glándula inyectadas con LPS 4.
Estos métodos son de interés para los investigadores de muchas disciplinas que deseen modelo de enfermedad en la glándula mamaria, en última instancia, la técnicadescrito aquí podría ser utilizado para la inyección de un número de sustancias, y no se limita a LPS solamente.
Protocolo
Todos los experimentos con animales fueron aprobadas por el Cuidado de Animales institucional la Universidad de Vanderbilt y el empleo.
1. Preparación de ratones transgénicos
- Los ratones hembra, positivos para el transgén reportero NGL (N F-kappa B-G FP-L uciferase) (descrito anteriormente 1) se utilizan para este procedimiento. Cuando las hembras son por lo menos de 6 semanas de edad, los aparearse con un macho de tipo salvaje FVB. Harem reproducción pueden ser utilizados (hasta 4 hembras en una jaula con 1 macho). (Nota: ratones FVB cepa se utilizaron para el estudio actual más osc....
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Discusión
Aquí utilizamos un transgénico NF-kB ratón periodista y una técnica de inyección optimizado para mastitis modelo, la inflamación del tejido mamario más comúnmente causada por una infección bacteriana. El paso más crítico en este procedimiento es la inyección intraductal sí mismo.
En la práctica, por lo general es evidente si la inyección intraductal ha tenido éxito. La inyección de los agentes (LPS o PBS) debe sentirse fluido y no debería haber poca o ninguna resistencia como la jeringa se v.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por el NIH subvención CA113734 adjudicado a F Yull y el Departamento de Asuntos de Veteranos (TS Blackwell).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Lipopolisacárido de Escherichia coli (LPS) | Sigma | L 2880 | serotipo 055: B5 |
| PBS | Mediatech, Inc. | 46-013 CM- | |
| 31 Gauge jeringa de insulina | Becton Dickinson | 328438 | Aguja corta |
| Fórceps | World Precision Instruments | 15908 | |
| Disección de alcance | Leica | M3Z | |
| Terrell Isoflurano, USP | MINRAD INC para Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| IVIS 200 imágenes de sistema | Caliper (antes Xenogen) | N / A | |
| Jeringa para inyección luciferina | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5 / 8 |
| D-luciferina Firefly, monohidrato de sal de sodio (Sustrato de luciferina) | Biosynth Química y Biología | L-8240 | Diluir a 10 mg / ml |
Referencias
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E.
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Reimpresiones y permisos
