hemocytes الحشرات تنفيذ العديد من الوظائف الهامة، سواء المناعي وغير المناعة، في جميع مراحل التنمية الحشرات. معرفتنا الحالية للأنواع كرية دموية وظيفة يأتي من الدراسات على نماذج جينية الحشرات. هنا، نقدم طريقة لاستخراج، وقياس تصور hemocytes من اليسروع البرية.
hemocytes الحشرات (أي ما يعادل الثدييات خلايا الدم البيضاء) تلعب دورا هاما في العديد من العمليات الفسيولوجية في جميع أنحاء دورة حياة حشرة 1. في مراحل اليرقات من الحشرات تنتمي إلى أوامر من قشريات الجناح (الفراشات والعث) وذوات الجناحين (الذباب الحقيقي)، وتشكل hemocytes من الغدة الليمفاوية (جهاز متخصص المكونة للدم) أو الخلايا الجنينية ويمكن حملها حتى المرحلة الكبار. ويشارك في الهجرة hemocytes الجنينية الخلايا خلال تنظيم وتطوير الكيميائي أثناء الالتهاب. كما تشارك في موت الخلايا المبرمج الخلية وضرورية لمرحلة التطور الجنيني 2. Hemocytes توسط الذراع الخلوية للاستجابة المناعة الفطرية الحشرات التي تضم عدة وظائف، مثل انتشار الخلايا تجميع الخلية، وتشكيل عقيدات، البلعمة والتغليف من الغزاة الأجانب 3. كما أنها مسؤولة عن تدبير محدد الدفاعات الخلطية الحشرات خلال العدوى، مثل العلاقات العامةoduction من الببتيدات المضادة للميكروبات والجزيئات الأخرى المستجيب 4، 5. وقد تم أساسا مورفولوجيا كرية دموية وظيفة درس في نماذج الحشرات وراثية أو فسيولوجية، بما في ذلك ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا 6، 7، الزاعجة المصرية البعوض وأنوفيليس غامبياي 8 و 9 وhornworm التبغ، ماندوكا سيكستا 10 و 11. ومع ذلك، توجد معلومات قليلة حول التنوع حاليا، والتصنيف، ومورفولوجيا وظيفة hemocytes في أنواع الحشرات غير نموذج، وخصوصا تلك التي تم جمعها من البرية ال 12.
نحن هنا وصف بروتوكول بسيطة وفعالة لاستخراج hemocytes من اليسروع البرية. ونحن نستخدم ما قبل الأخيرة الطور Lithacodes المتورقة (أصفر الكتف فراشة سبيكة) (الشكل 1) وEuclea delphinii (البلوط شائك سبيكة) اليسروع (قشريات الجناح: Limacodidae) وتبين أن كميات كافية من الدملمف (الدم الحشرات)يمكن أن تكون معزولة وأرقام كرية دموية عد من اليرقات الفردية. ويمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة كفاءة أنواع كرية دموية في هذه الأنواع وكذلك في غيرها من اليسروع lepidopteran ذات صلة تحصد من الميدان، أو يمكن أن الجمع بين المقايسات المناعية بسهولة مع مصممة للتحقيق وظيفة كرية دموية بعد العدوى الميكروبية أو الكائنات مع الطفيلي 13.
سبق طرق لاستخراج hemocytes من الحشرات الهامة طبيا والحشرات نموذج lepidopteran ذكرت 9 و 14. يتم تكييفها طرق استخراج كرية دموية وفقا لأنواع الحشرات، والمرحلة التنموية للحشرة ومميزاته المورفولوجية. على سبيل المثال، يمكن عزل اليرقات من الدملمف ماندوكا يقوم بسهولة من قبل…
The authors have nothing to disclose.
وأيد من قبل TMS زمالة الاستئماني هارلان (GWU) خلال هذه الدراسة. تمويل الجمع الميداني وتربية L. المتورقة وE. وقدمت منحة delphinii من قبل NSF DEB 0642438 لJTL.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Micropipette puller | Sutter Instruments | P-1000 | |
Borosilicate glass tubes | Sutter Instruments | B100-50-10 | OD: 1.0, ID: 0.50 mm |
Grace’s Medium | Sigma | G8142 | |
Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | SH3007102 | Heat inactivated |
Dumont #5 Forceps | Fine science tools | 11252-40 | |
Neubauer hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
Plastic tubing | Tri-Tech | TT-3-32OD | OD: 3/32”, ID: 1/32′ |
Glass medical syringe | Fortuna Optima | D-97877 | 50 ml volume |
Blunt end needle | Small Parts | NE-162PL-25 | 16 Gauge x 1″ length |