Introduction
Dalla prima descrizione nel 2001 da tre gruppi indipendenti 1-3 i n utero elettroporazione è diventato uno strumento standard ampiamente utilizzato per analizzare l'espressione genica nel sistema nervoso centrale dei roditori. Rispetto alla generazione di topi knockout, che è, nonostante le tecniche di continuo miglioramento, ancora di tempo e denaro che consumano, i ricorsi in utero elettroporazione a causa della sua semplicità. Così, in utero elettroporazione consente GAIN- veloce ed efficiente e la perdita di funzione studi 4.
Per trasfettare le regioni cerebrali, la soluzione contenente il plasmide carica negativa viene iniettato in un ventricolo. Durante l'impulso elettrico, il DNA carico negativamente migra verso il polo positivo e quindi la regione trasfettate è selezionabile semplicemente modificando la posizione del polo positivo. E 'stato spesso dimostrato che numerose regioni del sistema nervoso centrale possono essere targeted 3,5-8. Ad esempio, recenti studi dimostrano trasfezioni specifiche del ippocampo, la corteccia piriforme o striato 9-11. Tuttavia, le informazioni sulle posizioni appropriate sono spesso solo poco standardizzato e non sono sempre facili da trasferire a diversi ceppi di topi.
Trasfezione di alcune fasi embrionali è tutt'altro che banale. Molti fattori influenzano devono essere presi in considerazione quando si sceglie il set-up per specifici elettroporazione in utero. In primo luogo, per trasfettare in modo ottimale i rispettivi stadi embrionali, è necessaria la conoscenza delle tensioni del caso. Tensioni elevate riducono il tasso di sopravvivenza, mentre basse tensioni riducono l'efficienza di trasfezione 2,3,12. Anche le dimensioni del paddle dell'elettrodo gioca un ruolo fondamentale, perché l'uso di piastre di elettrodi che sono troppo grandi risultati a ridotta specificità o possono causare la morte per affetto del ritmo cardiaco 4,12,13. La applicatatensione e la dimensione e la posizione della pala dell'elettrodo sono le caratteristiche più importanti da considerare, ma ci sono anche altri fattori che influenzano il risultato della elettroporazione, come la quantità applicata di DNA-soluzione.
Abbiamo sviluppato un protocollo dettagliato che consente trasfezione veloce ed efficiente di varie regioni cerebrali del C57BL / 6 del mouse 12. In questo protocollo informazioni dettagliate sulle tensioni da utilizzare e la dimensione del paddle dell'elettrodo per una maggiore specificità è disponibile. Inoltre, informazioni riguardanti il ventricolo da riempire con raccomandazioni per la quantità di soluzione plasmide e la posizione dell'elettrodo è fornito. L'indicazione delle informazioni dettagliate sulla posizione in una cartina e l'ulteriore visualizzazione di queste posizioni permette specifico semplice ed efficiente in utero elettroporazione della corteccia retrosplenial, la corteccia motoria, la corteccia somatosensoriale, la corteccia piriforme, tegli cornu Ammonis 1-3, il giro dentato, lo striato, il nucleo settale laterali, il talamo e l'ipotalamo.
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Protocol
Etica Dichiarazione: Il trattamento dei topi e le procedure sperimentali sono state condotte in conformità agli orientamenti europei, nazionali e istituzionali per la cura degli animali.
1. In Utero Elettroporazione
Nota: In utero elettroporazione è stato eseguito come precedentemente pubblicato 12,14. Pertanto, il metodo è descritto brevemente nel seguito (figura 1).
- Preparativi
- Preparare veloce verde soluzione priva di endotossine color avanzato trasfezione qualità plasmide (contenente 1,5 pCAGGS) come descritto in precedenza 12.
- Tirare e macinare (35 ° angolo) capillari di vetro borosilicato (0,8-0,9 diametro) per preparazioni iniettabili.
- Sterilizzare gli strumenti.
- Chirurgia
- Somministrare analgesici (carprofen, 4 mg / kg di peso corporeo, sc, 24 ore) deposito di almeno 30 minuti prima di iniziare l'intervento chirurgico.
- Mantenere la lunghezza dellaanestesia ad un massimo di 35-45 min (Fase III - fase dell'anestesia chirurgici secondo Guedel 15 - massima 25-30 min).
- Anestetizzare topi cronometrati in gravidanza con isoflurano (induzione in una camera a 2,8%, la chirurgia tramite maschera: 2,5%). Confermare l'anestesia da non responsività ai piedi-pizzico.
- Applicare pomata occhio per prevenire la secchezza oculare durante l'anestesia.
- Sterilizzare l'area chirurgica con 7,5% di soluzione Providone-iodio e coprire il mouse con garza sterile (umido con una soluzione allo 0,9% di alcool benzilico soluzione fisiologica), con solo l'area chirurgica esposta.
- Tagliare aprire la cavità addominale con un bisturi (incisione cutanea: 1,5-2 cm, incisione muscolo: 1-1,5 cm).
- Preservare la cavità addominale aperta da secchi da inumidire con soluzione salina riscaldata alcool benzilico allo 0,9% o altra soluzione isotonica sterile, come indicato dal personale veterinario o del comitato.
- Estrarre attentamente corna uterine (con pinze ad anello, non toccare l'utero con le ditaS).
- L'iniezione di DNA ed elettroporazione. Nota: I dettagli esatti per il targeting regioni specifiche sono indicati nella sezione 2.
- Iniettare lentamente la soluzione di DNA colorato nel ventricolo come indicato nella figura 1 e la sezione 2 tramite i capillari borosilicato preparati.
- Applicare la tensione appropriata per il corrispondente stadio embrionale (ad es., 36-38 V per E14) tramite elettrodi specializzati forcipe tipo platino (ciclo intervallo di lunghezza 50 msec, intervallo di pausa 950 msec). Pulse le palette elettroporazione durante l'applicazione della tensione per minimizzare i danni della parete uterina.
- Messaggio elettroporazione / assistenza post-operatoria
- Ricollocare accuratamente le corna uterine nella cavità addominale.
- Suturare il muscolo e l'incisione cutanea separatamente.
- Lasciate che il resto del mouse su un dispositivo di supporto per il recupero termico.
- Sorvegliare il mouse durante il recupero (comportamento, alimentazione econsumo di acqua), 4 ore, 24 ore e 48 ore dopo l'intervento chirurgico. Se necessario, applicare analgesici supplementari (carprofen, 4 mg / kg di peso corporeo, 24 ore deposito) per altri 2 giorni.
2. Trasfezione di aree cerebrali specifiche
Nota: La posizione del polo positivo è mostrato come l'angolo tra la linea centrale verticale attraverso il ventricolo riempito con la soluzione di DNA (ventricolo destro o terzo) e la posizione del polo positivo. Durante il riempimento del ventricolo sinistro le posizioni sono speculare. In Figura 4 sono mostrate le posizioni primordiale dell'orecchio, che forniscono importanti punti di riferimento.
- Trasfezione di aree corticali (Figura 2A, Tabella 1).
- Eseguire un intervento chirurgico come descritto nella sezione 1.2. Per l'elettroporazione in utero di aree corticali utilizzare embrioni E14.
- Iniettare 1,5-2 microlitri DNA-soluzione contenente 4 mg di DNA nel ventricolo laterale destroattraverso il capillare borosilicato preparati.
- Posizionare accuratamente l'embrione utilizzando una pinza ad anello in modo che non ci sono vasi visibili sopra il sito di puntura.
- Iniettare lentamente il DNA-soluzione circa 0,75 mm coronale dalla sutura lambdoidal e 0,5 mm lateralmente dalla sutura sagittale (Figura 3). Assicurarsi che la profondità di inserimento è di 1,2 mm (E14, misurata dalla parete uterina). Verificare la presenza di una colorazione blu-verde con una demarcazione tagliente.
- Applicare tensione tramite gli elettrodi di platino forcipe tipo specializzati (ciclo intervallo di lunghezza 50 msec, tempo di pausa 950 msec).
- Utilizzare un elettrodo pala 3 o 5 mm.
- Utilizzare una tensione compresa 36-38 V.
- Posizionare il centro degli elettrodi solo anteriori dei primordi dell'orecchio.
- Per trasfettare gli angoli uso corteccia retrosplenial 330-0 °, per trasfettare la corteccia motoria 0-40 °, per trasfettare la corteccia somatosensoriale 40-95 °, per trasfettarela corteccia piriforme 95-110 ° (Figura 2A).
- Eseguire elettroporazione / assistenza post-operatoria dopo come descritto nel paragrafo 1.4. Sacrifica i topi e analizzare gli embrioni 4 giorni dopo l'elettroporazione (E18), come descritto nella sezione 3.
- Transfection dell'ippocampo (Figura 2B, Tabella 1).
- Eseguire un intervento chirurgico come descritto nella sezione 1.2. Per l'elettroporazione in utero di formazione dell'ippocampo utilizzare embrioni E15.
- Iniettare 2 microlitri DNA-soluzione contenente 4 mg di DNA nel ventricolo laterale destro attraverso il capillare borosilicato preparati.
- Applicare tensione tramite gli elettrodi di platino forcipe tipo specializzati (ciclo intervallo di lunghezza 50 msec, tempo di pausa 950 msec).
- Utilizzare un elettrodo pala 3 o 5 mm.
- Utilizzare una tensione compresa 38-40.
- Posizionare il centro del polo negativo appena anteriore del primordio orecchio e il centro of il polo positivo al centro della primordium orecchio.
- Per trasfettare giro dentato utilizzano angoli 190-210 °, per trasfettare il Ammonis cornu (CA) 3 210-230 °, per trasfettare il CA2 230-250 °, per trasfettare il CA1 250-275 ° (Figura 2B).
- Eseguire elettroporazione / assistenza post-operatoria dopo come descritto nel paragrafo 1.4. Eseguire l'analisi dopo la formazione dell'ippocampo completa (dopo la nascita, p21), come descritto nella sezione 3.
- Transfection del laterali nucleo settale e striato (Figura 2C, tabella 1)
Nota: Gli angoli si sovrappongono con quelli transfecting l'ippocampo. Per trasfettare efficacemente il nucleo settale laterale e striato senza indesiderate ippocampo transfezione fasi precedenti embrionali (E12) devono essere utilizzati.- Eseguire un intervento chirurgico come descritto nella sezione 1.2. Per l'elettroporazione in utero del nucleo settale laterale e striatum utilizzare embrioni E12.
- Iniettare 1 ml di DNA-soluzione contenente 4 mg di DNA nel ventricolo laterale destro attraverso il capillare borosilicato preparati.
- Applicare tensione tramite gli elettrodi di platino forcipe tipo specializzati (ciclo intervallo di lunghezza 50 msec, tempo di pausa 950 msec).
- Utilizzare un elettrodo 0,5 mm.
- Utilizzare 33 V.
- Posizionare il centro degli elettrodi a livello dei primordi dell'orecchio.
- Per trasfettare le uso angoli del setto nucleo laterali 100-170 °, per trasfettare striato 170-240 ° (Figura 2C).
- Eseguire elettroporazione / assistenza post-operatoria dopo come descritto nel paragrafo 1.4. Sacrifica i topi e analizzare gli embrioni 6 giorni dopo l'elettroporazione (E18), come descritto nella sezione 3.
- Trasfezione del talamo e ipotalamo (Figura 2D, Tabella 1)
- Eseguire un intervento chirurgico come descritto nella sezione 1.2. Per l'in utero elettroporazione delle talamo e ipotalamo uso E12-E13 embrioni.
- Iniettare 1-1.5-DNA microlitri soluzione contenente 4 mg DNA nel ventricolo laterale (sinistro o destro) attraverso il capillare borosilicato preparati. Attendere 2-3 minuti, fino a quando la soluzione viene diffuso nel terzo ventricolo. In alternativa iniettare direttamente nel terzo ventricolo.
Nota: Questo migliora la specificità, ma potrebbe causare un tasso di sopravvivenza ridotta (alto rischio di danni). - Applicare tensione tramite gli elettrodi di platino forcipe tipo specializzati (ciclo intervallo di lunghezza 50 msec, tempo di pausa 950 msec).
- Utilizzare un elettrodo 0,5 o 3 mm.
- Utilizzare una tensione compresa 33-35 V.
- Posizionare il centro degli elettrodi appena posteriore i primordi dell'orecchio.
- Per trasfettare gli angoli uso talamo 25-40 °, per trasfettare l'ipotalamo 90-180 ° (Figura 2D).
- Eseguire posta elettroporazione / assistenza post-operatoria come described nella sezione 1.4. Sacrifica i topi e analizzare gli embrioni 6 giorni dopo l'elettroporazione (E18), come descritto nella sezione 3.
3. Fissazione perfusione
- Preparativi
- Warm 4% paraformaldeide (PFA) a 37 ° C.
- Riempire una siringa da 50 ml con PBS (4 ° C) e una seconda siringa con riscaldato PFA. Evitare le bolle.
- Collegare le siringhe a un rubinetto a tre vie. Collegare il terzo fine di un set di infusione alato (farfalla).
- Lavare il set di infusione alato con PBS.
- Perfusione
- Profondamente anestetizzare topi (gravidanza o postnatale trasfettate) con l'applicazione sottocutanea di ketamina cloridrato (60 mg / kg) e xilazina (7,5 mg / kg).
- Confermare la fase chirurgica tolleranza refrattarietà ai piedi-pizzico.
- Aprire la cavità addominale appena sotto la gabbia toracica.
- Tagliare con cautela la membrana.
- Aprire con cautela la gabbia toracica mediante un taglio sull'esito ach fino alla clavicola.
- Inserire la punta della farfalla nella camera del cuore sinistro (partendo dalla punta del cuore).
- Tagliare l'appendice atriale sinistra.
- Lentamente profumato il mouse con PBS (circa 10 ml).
- Accendere il rubinetto a tre vie.
- Profumato il mouse con 5-10 ml 4% PFA.
- Decapitare il mouse utilizzando le forbici e sezionare il cervello a partire dalla forame magno. Eseguire la dissezione come precedentemente pubblicato 16.
- Postfixate il cervello per 2 giorni a 4% PFA. Mantenere il cervello a 4 ° C al buio.
4. immunoistochimica
- Genera 70 sezioni micron (ad esempio, con un vibratome).
- Opzionale: incrementare la fluorescenza con l'anticorpo colorazione.
- Bloccare le sezioni per 1 ora a RT (0,1-0,2% Triton X-100, siero di capra normale 5%)
- Incubare O / N con l'anticorpo appropriata (anti-GFP, 1: 1.000)
- Lavare 3-5 Volte con tampone fosfato 0,1 M.
- Incubare 3-5 ore con l'appropriato anticorpo secondario fluorescenza coniugato (Alexa Fluor 488 coniugato anti-coniglio IgG, 1: 1.000).
- Opzionale: Controcolorare con 4-6-diaminodino-2-fenilindolo (DAPI, 0,2 g / ml in tampone fosfato 0,1 M) per 1 min.
- Analizzare fluorescenza con un microscopio a fluorescenza appropriata.
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Representative Results
La figura 2 mostra esempi di specifica in utero elettroporazione delle regioni in via di sviluppo nella corteccia retrosplenial, la corteccia motoria, la corteccia somatosensoriale, la corteccia piriforme, il cornu Ammonis 1-3, il giro dentato, lo striato, il nucleo settale laterali , il talamo e l'ipotalamo. I risultati delle trasfezioni sono confrontate con l'angolazione consigliata (Figura 2). Per una migliore visualizzazione degli angoli in vivo la posizione dell'elettrodo (0,5 mm) sono anche mostrato un embrione (Figura 5, embrione in utero, embrione sacco amniotico, embrione sezionato). Al fine di fornire una tabella panoramica 1 ha riassunto i fatti rilevanti per la trasfezione specifica.
Inoltre, è stato dimostrato che la dimensione dell'elettrodo gioca un ruolo cruciale per la specificità (Figura 6). Più grande dimensione delle pale elettrodi comporta larger aree trasfettate, esemplare mostrato nella Figura 6. Inoltre, gli elettrodi che sono troppo grandi copertura troppo dell'embrione, migliorando così il rischio di influenzare il ritmo cardiaco embrioni (Figura 7). Ad esempio un elettrodo a pale 10 mm copre l'intero embrione E12 (Figura 7).
Figura 1. In utero elettroporazione. Step di base delle prestazioni della elettroporazione in utero sono presenti. (A) mostra l'intero setup della chirurgia, con il mouse posizionato su una piastra già anestetizzati con isoflurano. (B) La disinfezione dell'area chirurgica è un passo fondamentale prima di aprire la cavità addominale (C) del mouse. (D) La soluzione contenente DNA è colorata con Fast Green, che consente la visualizzazione di iniezione di successo (E, F). Iniezione di successo in un ventricolo laterale si traduce in punto a forma di mezzaluna. (G) Dopo l'iniezione della tensione appropriata è applicata mediante elettrodi di platino tipo pinze. (H) Dopo aver sostituito accuratamente l'utero nella cavità addominale della ferita chirurgica viene suturata. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Angle-map per elettroporazione di aree specifiche nella corteccia murino, ippocampo, laterale settale nucleo striato, talamo e ipotalamo. Le posizioni appropriate per il polo positivo e negativo, è indicata nel disegno schematico. Per (AC ng>) le posizioni sono indicate per l'iniezione del DNA-soluzione nel ventricolo destro. Per le iniezioni nel ventricolo sinistro, gli angoli sono speculare. Le trasfezioni specifici sono stati istologicamente verificati. (A) mostra la posizione del polo positivo e negativo per trasfettando aree corticali (la corteccia retrosplenial (RSC), la corteccia motoria (MC), la corteccia somatosensoriale (SSC) e la corteccia piriforme (PC). (B) Indica la posizioni del polo positivo e negativo per la trasfezione le formazioni dell'ippocampo (la cornu Ammonis 1-3 (CA1, CA2, CA3) e il giro dentato (DG). (C) mostra le posizioni del polo positivo e negativo per trasfezione striato (STR) e il nucleo settale laterale (LS). (D) Mostra le appropriate posizioni degli elettrodi per transfecting il talamo (TH) e l'ipotalamo (HY). Adattato da Baumgart J. & Grebe N. 2015 12. ps: //www.jove.com/files/ftp_upload/53303/53303fig2large.jpg "target =" _ blank "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3. puntura. La posizione ottimale per l'iniezione della soluzione di DNA è circa 0,75 mm coronale dalla sutura lambdoidal e 0,5 mm laterale dalla sutura sagittale. Fate clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4. Posizione del primordium orecchio. La posizione del primordium orecchio è chiaramente definito (freccia).nk "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 5. Visualizzazione degli angoli di un embrione. Per una migliore visualizzazione delle posizioni appropriate per il polo positivo (indicato con un segno più blu) e il negativo per trasfezioni specifiche delle aree corticali (corteccia retrosplenial, corteccia motoria, corteccia somatosensoriale, Piriform corteccia), le aree dell'ippocampo (Cornu Ammonis (CA) 1-3, giro dentato (DG)),il nucleo settale laterali, lo striato, il talamo e ipotalamo vengono visualizzati su un embrione in utero, un embrione nel sacco amniotico e su un embrione sezionato (tutto E15,5). Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 6. Specificità trasfezione seconda delle dimensioni dell'elettrodo. Aumento delle dimensioni della pala dell'elettrodo riduce la specificità della trasfezione. Ciò è particolarmente evidente nelle fasi embrionali giovani (E12, in alto), ma anche visibile in fase embrionale tardiva (E17, in basso). Adattato da Baumgart J. & Grebe N., 2015 12. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 7. Dimensione del paddle dell'elettrodo rispetto alla dimensione di un embrione E12. Elettrodi che sono troppo grandi copertura troppo dell'embrione e quindi aumentano il rischio di affetto del ritmo cardiaco. Ad esempio, un elettrodo 10 mm (a destra) copre l'intero embrione E12 e pertanto non è raccomandato, anche se la specificità non è l'obiettivo primario. Adattato da Baumgart J. & Grebe N., 2015 12. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
| Regione di destinazione | Angolo | Posizione dell'elettrodo | Età di embrione | Amou DNAnt / concentrazione | Voltaggio | Dimensioni dell'elettrodo | |
| Cortex retrosplenial | 330 ° - 0 ° | Centro degli elettrodi solo anteriore del primordi orecchio | E14 (E11-E17) | 1.5- 2 ml / 2.7- 2 mg / mL | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Corteccia motoria | 0 ° - 40 ° | Centro degli elettrodi solo anteriore del primordi orecchio | E14 (E11-E17) | 1.5- 2 ml / 2.7- 2 mg / mL | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Corteccia somatosensoriale | 40 ° - 95 ° | Centro degli elettrodi solo anteriore del primordi orecchio | E14 (E11-E17) | 1.5- 2 ml / 2.7- 2 mg / mL | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Piriform Cortex | 95 ° - 110 ° | Centro degli elettrodi solo anteriore del primordi orecchio | E14 (E11-E17) | 1.5- 2 ml / 2.7- 2 mg / mL | 36-3 8 | 3- 5 mm | |
| Cornu Ammonis (CA) 1 | 250 ° - 275 ° | Centro del polo positivo a metà del primordio orecchio | (E14-) E15 | 2 microlitri / 2 mg / mL | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| CA2 | 230 ° - 250 ° | Centro del polo positivo a metà del primordio orecchio | (E14-) E15 | 2 microlitri / 2 mg / mL | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| CA3 | 210 ° - 230 ° | Centro del polo positivo a metà del primordio orecchio | (E14-) E15 | 2 microlitri / 2 mg / mL | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| Giro dentato | 190 ° - 210 ° | Centro del polo positivo a metà del primordio orecchio | (E14-) E15 | 2 microlitri / 2 mg / mL | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| Striatum | 170 ° - 240 ° | Centro degli elettrodi a livello del primordia orecchio | E12 | 1 ml / 4 mg / mL | 33 | 0,5 mm | |
| Laterale setto Nucleus | 100 ° - 170 ° | Centro degli elettrodi a livello del primordia orecchio | E12 | 1 ml / 4 mg / mL | 33 | 0,5 mm | |
| Talamo | 25 ° - 40 ° | Centro delle electodes solo posteriormente il pri orecchiomordia | E12- E13 | 1-1,5 ml / 4-2,7 mg / mL | 33- 35 | 0,5- 3 millimetri | |
| Ipotalamo | 90 ° - 180 ° | Centro delle electodes solo posteriormente il primordia orecchio | E12- E13 | 1-1,5 ml / 4-2,7 mg / mL | 33- 35 | 0,5- 3 millimetri | |
Tabella 1:. Sintesi dei risultati Inclusi in questa tabella è tutte le informazioni utili per specifiche trasfezione delle aree corticali descritte. Esso contiene dettagli sulla regione di destinazione, l'angolo, la posizione dell'elettrodo, stadio embrionale, la quantità applicata e la concentrazione della soluzione di DNA, la tensione e la dimensione dell'elettrodo.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EndoFree Plasmid Maxi Kit | QIAGEN | 12362 | |
| Fast Green | Roth | 0301.1 | |
| pCAGGS | Addgene | ||
| borosilicate glass capillaries (0.8-0.9 mm diameter) | Wold Precision Instrument Inc. | 1B100F-4 | |
| Isoflurane (Forene) | Abbott | PZN 4831850 | |
| Carprofen (Rimadyl) | Pfizer GmbH | approval number: 400684.00.00 | |
| eye ointment (Bepanthen Augen und Nasensalbe) | Bayer | PZN 01578681 | |
| 0.9% benzyl alcohol 0.9% saline solution | Pharmacy of the University Medical Center Mainz |
||
| gauze (ES-Kompressen) | Hartmann | 407835 | |
| sterile 5-0 Perma-Hand Silk Suture | Ethicon Johnson & Johnson | K890H | |
| ring forceps 1/ 1.5 mm | Fine Science Tools | 11101-09 | |
| ring forceps 4.8/ 6 mm | Fine Science Tools | 11106-09 | |
| ring forceps 2.2/ 3 mm | Fine Science Tools | 11103-09 | |
| Adson Forceps-Serrated Straight 12 cm | Fine Science Tools | 1106-12 | |
| IrisScissors-Delicate Straight-Sharp/Blunt 10 cm | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Mayo-Stille Scissors-Straight 15 cm | Fine Science Tools | 14012-15 | |
| Dumont #5 Forceps-Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Castroviejo NeedleHolder-with Lock-Tungsten Carbide 14 cm | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Elektroporator CUY21 SC | Nepa Gene Co. | ||
| FST 250 Hot Bead Sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Microgrinder EG-44 | Narishige | ||
| P-97 Micropette Puller | Sutter Instrument Company | P-97 | |
| Platinum electrodes 650P 0.5 mm | Nepagene | CUY650P0.5 | |
| Platinum electrodes 650P 3 mm | Nepagene | CUY650P3 | |
| Platinum electrodes 650P 5 mm | Nepagene | CUY650P5 | |
| Platinum electrodes 650P 10 mm | Nepagene | CUY650P10 | |
| Anesthesia system | Rothacher-Medical GmbH | CV-30511-3 Vapor 19.3 | |
| Heating plate | Rothacher-Medical GmbH | HP-1M | |
| Temperature Controller 220V AC | Rothacher-Medical GmbH | TCAT-2LV |
References
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