Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Exosomal miRNA Analyse på ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) pasient Plasma Gjennom qPCR: En Mulighets Flytende Biopsi Tool

Published: May 27, 2016 doi: 10.3791/53900
Automatic Translation
*1,2, *2,3, 4, 3, 5,6, 7,3, 8,3, 2,3
1Department of Biopathology and Medical Biotechnology, Section of Biology and Genetics, University of Palermo, 2Phase I-Early Clinical Trials Unit, Oncology Department, Antwerp University Hospital (UZA), 3Center for Oncological Research (CORE), Antwerp University, 4Department of Surgical, Oncological and Oral Sciences, Section of Medical Oncology, University of Palermo, 5Flemish Institute for Technological Research (VITO), 6CORE, Campus Groenenborger, Antwerp University, 7Molecular Pathology, Pathology Department, Antwerp University Hospital (UZA), 8Oncology Department, Antwerp University Hospital (UZA)
* These authors contributed equally

Introduction

Den lave overlevelse i NSCLC (ikke-småcellet lungekreft) pasienter er hovedsakelig på grunn av den begrensede effekten av behandlinger i avansert sykdom og dårlig tidlig deteksjon en. Aktiverende mutasjoner i EGFR-genet, som har blitt oppdaget i en undergruppe av NSCLC pasienter, er kjent for å gi følsomhet for tyrosinkinasehemmere (TKI). Dessverre, de fleste av EGFR muterte NSCLC pasienter utvikler TKI motstand 2. Spesielt i denne sammenheng, er obligatorisk en korrekt diagnose. Generelt, på grunn av lokalisering av tumorer skaffe vevsprøver i NSCLC er ikke alltid mulig. Derfor flere studier pågår som bruker ikke-invasive metoder for å få tak i disse biologiske data. Exosomes beskrives som flytende biopsi komponenter som kan bli undersøkt for å få diagnostiske og prognostiske verdier med ikke-invasive teknikker 3.

Exosomes er nanovesicles (40-100 nm diameter) av endocytic opprinnelse som er utgitt av ulike celletyper både i fysiologiske og patologiske tilstander 4. De kan bære protein, fett, mRNA og microRNAs. Dessuten flere studier antyder en pleiotropisk rolle av tumor avledet exosomes, som kan påvirke vekst og overlevelse av tumorceller, angiogenese, stromal og ekstracellulær matriks ombygging og medikamentresistens 5.

MicroRNAs (mirnas) er korte ikke-kodende RNA som er involvert i post-transkripsjonell regulering, binde det 3'-UTR av mål- mRNA og fører den til mRNA degradering eller til en ikke-oversettelse 6. Selektiv sortering av miRNAs i exosomes har blitt beskrevet. I denne sammenheng, ble nylig demonstrert in vitro og in vivo, en selektiv pakking av MIR-21 (en velkjent miRNA med onkogene effekter) i exosomes utgitt av kronisk myelogen leukemi-cellelinjer etter at curcumin behandling 7.

Deexosomal miRNA profilen er lik den miRNA profilen av den primære tumor, og denne funksjonen kan utnyttes i tidlig diagnose og prognose 3. Nærmere bestemt, er det en mulighet for å karakterisere, ved sanntids-PCR, er valgt mirnas korrelert med molekyl profilen til sykdom, f.eks., EGFR mutasjoner blant andre 8.

Her er analysen av et utvalgt panel av NSCLC-korrelert mirnas 8-9 rives som ble isolert fra exosomes utgitt i blodet hos pasienter med NSCLC. Etter å ha innhentet informere samtykke rapport fra pasientene, plasma på 12 NSCLC pasienter og 6 friske kontroller ble analysert. Den exosome isolasjon ble utført med kommersielt sett i henhold til produsentens protokoll. Før exosome isolering, ble plasmaprøver behandlet med RNAse, for å nedbryte forurensnings sirkulerende mirnas. Vi bestemte oss for å utføre denne analyse med et kommersielt sett på grunn av den begrensede standardisering av andre tekniskespørs (f.eks., ultrasentrifugering) som er spesielt viktig når du arbeider med kliniske prøver. Dette settet inneholder en proteinase K-behandling, noe som vil forringe RNase, og dermed reduserer risikoen for å bli dårligere exosomal mirnas etter exosome lyse. MikroRNA analyse ble utført av sensitiv og spesifikk Real-Time PCR-analyse; mir-1228-3p ble anvendt som en endogen kontroll og data ble normalisert i henhold til formelen 2 - ΔΔct. Kontroll verdier brukes som grunnlinjen og resultatene er vist i en logaritmisk skala.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Exosome Isolation

Merk: isolering av exosomes fra plasmaprøver ble utført med et kommersielt kit, i henhold til produsentens protokoll og ved å legge RNase behandling: (alle disse trinnene må utføres med personlige og miljø beskyttende utstyr og følgende spesifikk prosedyre for håndtering av biologiske prøver ).

  1. Ta 1 ml plasma fra hver prøve, lagret ved -80 ° C, og plassere den på is.
  2. Sentrifuger prøven ved 2000 x g i 20 minutter ved romtemperatur; dette avsnittet er obligatorisk for å fjerne celler og rusk.
  3. Overfør supernatanten inneholdende den rene plasma til et nytt 1,5 ml rør.
  4. Sentrifuger det nye røret ved 10.000 x g i 20 min ved RT.
  5. Overfør supernatanten inneholdende den rene plasma til et nytt 1,5 ml rør.
  6. Legg 100 ng / ml RNAse til supernatanten og inkuber i røret ved 37 ° C i 10 min iFor å fornedre sirkulerer RNA.
  7. Overfør alle behandlet plasma til en ny 2 ml tube og tilsett 0,5 volum 1x PBS.
  8. Vortex prøven for å blande oppløsningene.
  9. Tilsett 0,05 volumer av proteinase K-løsning (omslutte i settet) til prøven.
  10. Vortex prøven og deretter inkuberes ved 37 ° C i 10 min.
  11. Legg 0,2 volum av exosome presipitasjonsbuffer til prøven, og blande oppløsningene ved inversjon.
  12. Inkuber prøven ved 2 ° C til 8 ° C i 30 minutter og deretter sentrifuger prøven ved 10 000 x g i 5 min ved RT.
  13. Aspirer og kast supernatanten. Pelleten inneholder de isolerte exosomes.
  14. Legg valgte buffer til exosome pellet for å resuspendere exosomes. Utvelgelsen av bufferen er avhengig av nedstrøms analyse planlagt, i dette tilfellet:
    1. Tilsett 100 ul av 1 x PBS for å utføre TEM-analyse.
    2. Legg 346,5 mL av spesifikk lyse buffer for RNA ekstraksjon (fra kommersielt sett) (OBS: kjemisk fare).
    3. Tilsett 100 ul lyseringsbuffer for proteinekstraksjon (Tris-HCl 50 mM pH 7,6 - NaCl 300 mM - Triton X-100 0,5% - PMSF 1 mM - Leupeptin / Aprotinin 10 ug / ml) for å utføre Western blotting-analyse. (OBS: kjemiske farer).
  15. Oppbevar resuspendert exosomes ved -20 ° C.

2. Exosome Karakterisering av Western Blot Analysis

Merk: For å karakterisere de isolerte nanovesicles, er western blotting med antistoffer mot ALIX og TSG101 (kjente exosomal markører) anbefales.

  1. Etter resuspensjon av pelleten exosome i Lysis-buffer, plasserer den på is i 1 time for å oppløse den exosomal membranen.
  2. Sentrifuger løsningen ved 12 000 g i 10 minutter og overføres supernatanten til et nytt rør uten å forstyrre pelleten.
  3. Kvantifisere den totale exosomal protein Content ved Bradford-analyse eller andre fremgangsmåter og last 50 ug protein per brønn i en Tris / glysin SDS - 8% polyakrylamidgel. (OBS: kjemiske farer).
  4. Separere proteiner (og en passende molekylvekt markør) i 8% SDS-PAGE-gel-elektroforese med rennende buffer (25 mM Tris, 192 mM glycin, 0,1% SDS) i 1 time og 30 minutter ved 120 V. (Advarsel: kjemiske farer ).
  5. Overfør protein til en nitrocellulosemembran ved elektroblotting med 4 ° C kaldt overføringsbuffer (25 mM Tris, 192 mM glycin, 20% metanol) i 1 time ved konstant 50 V. (FORSIKTIG: kjemiske farer).
  6. Blokkere membranen i 1 time i langsom omrøring med 5% ikke-fett tørrmelk i 1 x TBS-Tween 0,1%.
  7. Vask membranen 4 ganger i 5 minutter i rask omrøring med 1 x TBS - Tween 0,1%.
  8. Legg de primære antistoffer mot ALIX og TSG101 (én per membran) i passende buffer (tilsvarende til antistoffet dataarket fra produsent) og inkuber membranen O / N; I sakte omrøring.
  9. Vask membranen 5 ganger i 5 min i rask omrøring med 1 x TBS - Tween 0,1% for å fjerne overdreven antistoff.
  10. Legg den aktuelle sekundære antistoff i passende buffer (tilsvarende til antistoffet dataarket fra produsent) og inkuber membranen for en time i sakte omrøring.
  11. Vask membranen 5 ganger i 5 min i rask omrøring med 1 x TBS - Tween 0,1% for å fjerne overdreven antistoff.
  12. Oppdage den valgte protein ved chemiluminescence analyse 11.

3. Exosome Karakterisering av TEM-analyse

Merk: For å visualisere de isolerte exosomes, ble TEM (transmisjonselektronmikroskopi) analyse utført.

  1. Place ~ 10 mikrogram (tidligere kvantifisert ved Bradford assay) for prøve av intakte exosomes resuspendert i 1x PBS på en parafilm og satt på prøven slippe en formvar karbon belagt nikkel rutenett for en time.
    2. <li> Vask rutenettet 3 ganger ved å plassere den på tre 40 mL 1x PBS dråper.
  2. Vask rutenettet 5 ganger ved å plassere den på fem 30 ul ultravanndråper.
  3. Fix prøven ved å legge til et fall på 2,5% glutaraldehyd (OBS: kjemisk fare) i 10 min.
  4. Vask rutenettet 3 ganger ved å plassere den på tre 40 mL 1x PBS dråper.
  5. Tilsett en dråpe 2% uranyl acetat (OBS: kjemiske farer) og sette rutenettet på toppen av det i 15 minutter for å kontrast prøven.
  6. Embed prøven på et fall på 0,13% metylcellulose (OBS: kjemiske farer) og 0,4% uranyl acetat og inkuber rutenettet på toppen av fallet i 10 min.
  7. Fjern forsiktig flytende overflødig med et absorberende papir og tørke rutenettet i 5 min med den belagte siden opp.
  8. Undersøk rutenettet ved transmisjonselektronmikroskop 12.

4. Exosomal RNA Utvinning og Kvantifisering

Merk: Vi bestemte oss for å perform total RNA ekstraksjon fra exosomal prøver ved hjelp av et kommersielt kit, i henhold til produsentens protokoll: (OBS: kjemiske farer, gjennomgå produsentens protokoll og retningslinjer).

  1. Etter resuspensjon av exosome pellet i 346,5 mL av lysis buffer, tilsett 3,5 mL av β-Mercaptoethanol (OBS: kjemiske farer) og virvle kraftig; dette avsnittet er obligatorisk for å ødelegge lipid membraner.
  2. Legg lysatet til vaskekolonnen i et oppsamlingsrør og sentrifuger ved 11 000 x g i 1 min. Etter sentrifugering kasseres kolonnen og overføre filtratet til et nytt 1,5 ml RNase-frie rør.
  3. Legg 350 mL av 70% etanol (OBS: kjemiske farer) og bland ved virvling i 5 sek.
  4. Last lysatet i den oppløsende kolonne og sentrifuger i 30 sekunder ved 8000 x g. Etter sentrifugering forkaste gjennomstrømning og overføre kolonnen til en ny samling rør.
  5. Last 350 mL av avsalting buffer og sentrifuger ved 11 000 x g i 1 min. Etter sentrifugering forkaste gjennomstrømning og returnere kolonne i samme samling rør.
  6. Legg 95 ul av DNase I reaksjonsblanding (10 ul av rekonstituert DNase I + 90 pl buffer DNase, for hver prøve) på silika-membran av kolonnen og inkuber ved romtemperatur i 15 min ved RT. (OBS: kjemisk fare)
  7. Tilsett 200 ul vaskebuffer (OBS: kjemisk fare) til kolonnen og sentrifuger ved 11000 x g i 1 min. Plasser kolonne inn i en ny samling rør.
  8. Legg 600 ul vaskebuffer til kolonnen og sentrifuger ved 11 000 x g i 1 min. Etter sentrifugering forkaste gjennomstrømning og plasser kolonne i samme samling rør.
  9. Tilsett 250 ul vaskebuffer til kolonnen og sentrifuger ved 11 000 x g i 2 min. Plasser kolonne inn i en 1,5 ml RNase-frie rør.
  10. Eluer RNA i 40 ul RNase-fritt vann og sentrifuger ved 11000 5; g i 1 minutt, for å ha en høy RNA-konsentrasjon i dette lite volum.
  11. Umiddelbart eluert RNA på is for å hindre mulig degradering eller oppbevar ved -80 ° C.
  12. Kvantifisere RNA innhold. Merk: Her ble RNA kvantiseringen utføres ved å bruke 1 pl av prøven gjennom spektrofotometer.

5. Retrotrascription av Exosomal miRNAs

Merk: På grunn av den beskrevne begrenset mengde av miRNAs innhold i exosomes, ble det besluttet å utføre revers transkripsjon av utvalgte mirnas gjennom et kommersielt kit med en individuell analyse for hver miRNA, i henhold til produsentens protokoll. For hver prøve ble 8 mirnas korrelert til NSCLC status valgt (MIR-30b, MIR-30c, MIR-103; MIR-122, MIR-195, MIR-203, MIR-221, MIR-222, og MIR-1228- 3p som endogen kontroll).

  1. Klargjør Revers transkripsjon mester mix (RT mix). For hver reaksjon fremstille 7 ul av RT blanding, som beskrevet ihttps://www.jove.com/files/ftp_upload/53900/Table1.xlsx">Table 1 (klikk her for å laste ned) (OBS: kjemisk fare).
    Merk: I dette forsøk ble ni forskjellige RT blanding fremstilt for hver prøve.
  2. Bland forsiktig og oppbevar RT mix på is. Legg 7 mL av RT-blanding pr reaksjonsrør.
  3. Tilsett 5 ul prøve RNA (10 ug av total-RNA) per reaksjonsrøret og bland forsiktig.
  4. Legg 3 mL av de 5x omvendt transkripsjon primere (OBS: kjemisk fare) fra hver analyse satt inn i tilsvarende reaksjonsrøret.
  5. Bland langsomt, lukker røret og inkuber på is i 5 min.
  6. Last inn i reaksjonsrøret inn i thermal cycler og starte revers transkripsjonsreaksjon ved å bruke de følgende parameterverdier (hold ved 16 ° C i 30 min, hold ved 42 ° C i 30 min, hold ved 85 ° C i 5 minutter, hold ∞ 4 ° C).

6. Real Time PCR-analyse av Exosomal miRNAs

Merk: Denne analysen varutføres ved hjelp av et kommersielt kit for Real Time PCR (qPCR), med tre biologiske og tekniske replikater per prøve.

  1. For hver reaksjon, forberede 17,67 mL av Real Time PCR mix (10 mL av PCR Master Mix + 7,67 mL av nukleasefritt vann), bland det og lagt på is. (OBS: kjemisk fare)
  2. Tilsett 1 mL, for hver PCR-rør, av 20x qPCR primere (OBS: kjemisk fare).
  3. Plasser 18,67 mL av qPCR blandingen i hver brønn-plate.
  4. Legg 1,33 mL av revers transkripsjon produktet inn korrespondent godt plate.
  5. Lukk plate og spinne det (300 gx 5 sek).
  6. Sett platen i en Real Time PCR-systemet og starte kjøringen ved hjelp av følgende PCR betingelser: HOLD ved 95 ° C i 10 min; 40 sykluser med 15 sek ved 95 ° C og 60 sek ved 60 ° C. Fremgangsmåte og normalisere data i henhold til formelen 2 - ΔΔct 13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Totalt 12 plasma fra NSCLC pasienter og 6 friske kontroller ble behandlet med kommersielle kit for exosome isolasjon fra plasma. Hver prøve ble behandlet ved Western blot-analyse for å vurdere den exosomal markører ALIX (96 kDa) og TSG101 (43 kDa). Et eksempel på disse resultater er vist for 3 prøver i figur 1, noe som indikerer at exosome isolert fra plasmaprøver er mulig med denne protokollen.

For å biophysically karakter exosomal prøvene, ble TEM analyse utført. TEM har vist at nanovesicles som oppnås ved denne isolasjonsprotokoll har en størrelse gjennomsnitt i området fra exosomal størrelse, 40 - 100 nm (figur 2).

Etter exosome isolering og karakterisering, undersøkte vi deres mirnas innhold. Vi valgte 8 konkrete mirnas, kjent for å være deregulated i NSCLC. Som intern kontroll, brukte vi MIR-1228 som tidligere har vært godkjent som en stabil og effektiv endogen kontroll i ulike tumortyper 10. Ifølge disse resultatene MIR-1228 er en pålitelig og stabil endogen kontroll. Når uttrykket nivået til 8 valgt miRNA mellom friske donorer og lungekreftpasienter ble sammenlignet, ble det funnet at disse mirnas er sterkt deregulert i de analyserte kliniske prøver. I figur 3 uttrykket mønster av de 8 utvalgte mirnas vises på en logaritmisk skala for de 12 analyserte prøvene (PAD1-12). Ikke alle mirnas var detekterbare i hver prøve, og på grunn av den begrensede mengden av prøver vi ikke kan utføre statistisk analyse.

Figur 1
Figur 1. Western blot-analyse i 3 Exosomal Prøver for ALIX og TSG101. Western Blot viser tilstedeværelse avde velkjente exosomal markører, Alix og TSG-101, i de analyserte prøvene. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2. TEM Analyse av Exosomal Prøver Disse resultatene viser at de isolerte nanovesicles har en gjennomsnittlig diameter mellom 40 -.. 100 nm, inne i exosomal utvalg Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3. Uttrykk Profil 8 Utvalgte miRNAs i Exosomal Samples. Disse dataene, som er vist i logaritmisk skala, viser at through denne protokollen er mulig å se opp- eller nedregulering av utvalgte exosomal mirnas fra kliniske NSCLC plasma pasienter (PAD1-12), som fører til potensielle funn av exosomal biomarkører av NSCLC. Dataene er vist som fold uttrykk i forhold til friske kontroller. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Med denne kombinerte protokollen var det mulig å utføre en exosomal miRNA analyse fra plasma av pasienter med NSCLC. Disse dataene kan gjenspeile sykdomsstatus, men dette må bekreftes av videre studier.

Protokollen som brukes i denne artikkelen var basert på et kommersielt kit for exosome isolasjon. Årsaken var at de andre kjente isolasjonsprosedyrer (f.eks., Tetthet ultrasentrifugering) krever mer manuelle rutiner, som fører til en begrenset standardisering. Ikke desto mindre er en av begrensningene av denne protokoll som i sammenligning med densitetsgradient-ultrasentrifugering for exosome isolasjon, forblir densitetsgradient-ultrasentrifugering en meget nyttig teknikk i exosome isolert som utnytter den spesifikke tetthet av exosomes (mellom 1,13 til 1,19 g / ml). En potensiell modifikasjon er en blanding av både prosedyrer, som kan være en gullstandard på dette feltet.

Muligheten for å behandle klinisk samples med RNase behandling har gitt oss rene prøver uten forurensning av sirkulerende miRNAs. Men tilstedeværelsen av RNase enzymer i prøvene kunne påvirke mengden av exosomal miRNA etter exosome lyse. Av denne grunn valgte vi en kit med Proteinase K-behandling, for å fjerne sirkulerende forurensende proteiner og å degradere RNase enzymer.

Etter standardisering av alle isolasjonsprosedyrer, kan fremtiden karakterisering og miRNA analyse av disse data danner et nyttig verktøy for å oppdage biomarkører i en ikke-invasiv måte under innledende diagnose og oppfølging.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Total exosome isolation kit (from plasma)  Invitrogen 4484450 Use Proteinase K treatment
Ribonuclease A Sigma-Aldrich R4875-100MG
ALIX Antibody (3A9) Cell Signaling 2171S
TSG-101 Antibody (C-2) SantaCruz Biotecnology SC-7964 
Anti-Mouse HRP 1 ml   Cell Signaling 7076P2
RNAspin Illustra mini kit 50 GE HealthCare 25-0500-71
Taqman MicroRNA Reverse Transcription Kit Life Technologies 4366596
hsa-miR-1228-3p TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002919
hsa-miR-30b TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000602
hsa-miR-30c TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000419
hsa-miR-122 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002245
hsa-miR-195 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000494
hsa-miR-203 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000507
hsa-miR-103 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000439
hsa-miR-221 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000524
hsa-miR-222 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002276
TaqMan Universal Master Mix II, no UNG Life Technologies 4440043

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Jemal, A., Siegel, R., Ward, E., Hao, Y., Xu, J., Thun, M. J. Cancer statistics. Cancer J Clin. 59, 225-249 (2009).
  2. Rolfo, C., et al. Novel therapeutic strategies for patients with NSCLC that do not respond to treatment with EGFR inhibitors. Cancer Treat Rev. 40, 990-1004 (2014).
  3. Rolfo, C., et al. Liquid biopsies in lung cancer: the new ambrosia of researchers. Biochim Biophys Acta. 1846, 539-546 (2014).
  4. Thery, C., Zitvogel, L., Amigorena, S. Exosomes: composition, biogenesis and function. Nat Rev Immunol. 2, 569-579 (2002).
  5. Fontana, S., Saieva, L., Taverna, S., Alessandro, R. Contribution of proteomics to understanding the role of tumor-derived exosomes in cancer progression: state of the art and new perspectives. Proteomics. 13 (10-11), 1581-1594 (2013).
  6. Taverna, S., et al. Exosomal shuttling of miR-126 in endothelial cells modulates adhesive and migratory abilities of chronic myelogenous leukemia cells. Mol Cancer. 11, (2014).
  7. Taverna, S., et al. Curcumin inhibits in vitro and in vivo chronic myelogenous leukemia cells growth: a possible role for exosomal disposal of miR-21. Oncotarget. , (2015).
  8. Garofalo, M., et al. MicroRNA signatures of TRAIL resistance in human non-small cell lung cancer. Oncogene. 27, 3845-3855 (2008).
  9. Rabinowits, G., Gerçel-Taylor, C., Day, J. M., Taylor, D. D., Kloecker, G. H. Exosomal microRNA: a diagnostic marker for lung cancer. Clin Lung Cancer. 10 (1), 42-46 (2009).
  10. Hu, J., et al. Human miR-1228 as a stable endogenous control for the quantification of circulating microRNAs in cancer patients. Int J Cancer. 135 (5), 1187-1194 (2014).
  11. Alessandro, R., et al. Effects of carboxyamidotriazole on in vitro models of imatinib-resistant chronic myeloid leukemia. J Cell Physiol. 215, 111-121 (2008).
  12. Zhao, Y., et al. Exosomes Derived from Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells Relieve Acute Myocardial Ischemic Injury. Stem Cells Int. 2015, (2015).
  13. Yoko, T., et al. Up-regulation of MDR'1and induction of doxorubicin resistance by histone deacetylase inhibitor depsipeptide (FK228) and ATRA in acute promyelocytic leukemia cells. Blood. 107 (4), 1546-1554 (2006).

Tags

Medisin Exosomes mirnas NSCLC Flytende biopsi Krepsen Biomarker
Exosomal miRNA Analyse på ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) pasient Plasma Gjennom qPCR: En Mulighets Flytende Biopsi Tool
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Giallombardo, M., Chacártegui… More

Giallombardo, M., Chacártegui Borrás, J., Castiglia, M., Van Der Steen, N., Mertens, I., Pauwels, P., Peeters, M., Rolfo, C. Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool. J. Vis. Exp. (111), e53900, doi:10.3791/53900 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter