ट्रांसजेनिक मछली के बरकरार मस्तिष्क में पहचाने गए न्यूरॉन्स से इलेक्ट्रिकल गतिविधि रिकॉर्डिंग
Summary
इस वीडियो में, हम जटिल तंत्रिका सर्किट को बरकरार रखता है जो एक पूरे मस्तिष्क तैयारी में पहचान की एकल न्यूरॉन्स से बिजली की गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए प्रदर्शन करेंगे. हम जननग्रंथिपोषी रिहा हार्मोन (GnRH) न्यूरॉन्स आनुवंशिक रूप से बरकरार मस्तिष्क तैयारी में पहचान के लिए एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ टैग कर रहे हैं, जिनमें ट्रांसजेनिक मछली का उपयोग करें.
Abstract
जटिल व्यवहार को विनियमित कि तंत्रिका परिपथों की सेल शरीर क्रिया विज्ञान को समझना यह काम सीएनएस के तंत्रिका circuitry बरकरार है जहां एक अक्षुण्ण मस्तिष्क तैयार करने में किया जा सकता है, जिसमें मॉडल प्रणाली का उपयोग करके बहुत बढ़ाया है. हम जननग्रंथिपोषी रिहा हार्मोन (GnRH) न्यूरॉन्स आनुवंशिक रूप से बरकरार मस्तिष्क में पहचान के लिए हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ टैग कर रहे हैं, जिनमें ट्रांसजेनिक मछली का उपयोग करें. मछली GnRH न्यूरॉन्स के कई आबादी है, और उनके कार्यों को अपने मस्तिष्क में स्थान और वे 1 व्यक्त कि GnRH जीन पर निर्भर हैं. हम ट्रांसजेनिक Medaka मछली के बरकरार मस्तिष्क (चित्रा 1 बी और सी) का उपयोग घ्राण बल्ब के साथ जुड़े टर्मिनल तंत्रिकाओं (तमिलनाडु) में स्थित GnRH3 न्यूरॉन्स पर हमारे प्रदर्शन ध्यान केंद्रित किया है. अध्ययन Medaka तमिलनाडु GnRH3 न्यूरॉन्स केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के लिए बाहरी वातावरण से जानकारी की एक ट्रांसमीटर के रूप में अभिनय, neuromodulatory बताते हैं कि, tहे के रूप में प्रसिद्ध हाइपोथैलेमस GnRH1 न्यूरॉन्स 2, 3. तमिलनाडु GnRH3 न्यूरॉन्स की सहज कार्रवाई संभावित गोलीबारी के टॉनिक पैटर्न एक आंतरिक संपत्ति 4-6, आवृत्ति है, पीयूषिका-gonadal कार्यों को विनियमित करने में एक प्रत्यक्ष भूमिका निभा नहीं है जिनमें से conspecifics 2 और neuropeptide kisspeptin 1 5 से दृश्य cues द्वारा संग्राहक है. इस वीडियो में, हम तमिलनाडु GnRH3 न्यूरॉन्स कैसे न्यूरॉन्स की पहचान और पूरे दिमाग में उनकी बिजली की गतिविधि पर नजर रखने के लिए आप को दिखाने के लिए बढ़ाया हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन 7 से जुड़ा हुआ Gnrh3 के प्रमोटर क्षेत्र युक्त एक transgene व्यक्त जिसमें ट्रांसजेनिक Medaka की एक स्थिर लाइन का उपयोग तैयारी 6.
Protocol
Representative Results
Discussion
GnRH 3: GFP ट्रांसजेनिक मछलियों न्यूरोनल एकीकरण और सीधे और परोक्ष रूप से प्रजनन 3, 8-10 में शामिल रहे हैं कि दोनों के व्यवहार के केंद्रीय नियंत्रण में विनियमन अंतर्निहित neurophysiological तंत्र का अध्ययन करने के ल?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम तकनीकी सहायता के लिए डॉ. मेंग-चिन लिन और सुश्री युआन दांग धन्यवाद. इस काम के स्वास्थ्य HD053767 के राष्ट्रीय संस्थान (एनएलडब्ल्यू उपपट्टा) से अनुदान द्वारा और कैलिफोर्निया लॉस एंजिल्स के अनुसंधान, विश्वविद्यालय (एनएलडब्ल्यू) के वाइस चांसलर के फिजियोलॉजी और कार्यालय के विभाग से धन के द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope | Olympus | BX50W (Upright) | |
| Amplifier | Axon Instruments | Axoclamp 200B | |
| A-D converter | Computer Interference Corp. | Digidata ITC-18 | |
| Cooled CCD camera | PCO Computer Optics | Sensicam | |
| Xenon lamp | Sutter Instruments Co. | ||
| GFP filter set | Chroma Technologies | ||
| Imaging Software | Intelligent Imaging Innovations | Slidebook software | |
| Electrophysiology Data Acquisition Software | Axon Instruments | Axograph software | |
| Electrophysiology Data Acquisition Software | AD Instruments Inc. | PowerLab | |
| Headstage for electrophysiology | Axon Instruments | CV 203BU | |
| Micromanipulator | Sutter Instrument Co | MP-285 | |
| Recording Chamber Platform | Warner Instrument Corp. | P1 | |
| Recording Chamber | Warner Instrument Corp. | RC-26G | |
| Electrode Puller | Sutter instruments | P87 | |
| Filament for electrode puller | Sutter Instruments | FB330B | 3.0 mm wide trough filament |
| 1.5 mm glass capillaries | World Precision Instruments | 1B150-4 | Microelectrode for recording |
| Syringe | Becton Dickinson | 309586 | 3 ml |
| MS-222 | Sigma | E10521-10G | Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt |
| Fish saline | mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 HEPES | ||
| Electrode solution (loose-patch) | mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl2; 1.3 MgCl2; 10 HEPES; 10 glucose | ||
| Electrode solution (whole-cell patch) | mM: 112.5 K-gluconate; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 leupeptin;10 phospho-creatine |
References
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