Summary
फ्रीज सुखाने अक्सर व्यवहार्य बैक्टीरियल कोशिकाओं की सूखी उत्पादों को प्राप्त करने के लिए एक आसान और सुविधाजनक तरीका है. इस प्रक्रिया का एक मुद्दा सेल अस्तित्व है. यहाँ हम विस्तार फ्रीज सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व इस्तेमाल किया सूत्रीकरण के गुणों से प्रभावित है कैसे की जांच के लिए एक प्रक्रिया है.
Abstract
सेलुलर पानी reversibly भंडारण की सुविधा के लिए सूक्ष्म जीवाणुओं को निष्क्रिय करने के लिए हटाया जा सकता है. हटाने की एक ऐसी विधि एक सज्जन निर्जलीकरण विधि माना जाता है जो फ्रीज सुखाने, है. सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व की सुविधा के लिए, कोशिकाओं अक्सर पहले से तैयार कर रहे हैं. निर्माण कोशिकाओं embeds और ठंड और सुखाने के दौरान कोशिकाओं पर लगाए गए विभिन्न हानिकारक तनाव से बचाता है कि एक मैट्रिक्स रूपों. हम यहाँ फ्रीज सुखाने के बाद कोशिकाओं के जीवित रहने की दर मूल्यांकन करने के लिए एक सामान्य तरीका मौजूद है और हम चार विभिन्न योगों के साथ प्राप्त परिणामों की तुलना द्वारा इसे उदाहरण देकर स्पष्ट करना: disaccharide सूक्रोज, बहुलक Ficoll PM400 व्युत्पन्न सूक्रोज, और संबंधित पॉलीसैकराइड hydroxyethyl सेलूलोज़ (एचईसी बैक्टीरिया के दो उपभेदों, पी. पर) और Hydroxypropyl मिथाइल सेलूलोज (HPMC), putida KT2440 और ए chlorophenolicus ए 6. इस काम में हम फ्रीज सुखाने के लिए योगों तैयार करने के लिए कैसे और mechan जांच करने के लिए वर्णन कैसेअंतर स्कैनिंग उष्मामिति (डीएससी), सतह तनाव माप, एक्स - रे विश्लेषण, और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर और जीवित रहने की दरों के लिए उन डेटा संबंधित निर्माण निस्र्पक द्वारा पुनर्जलीकरण के बाद सेल अस्तित्व का वाद. पॉलिमर एक डिग्री बदलती करने के लिए संबंधित पॉलीसैक्राइड जैसी सुक्रोज के एक मोनोमेरिक संरचना पाने के लिए चुने गए हैं. इस विधि का उपयोग कर सेटअप हम तैयार करने के कुछ भौतिक गुणों 1 नियंत्रित कर रहे हैं अगर पॉलिमर डिसैक्राइड के रूप में के रूप में प्रभावी रूप से सेल अस्तित्व का समर्थन कर सकते हैं दिखाया.
Protocol
1. पी. की खेती और फसल putida
- पी. की एक कॉलोनी के साथ tryptic सोया शोरबा के 100 मिलीलीटर (टीएसबी) inoculating द्वारा स्यूडोमोनास putida की एक स्टार्टर संस्कृति तैयार putida कोशिकाओं tryptic सोया शोरबा (टीएसए) के साथ पूरक अगर पर सुसंस्कृत. 130 rpm पर सेट एक मिलाते हुए बोर्ड पर 30 डिग्री सेल्सियस पर संस्कृति रखें.
- 7 घंटा ताजा टीएसबी माध्यम के लिए स्टार्टर संस्कृति समकक्ष से मुख्य संस्कृति के अंतिम मात्रा का 1/10 के लिए एक विभाज्य हस्तांतरण के बाद. 16 घंटे के लिए 130 rpm पर एक मिलाते हुए बोर्ड पर 30 डिग्री सेल्सियस पर कोशिकाओं रखें.
- विकास के 16 घंटे के बाद कोशिकाओं आरटी पर 20 मिनट के लिए 1500 XG पर सेल संस्कृति कताई द्वारा काटा जाता है. तैरनेवाला छानना और गोली मध्यम विकास के लिए isotonic है कि एक NaCl समाधान में है सेल फिर से निलंबित द्वारा कोशिकाओं धो लो. इस मामले में एक 150 मिमी NaCl समाधान इस्तेमाल किया गया था. , कोशिकाओं तो एक बार फिर centrifuged हैं और सतह पर तैरनेवाला तैयार मध्यम में कोशिकाओं resuspending पहले निथर जाता है3.2 कदम देखें.
2. अन्य प्रजातियों की खेती
- अन्य प्रजातियों के जीवाणु के लिए प्रोटोकॉल का अनुकूलन करने के लिए खेती और फसल प्रक्रियाओं कि प्रजातियों की जरूरतों के हिसाब से बदला जाना चाहिए. फसल और वाशिंग कदम (एस) के दौरान कोशिकाओं से निपटने जब आसमाटिक सदमे से बचने के लिए, समाधान की परासरणीयता फसल पर मध्यम विकास के उस मैच की जरूरत है.
3. कोशिकाओं के निर्माण
- संबंधित मैट्रिक्स घटकों बाहर वजन द्वारा तैयार समाधान तैयार है और उन्हें पानी में भंग. Isotonic शर्तों को प्राप्त करने के लिए, या तो excipient की राशि को समायोजित या वांछित परासरणीयता तक पहुँचने के लिए NaCl या कुछ अन्य सेल संगत घुला हुआ जोड़ें. ऐसे डिसैक्राइड के रूप में कम आणविक भार के साथ पदार्थों के लिए मात्रा में आसानी से isotonic की स्थिति तक पहुँचने के लिए समायोजित किया जा सकता है. उच्च आणविक वजन के हैं कि पॉलिमर जैसे पदार्थों के लिए, सुर, शक्तिप्रदता तो संगत सेल के साथ समायोजित किया जाना हैतम्बूरे, जैसे NaCl या डिसैक्राइड. एक पदार्थ के किसी भी इसके बदले में फ्रीज सुखाने व्यवहार और सेल अस्तित्व को प्रभावित कर सकता है, जो निर्माण के भौतिक गुणों, को प्रभावित करती है कि ध्यान दें.
- धोने के समाधान (इस मामले NaCl में) छानना और संबंधित निर्माण मीडिया में कोशिकाओं को फिर से निलंबित.
- कोशिकाओं को एक ही ढंग से बिखरे हैं कि सुनिश्चित करें. उच्च viscosities के योगों का उपयोग कर मिलाया जाता है जबकि कम चिपचिपापन के योगों, उदा., एक हलचल पट्टी को जोड़ने और मिश्रण सजातीय हासिल की है जब तक कंटेनर झटकों से vortexed रहे हैं.
- फ्रीज सुखाने की शीशियों में योगों फूट डालो. शीशियों से पहले और फ्रीज सुखाने के दौरान हटा पानी की मात्रा की गणना करने के लिए फ्रीज सुखाने के बाद नमूने के साथ, खाली तौला जाना चाहिए.
- शीशियों फ्रीज ड्रायर अंदर सील किया जा रहे हैं अगर शीशियों को रबड़ stoppers जोड़ें, 4.3 कदम देखें.
- फ्रीज सुखाने से पहले प्रत्येक निर्माण में कक्षों की गणना करें, चरण 6 देखें. </ राजभाषा>
- फ्रीज सुखाने की स्थिति तैयार करने के भौतिक गुणों को समायोजित किया जाना है. सबसे महत्वपूर्ण पैरामीटर इस मामले में ग्लास संक्रमण के तापमान, टीजी, तैयार की, कि पानी अभी भी मौजूद है इंगित करने के लिए फ्रीज केंद्रित नमूना के लिए टीजी 'चिह्नित है. फ्रीज केंद्रित तैयार करने की टीजी 'आसानी से अंतर स्कैनिंग उष्मामिति (डीएससी) का उपयोग कर मापा जाता है, चरण 7 देखें.
- फ्रीज सुखाने की प्रक्रिया के मापदंडों को समायोजित करें ताकि नमूना का तापमान नमूना के टीजी नीचे और कहा कि हमेशा होता है कि चैम्बर दबाव यानी माध्यमिक, निर्माण में एक बर्फ के तेजी से उच्च बनाने की क्रिया, यानी प्राथमिक सुखाने, और अवशिष्ट पानी के लिए अनुमति देता है सुखाने. नमूना तापमान सुखाने की प्रक्रिया के दौरान 'ऊपर टीजी है तो काफी सेलुलर अस्तित्व कम हो सकती है जो नमूना के संरचनात्मक पतन का एक बड़ा खतरा है.
- च के बाद सूखी उत्पादों की सुरक्षा के लिएreeze सुखाने नमूना वातावरण नियंत्रित किया जाना है. यदि संभव हो तो वैक्यूम फ्रीज सुखाने चक्र के अंत में जारी करने से पहले, फ्रीज ड्रायर में नमूने सील. वैकल्पिक रूप से शीशियों एक पसंदीदा वातावरण से भरा जा सकता है. यह भंडारण वातावरण में किसी भी नमी या ऑक्सीजन उपहार के रूप में परिवेश की स्थिति के लिए नमूनों को प्रकाश में लाने से बचने के लिए महत्वपूर्ण है कोशिकाओं के अस्तित्व को प्रभावित करती है.
- शीशियों वजन.
- विआयनीकृत और बाँझ पानी के नमूने rehydrate. जोड़े जाने के लिए पानी की मात्रा फ्रीज सुखाने के दौरान हटा दिया और खाली शीशी, फ्रीज सुखाने से पहले और बाद में नमूने के साथ ही शीशी के वजन से गणना की है राशि के रूप में है कि एक ही होना चाहिए. भंवर नमूने अब और फिर तो समाधान समरूप दिखाई देते हैं जब तक.
- प्रत्येक नमूने से 100 μl ड्रा और 10 गुना धारावाहिक dilutions. क ¥ के dilutions सेबाकी के 100 μl टीएसए-प्लेटों पर चढ़ाया जाता है. प्लेटें आवश्यक तापमान और समय पर incubated हैं.
- एक छोटी राशि, 5 लो - 10 मिलीग्राम, नमूना के और ढक्कन के साथ एक DSC-एल्यूमीनियम पैन में रखें. एक संदर्भ के रूप में एक खाली पैन तैयार.
- डीएससी तापमान स्कैन कार्यक्रम निर्धारित करें. ठंडा कार्यक्रम फ्रीज सुखाने कार्यक्रम में ठंड कदम नकल करने के लिए निर्धारित है. ठंडा कैनेटीक्स हाइड्रेटेड योगों का टीजी 'प्रभावित कर सकते हैं के रूप में यह किया जाता है. हीटिंग स्कैन करने के लिए अच्छी तरह से सामान्य रूप से जांच की योगों की उम्मीद टीजी ', -100 डिग्री सेल्सियस नीचे के तापमान को नीचे लाने के शुरू होने से पहले
- 40 डिग्री सेल्सियस / मिनट प्रयोग किया जाता है - एक उपयुक्त हीटिंग दर, 5 की सामान्य रूप से एक हीटिंग दर चुनें. दर्ज गर्मी प्रवाह संकेत वाट में व्यक्त किया है और हीटिंग दर से प्रभावित हो जाएगा. एक उच्च हीटिंग दर टीजी 'का एक बड़ा संकेत दे देंगे.
- तापमान रेंज सेट इतना है कि मैंटी टीजी 'और निर्माण के पिघलने दोनों को शामिल किया गया.
- इस प्रयोग में इस्तेमाल किया प्रयोगात्मक सेटअप सतह को मापने के लिए डु Noüy विधि के अनुसार किया जाता है.
- ध्यान से प्लैटिनम की अंगूठी और मापने पोत साफ करें. पोत, एसीटोन के साथ rinsed एक प्रकार का वृक्ष मुक्त ऊतक के साथ मिटा दिया, और उसके बाद एक रंगहीन लौ के साथ अंदर पर जला दिया है. अंगूठी एक रंगहीन लौ में लाल चमकता है.
- समाधान के साथ पोत भरें और सतह को मापने से पहले व्यवस्थित करते हैं. संतुलन राज्य केवल एक लंबे समय के बाद तक पहुँच जाता है जहां समाधान के लिए, जैसे पॉलिमर, यहां इस्तेमाल सरल सेटअप गुणात्मक डेटा प्रदान करेगा.
- उच्च विस्कोसिटी, 2% के जैसे समाधान (डब्ल्यू / डब्ल्यू) के साथ योगों के लिए एचईसी या HPMC, सतह तनाव कम सांद्रता के समाधान पर मापा जाना है और फिर extrapolated. इस तथ्य का लाभ लेने के द्वारा किया जा सकता है0.5% नीचे सांद्रता (डब्ल्यू / डब्ल्यू) में सतह के तनाव के स्तर को बंद में ड्रॉप.
- मैट्रिक्स / बैक्टीरिया की एक छोटी राशि लेने के लिए और एक नमूना धारक पर इसे लोड.
- एक्स - रे-diffractometer में नमूना धारक माउंट.
- नमूने में कोई क्रिस्टलीय चरण वर्तमान का विश्लेषण करने के लिए Bruker से ईवा कार्यक्रम पैकेज का इस्तेमाल किया जा सकता है.
- शीशियों की मैट्रिक्स / बैक्टीरिया की एक छोटी राशि बाहर ले जाओ और एक SEM ठूंठ पर यह तय कर लो.
- धूम-coater (वर्तमान काम में इस्तेमाल थर्मो VGScientific Polaron SC7640) और Au / पी.डी. या पंडित की कुछ एनएम के साथ कोट नमूना में SEM धारक लोड. इन प्रयोगों में sputtering के मापदंडों थे: एक ~ 5 के लिए 1900 वी, मा 20, और 20 सेकंड, 10 - एनएम एयू / पी.डी. कोटिंग. कोटिंग छवि अधिग्रहण के दौरान बिजली चार्ज कम कर देता है. चार्ज बनी रहती है और छवि का कारण बनता है अगर यह एक पतली परत के साथ शुरू करने की सिफारिश की है और कर रहा हैकलाकृतियों, नमूना फिर से लेपित किया जाना चाहिए.
- SEM के चैम्बर में SEM धारक लोड. उपयुक्त इमेजिंग मापदंडों का चयन करें. चित्रा 2 (फी स्तर DB235) में इस्तेमाल साधन के लिए हम 5 केवी को तेज वोल्टेज, spotsize 3, 5 मिमी और माध्यमिक इलेक्ट्रॉन डिटेक्टर की दूरी काम किया करते थे.
- वैकल्पिक रूप से, यह आगे के विवरण प्रकट करने के लिए बहुलक में एम्बेडेड बैक्टीरिया के पार वर्गों में कटौती करने के लिए केंद्रित आयन बीम का उपयोग करना संभव है.
4. फ्रीज सुखाने
5. पुनर्जलीकरण
6. गणन
7. बर्फ़ीली व्यवहार का निरूपण की विशेषता
8. हाइड्रेटेड योगों की सतह तनाव माप
9. सूखी योगों का एक्स - रे विश्लेषण
10. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी
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Representative Results
1 टेबल निर्माण संरचना पर डेटा, स्थिर योगों, शुष्क नमूनों की संरचना और निर्माण के समाधान की सतह तनाव के हीटिंग के दौरान डीएससी द्वारा दर्ज थर्मल घटनाओं को प्रदर्शित करता है. सुक्रोज की टी जी -40 ° सी 2, 3 के लिए निर्धारित किया गया है और 20% डब्ल्यू / डब्ल्यू नीचे सूक्रोज सांद्रता के लिए पता लगाने के लिए मुश्किल हो सकता है. -35 पर थर्मल घटना डिग्री सेल्सियस शायद बर्फ विघटन 2 की शुरुआत से संबंधित है. क्रिस्टलीय संरचना एचईसी और HPMC नमूनों में एक्स - रे से पता चला है और यह भी (चित्रा 2b और 2c देखें) SEM में देखा NaCl के सामान्य क्रिस्टल फार्म के साथ ओवरलैप.
चित्रा 1 ए ग्राम नकारात्मक पी. के लिए अस्तित्व के डेटा से पता चलता है putida और ग्राम पॉजिटिव ए chlorophenolicus अलग सैकराइड आधारित योगों में तैयार की. योगों सेल अस्तित्व के समर्थन में कितनी अच्छी तरह प्रवृत्ति बो के लिए एक ही है कि नोटवें बैक्टीरिया प्रजातियों. चित्रा 1 बी में दिखाया साजिश फ्रीज सुखाने अस्तित्व और फार्मूलों की सतह तनाव के बीच संबंध दिखाता है.
चित्रा 2 सूखी योगों के SEM छवियों से पता चलता है. यहाँ दिखाया चार पॉलिमर के लिए गठित मैट्रिक्स "कुरकुरा कागज" का रूप दिया है: बैक्टीरिया एम्बेडेड और नालियों के रूप में दिखा रहे हैं परस्पर चिकनी पत्रक जिसमें. Ficoll और सुक्रोज के लिए, पत्रक के बारे में 1 माइक्रोन मोटी और 10 हैं - 20 माइक्रोन चौड़ा, Ficoll एक चिकनी सतह होने के साथ. HPMC और एचईसी बहुलक की मात्रा दूसरों (1 टेबल) की तुलना में इन सेलूलोज़ आधारित योगों में कम है इस तथ्य है कि संभवतः कारण बहुत पतली चादरें, के रूप में. इसके अलावा, नमक क्रिस्टल बहुलक चादरें की सतह पर precipitates की एक बड़ी राशि दिखा उत्तरार्द्ध के साथ, एचईसी और HPMC के लिए मनाया गया. चादरें वें रहे हैं क्योंकि बैक्टीरिया और अधिक आसानी से सेलूलोज़ आधारित योगों में देखा जाता हैभीतरी. सुक्रोज और Ficoll में, वे ज्यादातर अन्यथा चिकनी सतहों के चलि के रूप में मनाया जाता है.
| निरूपण रचना | थर्मल घटनाओं जमी योगों में पता चला | शुष्क निर्माण की संरचना | Undried योगों की सतह तनाव (करोड़ मीटर -1) |
| 10% सुक्रोज | बर्फ विघटन की शुरुआत, -35 डिग्री सेल्सियस | अनाकार सूक्रोज | 72 ± 0.1 |
| 10% Ficoll, 150 मिमी NaCl | टी जी ', -22 डिग्री सेल्सियस | अनाकार Ficoll | 68 ± 0.3 |
| 2% एचईसी, 150 मिमी NaCl | बर्फ और NaCl के गलनक्रांतिक पिघलने, -28 डिग्री सेल्सियस | अनाकार एचईसी, स्फटिक NaCl | 64 ± 0.6 |
| 2% HPMC, 150 मिमी NaCl | बर्फ और NaCl के गलनक्रांतिक पिघलने, -27 डिग्री सेल्सियस | 52 ± 0.8 |
तालिका 1. जलीय या सूखी योगों के विभिन्न योगों और गुणों की रचना. एचईसी और HPMC की बहुलक सांद्रता जीवाणुओं की एक मोटी पर्याप्त मैट्रिक्स कवर हासिल करने के लिए maximized लेकिन अभी भी चिपचिपाहट करने का संबंध है के रूप में एक व्यावहारिक समाधान है थे.
चित्रा 1. फ्रीज की ए) जीवित रहने की दर पी. सूख putida (सफेद) और ए disaccharide sucrose या पॉलिमर फ्रीज सुखाने के बाद सेल अस्तित्व और संयुक्त राष्ट्र के सूखे योगों की सतह तनाव के बीच Ficoll, एचईसी और HPMC, बी) के सहसंबंध के आधार पर समाधान में तैयार जब chlorophenolicus (ग्रे).
एफigure 2. पी. के SEM छवियों चार विभिन्न योगों में putida: एक) सूक्रोज, ख) Ficoll, ग) एचईसी, घ) HPMC. बहुलक चादर काफी मोटी हैं और पूरी तरह से बैक्टीरिया ढंक कर सकते हैं क्योंकि बैक्टीरिया) एक में देखना मुश्किल) और ख, ग में) और घ) बैक्टीरिया सतह पर अधिक प्रमुखता से दिखाई. घ) में, वे नमक की बड़ी राशि से प्रतिष्ठित किया जा सकता है कि वे के रूप में आयताकार, अंधेरे कॉर्पुसल्स दिखाई देते हैं, क्योंकि उनके आकार और इसके विपरीत की precipitates.
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Discussion
इस अध्ययन के लिए मकसद फ्रीज सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है कि कुछ निर्माण संपत्तियों की जांच के लिए किया गया था. आंतरिक सुखाने सहिष्णुता विभिन्न प्रजातियों के बीच होती है, के रूप में चित्रा 1 ए, विभिन्न योगों समर्थन सेल अस्तित्व के समान है पर कितनी अच्छी तरह प्रवृत्ति में सचित्र. यह सूक्रोज और Ficoll की तुलना के साथ शुरू करने के लिए जानकारीपूर्ण है. यह सेल अस्तित्व का समर्थन करने के लिए एक तैयार करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक इस प्रकार भी सूखी राज्य में कोशिका के प्रोटीनों और झिल्ली की संरचना को बनाए रखने, निर्जलीकरण के दौरान पानी की जगह के लिए तैयार घटक (एस) की क्षमता है कि माना जाता है. ऐसे पॉलीसैक्राइड स्टार्च के रूप में पॉलिमर 5,11 नहीं करते हैं जबकि ऐसे sucrose रूप डिसैक्राइड लेकिन यह भी, इस संपत्ति दिखाने trehalose. पॉलिमर डिसैक्राइड के रूप में एक ही फैशन में झिल्ली लिपिड के साथ बातचीत करने के लिए बहुत बड़ा माना जाता है. एक सफल फ्रीज सूखे के लिए महत्वपूर्ण है एक और संपत्तिसूक्ष्मजीवों के आईएनजी फ्रीज सुखाने के दौरान (यानी. बन अनाकार ठोस) शीशे सा बनना लिए समर्थन मैट्रिक्स की क्षमता है. अनाकार संरचना अलग कोशिकाओं परिरक्षण और रखने के लिए फायदेमंद है. फ्रीज सुखाने ठीक से किया जाता है दिलचस्प है, अगर डिसैक्राइड और पॉलिमर दोनों आसानी से शीशे सा बनना. हमारे परिणाम सूक्रोज और Ficoll आधारित योगों दोनों फ्रीज सुखाने के बाद अनाकार बन बताते हैं कि, समान रूप से अच्छी तरह से तालिका 1, और समर्थन सेल अस्तित्व देखें. हालांकि, दो saccharides के बीच महत्वपूर्ण मतभेद हैं. सुक्रोज के विपरीत, Ficoll अणु, 400 केडीए के एक आणविक वजन के साथ, 4, 5 फ्रीज सुखाने के दौरान लिपिड झिल्ली के साथ बातचीत में पानी की जगह के लिए बहुत बड़ी है. इसके अलावा, Ficoll के अणुओं के रूप में अपने 6 आकार के कारण फिर से, ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया की periplasmic अंतरिक्ष से मना कर रहे हैं, Ficoll के सेलुलर तेज की संभावना नहीं है. इस के आधार पर, हम सुझाव है कि सुरक्षात्मक प्रभाव प्रावधानोंसुक्रोज सूत्रीकरण द्वारा ded intracellular संरचना 7, 8 के पानी की जगह क्षमता के लिए महत्वपूर्ण है, disaccharide के सेलुलर तेज करने के लिए मुख्य कारण नहीं है. बल्कि, सेल अस्तित्व का समर्थन करने के Ficoll की क्षमता, Ficoll और सुक्रोज तैयार करने के लिए दोनों सामान्य गुणों के साथ क्या अनाकार संरचना उदाहरण के लिए है.
पॉलिमर पर केंद्रित है, यह सेल अस्तित्व का समर्थन करने के लिए बहुलक योगों की क्षमता बदलता है कि चित्रा 1 ए से स्पष्ट है. एक्स - रे विश्लेषण NaCl फ्रीज सुखाने के दौरान सघन और एचईसी और HPMC योगों का अन्यथा अनाकार संरचना के साथ coexisted दिखाया. कोई क्रिस्टलीय पदार्थ Ficoll आधारित तैयार करने में खोजा गया था. NaCl कार्बोहाइड्रेट 9, 10 में हाइड्रॉक्सिल moieties साथ परिसरों फार्म कर सकते हैं. हाइड्रॉक्सिल आधा भाग दाढ़ अनुपात को Ficoll और एचईसी आधारित योगों में NaCl कोई क्रिस्टलीकरण का पता चला था समझा क्यों, क्रमशः, 1:11 और 1:1 थाFicoll आधारित तैयार करने में. NaCl और सेल्यूलोज पॉलिमर के बीच चरण जुदाई भी DSC-जांच में मनाया गया. एक गलनक्रांतिक पिघलने चरण जुदाई जमे हुए राज्य में जगह लेता है, यह दर्शाता है कि जमे हुए एचईसी और HPMC-योगों के हीटिंग के दौरान दर्ज की गई थी. निर्माण की आकारिकी और microstructure SEM इमेजिंग (चित्रा 2) से पता चला है और डीएससी और एक्स - रे डेटा की पुष्टि होती है. बैक्टीरियल कोशिकाओं एचईसी पत्र की सतह पर स्पष्ट रूप से दिखाई NaCl क्रिस्टल जमा के साथ चादरों से फैला हुआ देखा जाता है. हम क्रिस्टल के रूप में छितरी हुई या बहुलक में भंग चाहे नमक का राज्य, सेल अस्तित्व के साथ सहसंबंधी नहीं करता है निष्कर्ष है कि HPMC की तुलना में एचईसी समाधान और Ficoll समाधान में तैयार बैक्टीरिया के लिए जीवित रहने की दरों के बीच समानता के आधार पर. इसके बजाय सेल अस्तित्व योगों की सतह तनाव के साथ एक रिश्ता पता चलता है, चित्रा 1B देखें. निचली सतह तनाव के लिए, एलower के जीवित रहने की दरों बैक्टीरिया के लिए दर्ज की गई हैं. मापा सतह तनाव विलेय, यानी sucrose और पॉलिमर, और विलायक अणु के बीच बातचीत को प्रदर्शित करता है लेकिन ध्यान दें. फिर भी यह पॉलिमर की सतह गतिविधि एक अस्थिर तरीके से सेल सतहों के साथ भी बातचीत करने की उनकी प्रवृत्ति से संबंधित हो सकता है कि एक अप्रत्यक्ष अटकलें के लिए अनुमति देता है. विलेय की एकाग्रता ठंड के दौरान बढ़ जाती है, नकारात्मक प्रभाव सतह सक्रिय पॉलिमर का नकारात्मक प्रभाव नहीं देखा गया था क्यों समझा potentiated किया जा सकता है जब पूरी तरह से hydrating योगों में केवल भंडारण बैक्टीरिया.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
काम डोम कार्यक्रम और यूरोपीय संघ समुदाय के FP7 फ्रेमवर्क कार्यक्रम से अनुदान 211684 (BACSIN) के माध्यम से सामरिक पर्यावरण अनुसंधान के लिए स्वीडिश फाउंडेशन (MISTRA) द्वारा समर्थित किया गया था. हम वैचारिक कथा के साथ मदद करने के लिए एक्स - रे विश्लेषण और एल तांग फिल्माने में सहायता के लिए जे Engstrand धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll PM 400 | GE-healthcare | 17-0300-10 | |
| HEC (Natrosol-M Pharm Grade) | Ashland | Gift from Ashland | |
| HPMC (Methocel F4M) | Dow | Gift from the Department of Pharmacy, Uppsala University | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | S2395 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 71376 | |
| Tryptic Soy broth | Merck | 105459 | |
| Tryptic Soy Agar | Merck | 105458 | |
| Lyostar II | FTS Kinetics | N.A. | |
| Pyris Diamond DSC | Perkin-Elmer | N.A. | |
| Bruker AXS SMART CCD 1k Diffractometer | Bruker | N.A | |
| Dual-beam FEI Strata DB235 FIB/SEM | FEI | N.A | |
| Krüss Educational Tensiometer | Krüss | N.A. |
References
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