एक murine मॉडल में आंत का ऊतक इंजीनियरिंग
Summary
यह लेख और साथ वीडियो माउस में ऊतक इंजीनियर आंत पैदा करने के लिए हमारे प्रोटोकॉल उपस्थित थे, एक organoid दृष्टिकोण इकाइयों पर पाड़ का उपयोग.
Abstract
ऊतक इंजीनियर छोटी आंत (TESI) सफलतापूर्वक करने के लिए बड़े पैमाने पर छोटे आंत्र लकीर के बाद लुईस चूहों बचाव, preoperative वजन करने के लिए बदले में 40 दिनों के भीतर उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया गया है 1 मनुष्यों में, बड़े पैमाने पर छोटे आंत्र लकीर कम आंत्र सिंड्रोम, एक कार्यात्मक malabsorptive में परिणाम कर सकते हैं. राज्य है कि महत्वपूर्ण रुग्णता, मृत्यु दर, और parenteral पोषण निर्भरता, जिगर की विफलता और सिरोसिस, और multivisceral अंग प्रत्यारोपण के लिए की जरूरत है इस पत्र में 2. सहित स्वास्थ्य देखभाल की लागत प्रदान, हम का वर्णन है और एक माउस मॉडल में ऊतक इंजीनियर आंत बनाने के लिए हमारे प्रोटोकॉल दस्तावेज़ एक बहुकोशिकीय organoid दृष्टिकोण इकाइयों पर पाड़ के साथ. Organoid इकाइयों multicellular आंत से प्राप्त समुच्चय है, कि दोनों mucosal और mesenchymal तत्व होते हैं 3 संबंध इन्टेस्टाइनल स्टेम सेल के बीच जो आला बरकरार रखता है में चल रही है और भविष्य के अनुसंधान में हमारी तकनीक का संक्रमण 4.माउस ट्रांसजेनिक इस प्रजाति में उपलब्ध उपकरणों का उपयोग करके TESI गठन के दौरान शामिल प्रक्रियाओं की जांच के लिए अनुमति 5 immunocompromised माउस उपभेदों की उपलब्धता भी हमें मानव आंत्र ऊतक के लिए तकनीक को लागू करने के लिए और एक रूप में मानव TESI के गठन का अनुकूलन की अनुमति देगा. मनुष्यों में इसके संक्रमण से पहले माउस xenograft. हमारा तरीका अच्छा विनिर्माण अभ्यास (जीएमपी) अभिकर्मकों और सामग्री है कि पहले से ही मानव रोगियों में उपयोग के लिए अनुमोदित किया गया है, और इसलिए दृष्टिकोण है कि decellularized पशु ऊतकों पर भरोसा करते हैं पर एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है कार्यरत हैं. इस विधि का अंतिम लक्ष्य एक पुनर्योजी दवा कम आंत्र सिंड्रोम के लिए चिकित्सकीय रणनीति के रूप में मनुष्य के लिए अनुवाद है.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम माउस में ऊतक इंजीनियर आंत का उत्पादन एक organoid दृष्टिकोण इकाइयों पर पाड़ का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित. सबसे महत्वपूर्ण कदम है organoid इकाइयों की तैयारी के उन हैं. देखभाल करने के लिए पर्याप्त रू?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ट्रेसी सी. Grikscheit, एरिक आर बार्देल, और Frédéric जी साला पुनर्योजी चिकित्सा के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट (सीआईआरएम), अनुदान संख्या RN2 – +००,९४६ 1 (TCG) और TG2 01,168 (ERB, FGS) द्वारा समर्थित हैं. एलीसन एल Speer विश्वविद्यालय सर्जन Ethicon विद्वान की एक सोसायटी है. Yashuhiro Torashima एक बच्चों के अस्पताल के लॉस एंजिल्स Saban संस्थान अनुसंधान कैरियर विकास फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
References
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