Summary
पार्किंसंस रोग हरकत दोष के कारण, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अध: पतन का परिणाम है कि एक neurodegenerative विकार है. Rotenone मॉडल ड्रोसोफिला में पार्किंसंस रोग. इस पत्र rotenone की वजह से सहज और डराना प्रेरित दोनों हरकत की कमी की विशेषताएँ कि दो assays रूपरेखा.
Abstract
पार्किंसंस रोग मुख्य रूप से द्रव्य नाइग्रा में, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अध: पतन का परिणाम है कि एक neurodegenerative विकार है. बीमारी मनुष्यों में कठोरता, झटके और पागलपन के रूप में उपस्थित है, जो मोटर की कमी का कारण बनता है. Rotenone माइटोकॉन्ड्रिया में इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के समारोह में बाधा oxidative नुकसान का कारण बनता है कि एक कीटनाशक है. यह भी ड्रोसोफिला में पार्किंसंस रोग मॉडल के लिए प्रयोग किया जाता है. मक्खियों उन्हें चौंका दिया जा रहा है पर ऊपर की ओर चढ़ने के लिए मजबूर है, जो एक अंतर्निहित नकारात्मक geotactic प्रतिक्रिया है. यह rotenone वे नीचे की ओर उपयोग किया गया है के बाद चढ़ाई करने के लिए मक्खियों की क्षमता को बाधित कि जल्दी मृत्यु दर और हरकत दोष का कारण बनता है कि स्थापित किया गया है. हालांकि, सहज आंदोलन पर rotenone का प्रभाव अच्छी तरह से प्रलेखित नहीं है. इस अध्ययन में rotenone प्रेरित कमियों को चिह्नित करने के लिए दो, संवेदनशील प्रतिलिपि प्रस्तुत करने, और उच्च throughput assays रूपरेखाअल्पकालिक ड्रोसोफिला में हरकत और लंबी अवधि के सहज हरकत डराना प्रेरित. ये assays सुविधा हरकत दोष और चिकित्सीय एजेंट की प्रभावकारिता के अन्य ड्रोसोफिला मॉडल को चिह्नित करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
Introduction
हरकत कमियों पार्किंसंस रोग के प्रमुख लक्षण हैं और काफी हद तक द्रव्य नाइग्रा 1 की डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की गिरावट की वजह से हैं. Rotenone ड्रोसोफिला 2-6 में पार्किंसंस मोटर घाटे मॉडल करने के लिए बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है कि एक ketonic कीटनाशक है. Rotenone अंततः कोशिका मृत्यु 7 का कारण बनता है जो ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण मार्ग अवरुद्ध द्वारा oxidative नुकसान का कारण बनता है. डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स मुख्य रूप से मोटर 2,7 आधारित रसायन के प्रभाव बनाने, rotenone विषाक्तता से ग्रस्त हैं. मक्खियों में पार्किंसंस रोग के लक्षण उत्प्रेरण द्वारा, हम बेहतर रोग को समझने और 6,8-11. ड्रोसोफिला वे बनाए रखने के लिए आसान, आनुवंशिक रूप से विनयशील हैं क्योंकि इस प्रभाव के अध्ययन के लिए एक अच्छा मॉडल प्रदान करता है इसके लक्षण में सुधार, और एक तेजी से जीवन चक्र हो सकता है.
कई अध्ययनों से rotenone अल्पकालिक डराना प्रेरित का कारण बनता है पता चला है किड्रोसोफिला, जब मक्खियों में हरकत दोष rotenone पूरक भोजन पर रखा जाता है, वे डराना 2-6 के बाद एक धीमी नकारात्मक geotactic प्रतिक्रिया दिखाते हैं. नियंत्रण परीक्षणों के रूप में के रूप में जल्दी से एक शीशी तंत्र में ऊपर की ओर चढ़ने के लिए उनकी असफलता डराना प्रेरित हरकत दोषों का संकेत है.
लंबी अवधि पर rotenone का प्रभाव, सहज आंदोलन अच्छी तरह ड्रोसोफिला गतिविधि पर नज़र रखता है (बांधों) सफलतापूर्वक ड्रोसोफिला circadian ताल में आंदोलन की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया गया है. वर्णित 12,13 अध्ययन नहीं है. मक्खियों बांध में लोड कर रहे हैं जो व्यक्तिगत ट्यूबों में रखा जाता है. यह तंत्र एक मक्खी अवरक्त किरण टूटता बार की संख्या में गिना जाता है, जो एक अवरक्त संवेदक के साथ सुसज्जित है. इन मामलों अबाधित हरकत और गतिविधि 12,13 के एक उपाय के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. एक बांध में मक्खियों रखने से, उनके दीर्घकालिक हरकत पर rotenone के प्रभाव लक्षण वर्णन किया जा सकता है. इस अध्ययन Meas के लिए विधियों का वर्णनure अल्पकालिक बेहतर rotenone मध्यस्थता मोटर की कमी के प्रभाव को समझने के लिए हरकत और लंबी अवधि के सहज हरकत डराना प्रेरित. वे इन हरकत दोष रिवर्स सकता है जो अन्य यौगिकों के अध्ययन के लिए अनुमति देते हैं क्योंकि पार्किंसंस रोग नकल उतार हरकत की कमी की विशेषता महत्वपूर्ण हैं.
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Protocol
1 ड्रोसोफिला डराना प्रेरित हरकत परख
- औषध उपचार
- वांछित संख्या स्थिर करने के लिए गंभीर (लगभग 8-12) 1-3 दिन पुरानी पुरुष सीओ 2 का उपयोग और दवा पूरक भोजन युक्त शीशियों के लिए उन्हें परिवहन मक्खियों. नोट: एक और संवेदनाहारी जैसे, ईथर या बर्फ की गिनती और हैंडलिंग सक्षम करने के लिए मक्खियों शांत करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
- 25 डिग्री सेल्सियस पर मक्खियों (मक्खियों को रोकने के लिए भोजन पर अटक रही) एक क्षैतिज स्थिति में शीशी के साथ 20 मिनट (या वसूली तक) के लिए बेहोश करने की क्रिया से उबरने और फिर एक 12 घंटा अंधेरे में ईमानदार शीशी जगह करने की अनुमति, 12 घंटे प्रकाश इनक्यूबेटर प्रयोग के शेष के लिए.
- प्रयोगात्मक सेट अप
- एक स्थायी मार्कर के साथ शीशियों आसपास हलकों अंकन से 6.33 सेमी की तीन बराबर खंडों में इस दोहरे शीशी सेटअप फूट डालो.
- दवा लोगों तक पहुंचाने के 3 दिन बाद, स्थानांतरण नीचे शीशी में anesthetizing बिना मक्खियों और जल्दी से शीर्ष शीशी जगहखोलने पर. स्पष्ट टेप के साथ एक साथ दो शीशियों टेप.
- मक्खियों 15 मिनट के लिए नए वातावरण के लिए acclimate करने की अनुमति दें.
- जगह एक सफेद पृष्ठभूमि पर शीशियों और दृश्य में एक टाइमर के साथ डबल शीशी तंत्र से एक उचित दूरी पर एक डिजिटल कैमरे की स्थापना की. पूरे तंत्र एक भी तस्वीर के फ्रेम में दिख रहा है सुनिश्चित करें और सब मक्खियों ध्यान में हैं कि. परीक्षणों के बीच लगातार फ्रेम बनाए रखने के लिए, कैमरा और शीशी के स्थान चिह्नित.
- गतिशीलता परख
- जाहिर कैमरा देखने में परीक्षण संख्या, दवा उपचार, और घड़ी प्रदर्शित करते हैं.
- मजबूती countertop के खिलाफ 3 बार डबल शीशी तंत्र नल और सब मक्खियों शीशी की तह तक गिर सुनिश्चित करें कि. इसके साथ ही टाइमर शुरू.
- हर 5 सेकंड 1 मिनट के लिए, तंत्र की एक तस्वीर ले लो. नोट: वैकल्पिक रूप से, एक वीडियो पर कब्जा कर लिया और माप के लिए उपयुक्त अंतराल पर रुका हुआ जा सकता है.
- मक्खियों 1 मिनट के लिए undisturbed ठीक करने के लिए अनुमति दें.
- डेटा विश्लेषण
- चित्रों की समीक्षा करें और समय के साथ प्रत्येक अनुभाग में मक्खियों की संख्या रिकॉर्ड. समय के साथ प्रत्येक अनुभाग में मक्खियों के प्रतिशत की गणना. नोट: उदाहरण के लिए, दिन 3, 5 के लिए, ब्याज की 2 या 3 बार के अंक में एक ही मक्खियों के साथ इस पूरी प्रक्रिया को दोहराएँ, और भी कई मक्खियों की भरपाई करने के लिए मूल परीक्षण संख्या के लिए पैमाने पर करने के लिए यह संभव है प्रयोग भर में मरने 7 यदि मृत्यु दर के लिए. डेटा की तुलना करने के लिए उपयुक्त सांख्यिकीय विश्लेषण का प्रयोग करें.
2 ड्रोसोफिला स्वतःस्फूर्त हरकत परख
- खाद्य तैयारी
- 15 de-ionized पानी की मिलीलीटर और वांछित rotenone के साथ तत्काल ड्रोसोफिला माध्यम की 3 जी पुनर्गठित(या ब्याज की एक और दवा) खुराक.
- खाद्य मिश्रण फर्म (लगभग 5 मिनट) हो गई है, ध्यान से निर्माता के रूप में उच्च लगभग 1 सेमी पारदर्शी ट्यूब (5 मिमी x 65 मिमी) की आपूर्ति की जा करने के लिए खाद्य लोड. ध्यान से भोजन में खड़ी ट्यूब रखने और वे ट्यूब के अंदर भोजन के साथ हटाया जा सकता जब तक उन्हें घुमा द्वारा ट्यूबों के लिए खाद्य संचार दवा जोड़ें. नोट: यह एक निर्वात पैदा करने के लिए ट्यूब के उद्घाटन पर एक उंगली जगह के लिए उपयोगी है. खाद्य किसी भी हवाई बुलबुले होते हैं या मक्खियों अटक बन सकता है के रूप में एक असमान सतह नहीं होना चाहिए.
- प्रायोगिक सेटअप
- खाद्य निकटतम ट्यूब के सिरे पर एक प्लास्टिक की टोपी रखें. जबरदस्ती करने के लिए धक्का दिया तो यह शीशी में एक हवाई बुलबुले बना सकते हैं, के रूप में जितना संभव हो कम ट्यूब पर प्लास्टिक की टोपी पुश.
- शांत 1 दिन पुरानी पुरुष सीओ 2 का उपयोग और ध्यान से 1 पुरुष एक तूलिका के साथ एक ट्यूब में मक्खी डालने मक्खियों. वांछित परीक्षणों की संख्या के आधार पर दोहराएँ.
- प्लगहाथ बड़ा स्टोर से लुढ़का कर सकते हैं जो एक छोटे से कपास की गेंद के साथ भोजन से ट्यूब दूर, के अंत कपास गेंदों खरीदा.
- मक्खियों 15 मिनट के लिए एक क्षैतिज स्थिति में ट्यूब के साथ ठीक हो और सब मक्खियों जीवित और सक्रिय हैं यह सुनिश्चित करने के लिए अनुमति दें. बांध में ट्यूब डालें और सभी ट्यूब बांध के लिए एक ही स्थिति के सापेक्ष में हैं कि सुनिश्चित करें. नोट: यह शीशी के बीच में निगरानी के क्षेत्र के साथ उनके स्थान पर, या ट्यूब के अंत नजर रखी जा रही है, ताकि पक्ष को सभी शीशियों पुश करने के लिए संभव है. नोट: इस विधि में बदलाव के लिए चर्चा देखें.
- डाटा संग्रह
- एक 12 घंटा अंधेरे में बांध रखें, 12 घंटा प्रकाश इनक्यूबेटर 25 डिग्री सेल्सियस के लिए निर्धारित किया है. डेटा संग्रह प्रणाली को बांध कनेक्ट करें. बांध सॉफ्टवेयर खोलें और प्राथमिकताओं का चयन बिन लंबाई के तहत 10 मिनट के लिए. डेटा संग्रह शुरू और कार्यक्रम 7 दिनों के लिए डेटा इकट्ठा करने के लिए अनुमति देते हैं. नोट: यदि आवश्यक बिन लंबाई समायोजित किया जा सकता.
- डेटा विश्लेषण
नोट: प्रक्रियाडेटा लंबी अवधि सहज हरकत के लिए एक उपाय के रूप में प्रति मिनट मायने रखता प्राप्त करने के लिए.- चुनिंदा इनपुट डेटा क्लिक करके ओपन बांध फ़ाइल स्कैन कार्यक्रम और उपयोग की निगरानी डेटा.
- उचित निगरानी सीमा का चयन करें और 10 मिनट के अंतराल को बिन लंबाई का चयन करें.
- आउटपुट फ़ाइल प्रकार में चैनल फ़ाइलों का चयन करें. डिफ़ॉल्ट के रूप में अन्य सभी विकल्पों को छोड़ दें.
- स्कैन डेटा क्लिक करें और एक निर्दिष्ट फ़ोल्डर में सहेजें.
- एक circadian डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर में आयात डाटा मिनट प्रति मायने रखता प्राप्त करने के लिए. नोट: डेटा विश्लेषण Clocklab सॉफ्टवेयर आमतौर पर इस्तेमाल किया जाता है. अन्य विकल्प भी उपलब्ध हैं.
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Representative Results
ड्रोसोफिला डराना प्रेरित हरकत परख
Wildtype, केंटन एस, मक्खियों 30 सेकंड (चित्रा 1) के बाद डबल शीशी तंत्र की, क्रमशः केवल लगभग 88% और ऊपर और नीचे वर्गों में मक्खियों के 5% के साथ एक मजबूत नकारात्मक geotactic प्रतिक्रिया देखी गई. 125 माइक्रोन और 3 दिनों के लिए 250 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों शीर्ष अनुभाग और नीचे खंड में मक्खियों की संख्या में मामूली वृद्धि में मक्खियों की संख्या में मामूली कमी देखी गई. 500 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों मक्खियों (चित्रा 1) पर नियंत्रण की तुलना में नीचे खंड में शीर्ष अनुभाग में कम मक्खियों और अधिक मक्खियों इसका सबूत के रूप में नकारात्मक geotactic प्रतिक्रिया (पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना) में महत्वपूर्ण दोष दिखाया. कारण तेजी से तंत्र में चढ़ने की अक्षमता को नकारात्मक geotactic जवाब में यह दोष डराना में में एक दोष का संकेत हैपेश हरकत.
ड्रोसोफिला स्वतःस्फूर्त हरकत परख
Wildtype, केंटन एस, मक्खियों बांध में चौथे दिन पर सहज गतिशीलता का एक उपाय के रूप में (चित्रा 2) प्रति मिनट 0.57 मायने रखता दिखाया. 125 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों सहज हरकत की एक समान स्तर दिखाया. इसके विपरीत, 250 माइक्रोन से अवगत कराया और 500 माइक्रोन rotenone लगभग 50% कम उपायों सहज हरकत की (पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना) (चित्रा 2) से पता चला है मक्खियों. इन मक्खियों सहज हरकत में एक rotenone प्रेरित दोष का संकेत है जो प्रति मिनट के बारे में 0.20 मायने रखता है, पर ले जाया गया.
Rotenone प्रदर्शन के कारण नहीं हरकत में प्रारंभिक विसंगतियों (यदि हो तो) के लिए खाते में करने के लिए, हम दिन 4 और दिन 3 नियंत्रण मक्खियों के बीच हरकत डेटा घटाया spontaneo में प्रति मिनट 0.1 के बारे में गिनती की वृद्धि देखी गईमक्खियों 125 माइक्रोन rotenone के संपर्क में प्रति मिनट के बारे में 0.15 मायने रखता है (चित्रा 3) के एक मामूली कमी का प्रदर्शन किया है, जबकि अमेरिका, दिनों के बीच हरकत. 250 माइक्रोन और 500 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों मतभेद लगभग 0.3 और 0.5 के साथ जा रहा दिनों के बीच हरकत में अधिक गंभीर घटने प्रदर्शित (पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना) क्रमश: प्रति मिनट में गिना जाता है. इस डेटा rotenone के लिए जोखिम के साथ समय के साथ सहज हरकत में कमी का सुझाव और उपरोक्त ही दिन विश्लेषण की पुष्टि करता है - rotenone के उच्च dosages के संपर्क में मक्खियों सहज हरकत में कमी देखी गई. साथ में ले ली, इन तरीकों मज़बूती से सहज में rotenone प्रेरित कमियों को मापने और डराना प्रेरित हरकत.
1. डराना प्रेरित हरकत साजिश चित्राrotenone की खुराक में वृद्धि के संपर्क में मक्खियों. जंगली प्रकार, केंटन एस, पुरुष मक्खियों 3 दिन और जीवित मक्खियों (8-12) के लिए rotenone के अलग खुराकों से अवगत कराया गया तो डबल शीशी तंत्र के तल में उपयोग किया गया. 500 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों शीर्ष (ए) में मक्खियों के प्रतिशत में एक महत्वपूर्ण कमी दिखाने के लिए और 30 सेकंड के बाद तंत्र के नीचे खंड (ख) में मक्खियों के प्रतिशत में वृद्धि हुई है. इस rotenone के संपर्क में मक्खियों में डराना प्रतिक्रिया में कमी का संकेत है. कॉलम 6 स्वतंत्र प्रयोगों का औसत प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करते हैं. त्रुटि सलाखों मतलब की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करते हैं; * पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना.
मक्खियों की चित्रा 2 स्वतःस्फूर्त हरकत साजिश बढ़ती खुराक से अवगत करायाजोखिम साजिश रची गया के बाद rotenone. जंगली प्रकार, केंटन एस के एस, पुरुष मक्खियों चौथे दिन प्रति मिनट अलग rotenone के dosages और गिनती के लिए खुल गए थे. गिनता एक बांध में मापा गया. 250 माइक्रोन और 500 माइक्रोन rotenone के संपर्क में मक्खियों प्रति मिनट की गिनती में कमी दिखाते हैं. इस rotenone के संपर्क में मक्खियों में सहज हरकत में कमी का संकेत है. कॉलम 5 स्वतंत्र परीक्षणों के चौथे दिन पर प्रति मिनट औसत गिना जाता प्रतिनिधित्व करते हैं. त्रुटि सलाखों मतलब की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करते हैं; * पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना.
Rotenone की खुराकों में वृद्धि के संपर्क में मक्खियों की सहज हरकत साजिश में 3 चित्र बदलें. जंगली प्रकार, केंटन एस, पुरुष मक्खियों अलग rotenone के dosages और मिनट ओ प्रति मायने में अंतर से अवगत कराया गयाn प्रदर्शन के बाद तीसरे और चौथे दिन साजिश रची गया. गिनता एक बांध में मापा गया. हरकत में एक और अधिक नकारात्मक परिवर्तन होने अधिक मात्रा के संपर्क में मक्खियों के साथ सहज हरकत में आई गिरावट के लिए एक खुराक निर्भर प्रवृत्ति है. इस आंदोलन में कमी का संकेत है. कॉलम 5 स्वतंत्र परीक्षणों की प्रति मिनट हरकत में औसत परिवर्तन का प्रतिनिधित्व करते हैं. त्रुटि सलाखों मतलब की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करते हैं; * पी <0.05 एनोवा, Bonferroni जोड़ी बुद्धिमान तुलना.
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Discussion
इस अध्ययन में, हम पार्किंसंस रोग के एक rotenone प्रेरित ड्रोसोफिला मॉडल में लंबी अवधि के सहज हरकत और अल्पकालिक डराना प्रेरित हरकत दोनों को मापने के लिए दो प्रक्रियाओं का वर्णन. एक भी पार्किंसंस रोग जैसे मॉडल के लिए जाना जाता है अन्य औषधीय एजेंटों, Paraquat 14, पार्किंसंस रोग जैसे की आनुवंशिक मॉडल, अल्फा synuclein म्यूटेंट 15, और हरकत को प्रभावित रोगों के अन्य मक्खी मॉडल के संपर्क में मक्खियों में इन हरकत विशेषताओं उपाय कर सकते हैं. दोनों तरीकों के लिए, वैकल्पिक तरीकों और संशोधनों पर विचार किया जा सकता है. मक्खियों सीओ 2 प्रभाव बंद पहनते जाने के लिए डेटा संग्रह में उदाहरण के अंतराल के लिए सीओ 2 anesthetization की सीमाओं को कम कर सकता है जो बर्फ, का उपयोग anesthetized किया जा सकता है.
मक्खियों गतिशीलता में circadian भिन्नता दिखाने के बाद से डराना प्रेरित हरकत परख में, इसके बारे में एक ही समय में डेटा एकत्र करने के लिए महत्वपूर्ण हैप्रयोगों के बीच दिन. यह संज्ञाहरण के बिना परीक्षण उपकरण में मक्खियों को पेश करने के लिए भी महत्वपूर्ण है. समय 10,11,15,16 के एक पूर्व निर्धारित राशि में एक सीमा से गुजर का एक स्नैपशॉट पर भरोसा करते हैं, जो सबसे डराना प्रतिक्रिया हरकत assays, के विपरीत, तेजी से चलने का नकारात्मक geotaxis (रिंग) परख 17,18 के समान हमारे दृष्टिकोण,, पर नज़र रखता है समय की अवधि में लगातार कई उदाहरणों पर आंदोलन. विभिन्न क्षेत्रों में मक्खियों के वितरण की सतत निगरानी की यह दृष्टिकोण उपचार समूहों के बीच सूक्ष्म अंतर को हल कर सकते हैं. साथ ही, क्षेत्र के कई क्षेत्रों में मक्खियों के प्रतिशत की गणना के हमारे दृष्टिकोण डेटा में outliers के योगदान को कम करने में मदद कर सकते हैं.
हम भी व्यवस्थित उपचार समूहों की तुलना करने के लिए डेटा लेने के लिए जो समय बिंदु पर फैसला किया. 1 मिनट के लिए डेटा हर 5 सेकंड लेने के बाद, हम डेटा साजिश रची और उपचार के बीच सबसे उल्लेखनीय मतभेद ख सकता है पायाई 30 सेकंड में देखा. इस समय बिंदु के बाद, rotenone के संपर्क में मक्खियों उनकी हरकत दोष के लिए क्षतिपूर्ति करने में सक्षम हैं. इसलिए हम सबसे अच्छा उनके नियंत्रण और प्रयोगात्मक सेट के बीच मतभेदों को दूर करने के लिए डाटा अधिग्रहण के समय का अनुकूलन करने के लिए उपयोगकर्ताओं की सलाह देते हैं. यह दृष्टिकोण भी औषधीय एजेंटों और / या आनुवंशिक मॉडलों के बीच सापेक्ष हरकत की कमी का निर्धारण करने का लाभ दिया है. उदाहरण के लिए, rotenone की तुलना में एक अधिक जहरीले रसायन 30 सेकंड समय बिंदु से पहले सबसे उल्लेखनीय मतभेद दिखा सकते हैं.
मक्खियों ट्यूबों में उन्हें पेश करने anesthetized हैं के बाद से लंबे समय तक सहज हरकत परख के लिए, पहनने बंद निगरानी ट्यूबों में मक्खियों की और पारिस्थितिक अनुकूलन के लिए संज्ञाहरण के लिए अनुमति देने के लिए पहले 24-48 घंटे से डेटा पर विचार नहीं है. इस परख के लिए एक और विचार ट्यूब और हम सहज हरकत डेटा को प्रभावित कर सकते हैं, जो बांध में गति संवेदक, के रिश्तेदार की स्थिति है. हम निगरानी में मक्खियों युक्त ट्यूबों रखाआमतौर पर circadian पढ़ाई में बांध के पारंपरिक उपयोग में किया जाता है तो सेंसर खाद्य और नहीं से ट्यूब के बीच ट्यूब दूर के एक तिहाई अवधि निगरानी कर रहा है. इस ट्यूब की लंबाई कम से कम दो तिहाई पार करने के लिए मक्खियों की क्षमता की जांच करने की अनुमति दी और अधिक सुसंगत डेटा का नेतृत्व किया. यह गतिविधि मायने रखता कारण आंदोलन फटने और / या हिल phenotype के लिए rotenone खिलाया मक्खियों में प्रभावित हो सकता है कि संभावना है. गतिविधि की गिनती के लिए अन्य संभावित कारकों एक स्वाद और / या rotenone और उपयोगकर्ता के लिए ब्याज की अन्य रसायनों की दिशा में एक घ्राण घृणा / आकर्षण हो सकता है. इसलिए अतिरिक्त वीडियो ट्रैकिंग 17,19 हरकत phenotype के एक अधिक गहन विश्लेषण के लिए बांध डेटा पूरक करने के लिए नियोजित किया जा सकता.
नियंत्रण मक्खियों की तुलना में प्रयोगात्मक मक्खियों इसी तरह की गतिविधि में गिना जाता है जहां एक परिदृश्य में, यह वे च के बाद आंदोलन की circadian वितरण में मतभेद है कि संभव हैझूठ एक 12 घंटा प्रकाश 12 घंटा अंधेरे चक्र में संक्रमण पर / बंद / पर प्रकाश चारों ओर और बंद अधिक सक्रिय हैं. इसलिए, यह हरकत का सही वितरण निर्धारित करने के लिए एक 24 घंटे की अवधि में समय अंक और बिन लंबाई एकाधिक पर प्रति मिनट मायने रखता है निर्धारित करने के लिए मददगार होगा. अंत में, नहीं डराना के जवाब में आंदोलनों तक सीमित आंदोलन विशेषताओं का आकलन करने की क्षमता की वजह से इस परख,, हरकत दोष और उपचारात्मक रणनीतियों के लक्षण वर्णन में नए अंतर्दृष्टि प्रदान करेगा.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखकों पृष्ठभूमि संगीत प्रदान करने के लिए, वीडियो प्रसंस्करण और एरिक थॉमस, संगीत विभाग, कोल्बी कॉलेज के साथ तकनीकी सहायता के लिए, Qiuli वैंग, भाषा संसाधन केंद्र, कोल्बी कॉलेज को धन्यवाद देना चाहूंगा. इस परियोजना अनुसंधान संसाधन, INBRE के लिए राष्ट्रीय केन्द्र (P20RR016463-12), जनरल मेडिकल साइंसेज के लिए राष्ट्रीय संस्थान (P20 GM103423-12) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, स्वास्थ्य और विज्ञान प्रभाग अनुदान, कोल्बी कॉलेज (एसटीए) के राष्ट्रीय संस्थान. जीएल और LWM ग्रीष्मकालीन विद्वान फंड, कोल्बी कॉलेज से अनुदान द्वारा समर्थित थे.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Standard narrow vials | Genesee Scientific | 32-120 | |
| Rotenone | Sigma | R8875 | Store in freezer, make fresh for each experiment |
| Dimethyl Sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418 | Solvent for rotenone |
| Instant Drosophila medium | Carolina Biological | Formula 4-24 | |
| Drosophila activity monitor (DAM) | Trikinetics | DAM2 | trikinetics.com |
| DAM tubes | Trikinetics | Tubes 5 X 65 mm | |
| Recipe for Rotenone + food (125 mM dose) | Make 62.5 mM rotenone stock solution in DMSO by dissolving 25 mg rotenone in 1 ml DMSO; For 125 mM dose, add 10 mM rotenone stock in DMSO to 5 ml water. |
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