hemocytes חרקים למלא תפקידים חשובים רבים, הוא חיסון ושאינם מחוסנים, לאורך כל שלבי התפתחות חרקים. הידע הנוכחי שלנו של הסוגים והתפקוד hemocyte מגיע ממחקרים על מודלים גנטיים של חרקים. כאן, אנו מציגים שיטה לחילוץ, כימות והמחשת hemocytes מזחלים פרא.
hemocytes חרקים (שווה ערך לתאי דם לבנים יונקים) משחק תפקיד חשוב בכמה תהליכים פיסיולוגיים לאורך כל מחזור החיים של חרק 1. בשלבי זחל של חרקים השייכים לצווים של פרפרים (עשים ופרפרים) וDiptera (זבובים אמיתיים), hemocytes נוצרים מבלוטת הלימפה (hematopoietic איבר מיוחד) או התאים עובריים ויכולה להתבצע דרך לשלב הבגרות. hemocytes העוברי מעורב בנדידת תאים במהלך התפתחות הרגולציה וchemotaxis במהלך דלקת. הם גם ייקחו חלק באפופטוזיס תא והם חיוניים להתפתחות עוברת 2. Hemocytes לתווך זרוע התאית של תגובת החיסון המולדת חרקים שכוללת מספר פונקציות, כגון תא, צבירה מתפשטת תא, היווצרות של גושים, phagocytosis ואנקפסולציה של פולשים זרים 3. הם גם אחראים לניהול הגנה הומורלית חרקים מסוימות במהלך זיהום, כגון יחסי הציבורoduction מיקרוביאלית של פפטידים ומולקולות אחרות מפעיל 4, 5. המורפולוגיה והתפקוד Hemocyte שנחקרו בעיקר במודלים של חרקים גנטיים או פיסיולוגיים, כוללים זבוב פרות, דרוזופילה melanogaster 6, 7, יתושי Aedes aegypti ואנופלס gambiae 8, 9 והטבק hornworm, Manduca 10 סקסטה, 11. עם זאת, מעט מידע קיים היום על הגיוון, סיווג, מורפולוגיה והתפקוד של hemocytes במינים שאינם מודל חרקים, במיוחד אלה שנאספו מ12 הפרועים.
כאן אנו מתארים פרוטוקול פשוט ויעיל לחילוץ hemocytes מזחלים פרא. אנו משתמשים instar Lithacodes fasciola הלפני האחרון (עש קליע צהוב כתפיים) (איור 1) וEuclea delphinii (קליע אלון קוצני) זחלים (פרפרים: Limacodidae) ומראים כי היקפים מספיקים של hemolymph (דם חרקים)יכול להיות מבודד ומספרי hemocyte נספרו מזחלי פרט. שיטה זו יכולה להיות מנוצלת ביעילות ללמוד סוגי hemocyte במינים אלה, כמו גם בזחלי lepidopteran נלווים אחרים שנקטפו מהשדה, או שזה יכול להיות בקלות בשילוב עם מבחנים אימונולוגיים שנועדו לחקור את תפקוד hemocyte בעקבות הידבקות בחיידקים או אורגניזמים טפילים 13.
שיטות לחילוץ hemocytes מחרקים רפואיים חשובים וחרקי מודל lepidopteran העבר דיווח 9, 14. שיטות חילוץ Hemocyte מותאמות על פי מיני חרקים, השלב ההתפתחותי של החרק ותכונות המורפולוגיות שלה. לדוגמה, בידוד hemolymph מזחלי Manduca יכול להתבצע בקלות על ידי חיתוך הקרן המעוקלת סמוך לסוף הבטן <s…
The authors have nothing to disclose.
TMS נתמך על ידי מלגת הרלן הנאמנות (GWU) במהלך מחקר זה. מימון לאוסף שדה ורביית L. fasciola וא delphinii סופק על ידי מענק NSF DEB 0642438 לJTL.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Micropipette puller | Sutter Instruments | P-1000 | |
Borosilicate glass tubes | Sutter Instruments | B100-50-10 | OD: 1.0, ID: 0.50 mm |
Grace’s Medium | Sigma | G8142 | |
Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | SH3007102 | Heat inactivated |
Dumont #5 Forceps | Fine science tools | 11252-40 | |
Neubauer hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
Plastic tubing | Tri-Tech | TT-3-32OD | OD: 3/32”, ID: 1/32′ |
Glass medical syringe | Fortuna Optima | D-97877 | 50 ml volume |
Blunt end needle | Small Parts | NE-162PL-25 | 16 Gauge x 1″ length |